張綱，胡雪嬌，姜國(guó)志，劉艷麗，巴曉雨

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司 河北省中藥注射劑工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 051430)

·基礎(chǔ)研究·

液質(zhì)聯(lián)用分析黃芪注射液中的有機(jī)小分子化學(xué)成分

張綱*，胡雪嬌，姜國(guó)志，劉艷麗，巴曉雨

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司 河北省中藥注射劑工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 051430)

目的：對(duì)黃芪注射液中的黃酮類、異黃酮類、皂苷類成分等有機(jī)小分子化學(xué)成分進(jìn)行定性研究。方法：采用高效液相色譜-電噴霧線性離子阱質(zhì)譜(HPLC-ESI/MS)檢測(cè)技術(shù)對(duì)黃芪注射液中的成分進(jìn)行分析。結(jié)果：黃芪注射液中的18種成分得以鑒定結(jié)構(gòu)，其中紫云英苷等6種成分此前未見(jiàn)報(bào)道。結(jié)論：明確黃芪注射液中的化學(xué)成分為其物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了依據(jù)。

黃芪注射液；有機(jī)小分子；定性研究；液質(zhì)聯(lián)用

黃芪是多年生草本豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，系傳統(tǒng)補(bǔ)氣中藥，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、托毒排膿、斂瘡生肌功能[1]。黃芪注射液是黃芪經(jīng)提取濃縮制成的滅菌水溶液，臨床上用于心氣虛損、血脈瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虛濕困之肝炎[2]。

關(guān)于黃芪中的化學(xué)成分，國(guó)內(nèi)外同仁已進(jìn)行了較多的研究，但對(duì)黃芪注射液中的成分尤其是小分子化學(xué)成分的研究報(bào)道不多[3]。我們用HPLC-ESI/MS檢測(cè)技術(shù)對(duì)黃芪注射液中的有機(jī)小分子化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定，研究發(fā)現(xiàn)，除了已經(jīng)公知的成分外，黃芪注射液中還有紫云英苷、異鼠李素、異鼠李素-3-O-β-龍膽二糖苷、(3R)-8，2′-二羥基-7，4′-二甲氧基異黃烷、美迪紫檀素、鵝掌楸樹(shù)脂酚B等化學(xué)成分。對(duì)黃芪注射液中化學(xué)成分的研究不僅有利于提高產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而且對(duì)其物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理活性研究也具有重要意義。

1 儀器與樣品

Accela高效液相色譜儀(PDA 檢測(cè)器)，Hyper Gold C18色譜柱(50 mm×2.1 mm，1.9 μm)，Thermo LTQ XL質(zhì)譜儀，INOPAK C18固相萃取柱(SPE)。

黃芪注射液由神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供，規(guī)格：10 mL，批號(hào)：11062131。

2 方法

2.1 樣品處理

取本品1支，經(jīng)固相萃取柱萃取，加2 mL甲醇淋洗，再加2 mL水淋洗，使SPE柱活化，加樣1 mL注射液，棄去濾液，加1 mL蒸餾水，棄去濾液，加1 mL甲醇，濾液進(jìn)收集容器，重復(fù)上述萃取過(guò)程。精密吸取過(guò)濾后的樣品2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 液相條件

流動(dòng)相：甲醇-0.1%甲酸水，梯度洗脫程序見(jiàn)表1；流速：0.25 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。PDA掃描波長(zhǎng)范圍：200～400 nm；三通道檢測(cè)：214 nm(Channel A)，254 nm(Channel B)，280 nm(Channel C)。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧電離，正離子模式(噴霧電壓：4.5 kV)、負(fù)離子模式(噴霧電壓：3.5 kV)；鞘氣壓力：30 arb；輔助氣壓力：10 arb；離子傳輸管溫度：300 ℃；掃描模式：全掃描和多級(jí)掃描(1～4級(jí))；掃描范圍：m/z 100～1500。

3 結(jié)果

利用LC/MS技術(shù)對(duì)黃芪注射液的化學(xué)成分進(jìn)行研究，分別采用正、負(fù)離子源ESI檢測(cè)，初步分析鑒定出18種化學(xué)成分，以黃酮、異黃酮和皂苷類成分居多，正、負(fù)離子源的HPLC-MS總離子流圖見(jiàn)圖1和圖2，鑒定結(jié)果見(jiàn)表2，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3。圖4～9分別給出了紫云英苷、異鼠李素等6種新鑒定的化學(xué)成分的MS圖，圖10～13給出了部分代表性成分的裂解途徑。

圖1 正離子源HPLC-MS總離子流圖

圖2 負(fù)離子源HPLC-MS總離子流圖

表2 黃芪注射液中推測(cè)鑒定的18種化學(xué)成分

4 討論

黃芪注射液為蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根經(jīng)提取制成的滅菌水溶液，具有益氣養(yǎng)元，扶正祛邪，養(yǎng)心通脈，健脾利濕的功能。臨床上適用于心氣虛損、血脈瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虛濕困之肝炎?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有增強(qiáng)心肌收縮力、擴(kuò)張血管、抗病毒、增加免疫功能等特點(diǎn)，由于其療效確切、不良反應(yīng)小，在臨床上應(yīng)用日益廣泛[4]。

圖3 黃芪注射液中推測(cè)鑒定的18種成分化學(xué)結(jié)構(gòu)

注：A.樣品；B.目標(biāo)化合物；下同。圖4 紫云英苷MS(黃酮類)圖

圖5 異鼠李素MS(黃酮類)圖

圖6 異鼠李素-3-O-β-龍膽二糖苷MS(黃酮類)圖

圖7 (3R)-8，2′-二羥基-7，4′-二甲氧基異黃烷MS(黃酮烷類)圖

圖8 美迪紫檀素MS(紫檀烷類黃酮)圖

圖9 鵝掌楸樹(shù)脂酚B MS(木脂素類)圖

圖10 紫云英苷的質(zhì)譜裂解途徑

圖11 (3R)-8，2′-二羥基-7，4′-二甲氧基異黃烷的質(zhì)譜裂解途徑

圖12 美迪紫檀素的質(zhì)譜裂解途徑

圖13 鵝掌楸樹(shù)脂酚B的質(zhì)譜裂解途徑

黃芪注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行了質(zhì)量控制[5]，其余成分尚不明確，這在一定程度上也限制了黃芪注射液的臨床應(yīng)用。

在對(duì)黃芪注射液的HPLC-ESI/MS分析研究中，共鑒定出18種小分子化學(xué)成分，其中紫云英苷、美迪紫檀素、鵝掌楸樹(shù)脂酚B等6種成分均系首次報(bào)道。明確黃芪注射液中的化學(xué)組成，不僅有利于提升產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而且對(duì)于進(jìn)一步闡明黃芪注射液的藥理作用機(jī)理也具有重要的指導(dǎo)意義。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：302-303.

[2] 竇輝，付鐵軍，張帆，等.黃芪注射液的化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2002，14(6)：14-17

[3] 李鳳艷.黃芪注射液的藥理及臨床應(yīng)用[J].黑龍江中醫(yī)藥，2004(2)：59-60.

[4] 胡勝平，焦建民，李偉華，等.黃芪注射液在臨床治療中的新應(yīng)用[J].中醫(yī)臨床研究，2010，2(11)：105-107.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).黃芪注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2002，3(1)：32-34.

IdentificationofSmallMolecularOrganicCompoundsofAstragalusInjectionbyLC/MS

ZHANGGang，HUXuejiao，JIANGGuozhi，LIUYanli，BAXiaoyu

(ShinewayPharmaceuticalGroupCo.，Ltd.，HebeiProvincialEngineeringTechnologyResearchCenterofTraditionalChineseMedicineInjections，Shijiazhuang051430，China)

Objective：Small molecular organic compounds in Astragalus injection such as flavonoids，isoflavonoids and astragalosides were identified by LC/MS.Methods：The chemical constituents of Astragalus injection were analyzed by Liquid chromatography-electrospray-ionization mass spectrometry(HPLC-ESI/MS).Results：18 compounds from Astragalus injection were elucidated，and six compounds including astragalin were firstly reported.Conclusion：This study laid a basis for elucidation of biologically active substancesin Astragalus injection。

Astragalus injection；small molecular organic compounds；identification；LC/MS

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.004

2015-04-30)

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張綱，博士，研究方向：中藥新藥；Tel：(0316)5759866-8665，Email：shyflysky@126.com