陳國(guó)慶， 王興新， 訾　聃

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 婦產(chǎn)科， 貴州 貴陽(yáng)　550004； 2.威寧縣人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科， 貴州 威寧　553100 )

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趨化因子受體4在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及意義*

陳國(guó)慶1，2**， 王興新2， 訾聃1***

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 婦產(chǎn)科， 貴州 貴陽(yáng)550004； 2.威寧縣人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科， 貴州 威寧553100 )

目的： 觀察卵巢上皮性癌(EOC)中趨化因子受體4(CXCR4)、細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)的表達(dá)及其與臨床病理特征間的關(guān)系。方法： 應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)40例卵巢上皮性癌(EOC組)組織和10例卵巢良性腫瘤組織(對(duì)照組)中CXCR4陽(yáng)性表達(dá)率，同時(shí)檢測(cè)EOC患者癌組織中Cyclin D1、EGFR和Ki-67表達(dá)水平，分析CXCR4、Cyclin D1、EGFR及Ki-67在EOC患者癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)、是否有淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期的關(guān)系，采用Spearman秩相關(guān)分析EOC患者癌組織中CXCR4表達(dá)與EGFR、Cyclin D1及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果： 對(duì)照組中CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率(20%)低于EOC組(57.50%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；EOC患者癌組織中的CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率與EOC患者臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與年齡無(wú)關(guān)(P>0.05)；EOC患者中Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)；EGFR與Ki-67的過(guò)表達(dá)率與臨床分期有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)；EOC患者癌組織中CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)與Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)、EGFR的過(guò)表達(dá)及Ki-67的過(guò)表達(dá)之間呈現(xiàn)正相關(guān)性(r=0.535、0.506、0.490，P<0.05)。結(jié)論： CXCR4、Cyclin D1、EGFR和Ki-67的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EOC的發(fā)生、預(yù)后判斷、治療選擇有一定的參考意義。

卵巢腫瘤,上皮性； 趨化因子受體4； 細(xì)胞周期蛋白D1； 表皮生長(zhǎng)因子受體； 免疫組織化學(xué)； 染色法

卵巢癌的發(fā)病率居?jì)D科腫瘤第3位，病死率居第1位，而卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer，EOC)在卵巢癌中所占比例約為85%～90%[1-2]。目前，卵巢癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，可能是多因子共同作用的結(jié)果, 有研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子受體4(chemokine receptor type 4,CXCR4)在卵巢癌中高表達(dá)，可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲和腫瘤血管生成；細(xì)胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成，還能抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡；表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)異?？蓪?dǎo)致卵巢出現(xiàn)惡變，而增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，Ki-67)被認(rèn)為是一種增殖細(xì)胞核抗原，在多種惡性腫瘤中均有表達(dá)及過(guò)表達(dá)，且Cyclin D1及EGFR在EOC中的表達(dá)與臨床分期及細(xì)胞分化程度有關(guān)[3-6]，本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)EOC 組織中CXCR4、、Cyclin D1、EGFR及Ki-67表達(dá)，探討不同病理學(xué)參數(shù)下上述指標(biāo)的變化及相關(guān)性，報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料與試劑

2008年2月～2012年12月經(jīng)手術(shù)確診的EOC患者40例，其中黏液性腺癌7例，漿液性腺癌33例，取其手術(shù)蠟塊標(biāo)本作為觀察組，另選取同期手術(shù)的卵巢良性腫瘤10例為對(duì)照組，其中漿液性囊腺瘤3例，黏液性囊腺瘤7例。兩組患者臨床資料完整，術(shù)前未接受過(guò)放、化療及免疫治療，手術(shù)標(biāo)本均送至病理科確診。觀察組16～83歲，平均(49.37±10.25)歲；組織學(xué)分級(jí)：低分化12例，中分化24例，高分化4例；FIGO(2009年)分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期6例，Ⅲ期18例，Ⅳ期2例，7例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；對(duì)照組17～69歲，平均(48.92±10.31)歲。兔抗人CXCR4多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物公司，兔抗人EGFR單克隆抗體購(gòu)自上?；蚬荆?Cyclin D1兔抗人單克隆抗體、Ki-67鼠抗人單克隆抗體及SP免疫組化相關(guān)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

采用SP免疫組織化學(xué)法，將選好的蠟塊，3 μm連續(xù)切片，每例切4張，取其中一張做蘇木素-伊紅(HE)染色，其余做免疫組織化學(xué)染色。一抗工作濃度根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整，CXCR4為1∶150，Ki-67、Cyclin Dl及EGFR均為1∶100，對(duì)照組選用卵巢良性腫瘤。免疫組化染色程序嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明方法染色，所有切片染色均在相同條件下進(jìn)行，每批染色均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照(試劑公司提供)和陰性對(duì)照(PBS代替一抗)。光學(xué)顯微鏡觀察組織切片標(biāo)本，兩位病理科專(zhuān)家以雙盲法認(rèn)定結(jié)果。CXCR4、Cyclin D1、EGFR及Ki-67均以出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，CXCR4表達(dá)于細(xì)胞漿內(nèi)；EGFR表達(dá)于細(xì)胞膜和胞漿，以包膜明顯；Ki-67和Cyclin Dl均表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)。結(jié)果判斷：根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分，無(wú)染色為0分，呈現(xiàn)淡黃色顆粒、明顯高于背景為1分，呈現(xiàn)淺棕黃色顆粒為2分，出現(xiàn)大量深棕黃色顆粒為3分；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分，每片隨機(jī)觀察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例的評(píng)分相加之和<2為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)；弱陽(yáng)、中陽(yáng)、強(qiáng)陽(yáng)均判為陽(yáng)性，以中度陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性為過(guò)表達(dá)。

1.3觀察指標(biāo)

比較CXCR4在對(duì)照組和EOC組的陽(yáng)性表達(dá)率，分析CXCR4、Cyclin D1、EGFR及Ki-67在EOC患者癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)、是否有淋巴轉(zhuǎn)移及TNM臨床分期的關(guān)系，采用Spearman秩相關(guān)分析EOC患者癌組織中CXCR4表達(dá)與EGFR、Cyclin D1及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)，以率(%)表示，兩樣本率的比較采用四格表資料的χ2檢驗(yàn)，不滿足χ2檢驗(yàn)條件時(shí)采用連續(xù)校正公式或FISH精確概率檢驗(yàn)法。相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析，以相關(guān)系數(shù)(r)判斷相關(guān)性，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1CXCR4表達(dá)

CXCR4在對(duì)照組中呈陽(yáng)性表達(dá)率為20%，觀察組為57.50%，兩組陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2EOC癌組織中CXCR4、EGFR、Cyclin D1及Ki-67表達(dá)

EOC患者癌組織中的CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率與EOC患者臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與年齡無(wú)關(guān)(P>0.05)；EOC患者中Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)；EGFR與Ki-67的過(guò)表達(dá)率與臨床分期有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)。 見(jiàn)圖1及表1。

注：A、B為Cyclin D1，C、D為Ki-67，E、F為CXCR4，G、H為EGFR；A、C、E、G為觀察組中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，B、D、F、H為對(duì)照組中陰性表達(dá)圖1　EOC患者癌組織中CXCR4、Cyclin D1、EGFR和Ki-67的表達(dá)(SP,×20)Fig.1　The expression of CXCR4, Cyclin D1, EGFR and Ki-67 in benign and malignant epithelial ovarian cancer

指標(biāo)CXCR4陽(yáng)性陽(yáng)性(n)χ2PCyclinD1陽(yáng)性陽(yáng)性(n)χ2PEGFR過(guò)表達(dá)過(guò)表達(dá)(n)χ2PKi-67過(guò)表達(dá)過(guò)表達(dá)(n)χ2P年齡(歲) ≤45132.90.08142.351.30150.180.68140.100.85 >4510121615組織學(xué)分級(jí) 1+2128.20.01147.140.01200.980.32181.940.16 311121111淋巴轉(zhuǎn)移 有74.30.0460.690.4171.150.2871.760.18 無(wú)16202422TNM分期 Ⅰ+Ⅱ612.30.0097.030.01125.160.02915.120.00 Ⅲ+Ⅳ17171920

2.3EOC患者癌組織中CXCR4表達(dá)與Cyclin D1、EGFR和Ki-67表達(dá)相關(guān)性

EOC患者癌組織中CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)與Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)、EGFR的過(guò)表達(dá)及Ki-67的過(guò)表達(dá)之間呈現(xiàn)正相關(guān)性(r=0.535、0.5060.490，P<0.05)。

3　討論

EOC是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤，因其轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)致患者病情不能控制，死亡率高，5年生存率僅30%。目前認(rèn)為細(xì)胞增殖失控和轉(zhuǎn)移是EOC發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)。CXCR4在多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，當(dāng)與其配體CXCL12結(jié)合后形成CXCR4-CXCL12軸，此軸在腫瘤細(xì)胞的趨化及粘附、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[2]。CXCR4在EOC中高表達(dá)，可促進(jìn)EOC細(xì)胞增殖、侵襲和腫瘤血管生成[3]。 燕霞等[4]研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，認(rèn)為CXCR4在促進(jìn)淋巴轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)CXCR4在EOC中的表達(dá)顯著高于卵巢良性腫瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在EOC中，CXCR4表達(dá)與臨床分期、組織分級(jí)及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，分期越晚，組織分級(jí)越高及有淋巴轉(zhuǎn)移者CXCR4陽(yáng)性表達(dá)越高。與劉靜等[5]研究相符，提示：CXCR4在EOC形成、增殖、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中有著重要作用。 Cyclin D1是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子，可促進(jìn)G1期向S期轉(zhuǎn)化，加速細(xì)胞增殖，誘發(fā)腫瘤。其過(guò)表達(dá)可使EOC細(xì)胞增殖形成腫瘤。EGFR屬于酪氨酸蛋白激酶，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成，還能抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡[6]。大量研究顯示：EGFR異?？蓪?dǎo)致卵巢出現(xiàn)惡變。Ki-67被認(rèn)為是一種增殖細(xì)胞核抗原，在多種惡性腫瘤中均有表達(dá)及過(guò)表達(dá)。宋振飛等[7]研究發(fā)現(xiàn)：Cyclin D1及EGFR在EOC中的表達(dá)與臨床分期及細(xì)胞分化程度有關(guān) ，認(rèn)為兩者在EOC中過(guò)表達(dá)，并在一定程度上反映其惡性程度及預(yù)后狀況。發(fā)現(xiàn)：EGFR和Ki-67表達(dá)在EOC的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，認(rèn)為兩者在EOC的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用 。本研究顯示：Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)率在臨床分期、組織學(xué)分級(jí)方面差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；EGFR與Ki-67的過(guò)表達(dá)率和臨床分期有關(guān)，而與年齡、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān),與楊越等[8]研究結(jié)果部分相符，提示Cyclin D1、EGFR和Ki-67在EOC的形成和發(fā)展中起著重要作用，但本研究認(rèn)為EGFR與Ki-67的過(guò)表達(dá)率僅與臨床分期有關(guān)，與上述研究有差異，可能與樣本量小以及判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致有關(guān)。有研究報(bào)道，CXCR4和EGFR有關(guān)聯(lián),兩者相互作用可引起細(xì)胞內(nèi)的ERK1/2和Akt通路啟動(dòng)從而引起EOC細(xì)胞的增殖[9]。而關(guān)于CXCR4與CyclinD1及Ki-67在EOC中表達(dá)的相關(guān)性未見(jiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，在EOC患者癌組織中CXCR4表達(dá)和CyclinD1、EGFR及Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)性，可能機(jī)制為CyclinD1、EGFR及Ki-67上調(diào)CXCR4表達(dá)共同促進(jìn)了EOC的增殖、浸潤(rùn)及淋巴轉(zhuǎn)移。

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(2016-06-25收稿，2016-08-31修回)

中文編輯： 劉平； 英文編輯： 劉華

Expression and Significance of CXCR4 in Epithelial Ovarian Cancer

CHEN Guoqing1,2, WANG Xingxin2, ZI Dan1

(1.DepartmentofGynaecologyandObstetrics,theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.DepartmentofGynaecologyandObstetrics,thePeople'sHospitalofWeiningCounty,Weining553100,Guizhou,China)

Objective: To investigate the expression of CXCR4, Cyclin D1, EGFR and Ki-67 in epithelial ovarian cancer (EOC) and its relationship with clinical pathological features. Methods: 40 cases of patients with epithelial ovarian cancer (observation group) and 10 cases of patients with ovarian benign tumor (control group) were tested for the expression of CXCR4, Cyclin D1, EGFR and Ki-67 protein by SP immunohistochemical assay kit. Combined with the medical record data, the relationship between the 4 cytokines and the clinical pathological characteristics was analyzed. Meanwhile, the relationship between CXCR4 and the other 3 cytokines was also analyzed. Results: The positive expression rate of CXCR4 in the observation group were significantly higher than those in the control group (P<0.05). There were statistically significant differences in the positive expression rate of CXCR4 under different pathology parameters such as clinical stage, histological grade and lymph node metastasis (P<0.05). There were statistically significant differences in the positive expression rate of Cyclin D1 under different pathology parameters such as clinical stage, histological grade and lymph node metastasis(P<0.05). The over expression rates of Ki-67 and EGFR was significantly related to clinical stage (P<0.05). CXCR4 were positively correlated with the expression of Cyclin D1, EGFR and Ki-67 in epithelial ovarian cancer(P<0.05). Conclusion: The joint detection of CXCR4, Cyclin D1, EGFR and Ki-67 may have important reference significance in prognosis of EOC and the choice of treatment of EOC.

ovarian tumor epithelial; chemokine receptor type 4; cell cycle protein D1; epidermal growth factor receptor; immunohistochemistry; staining method

貴州省科技廳聯(lián)合基金[黔科合LG 字(2011) 032 號(hào)]

E-mail:2816497455@qq.com

R737.31

A

1000-2707(2016)09-1071-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.09.019

**貴州醫(yī)科大學(xué)2015級(jí)同等學(xué)歷碩士研究生，現(xiàn)工作于威寧縣人民醫(yī)院

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網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-09-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160913.2240.014.html