揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司（102206）薛麗芳

消旋卡多曲片由消旋卡多曲、乳糖、羧甲淀粉鈉、硬脂酸鎂、羥丙甲纖維素、阿司帕坦、70%乙醇組成。其中消旋卡多曲為主要成分，具有治療急性腹瀉的功效。

鑒于藥典中并無(wú)消旋卡多曲片的檢驗(yàn)方法，本文建立了一種高效液相色譜法測(cè)定片劑中消旋卡多曲的含量，保證該片劑的臨床療效。此方法操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確，線性范圍寬，溶液穩(wěn)定性良好，片劑中的輔料不干擾測(cè)定。

1 儀器與試劑、試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司，Agilent1260），電子分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，XS205型]，pH計(jì)[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，SevenEasy型]。

1.2 試劑、試藥 醋酸、醋酸銨（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），甲醇、乙腈[色譜純，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司]，水為超純水。

消旋卡多曲對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100682-201502，含量99.9%），消旋卡多曲片（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司，規(guī)格30mg，批號(hào)15010601、15010602、15010701）。

2 方法與結(jié)果[1][2]

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈-0.02mol/L醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0）（65∶35）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；柱溫30℃；流速1.0mL/min；進(jìn)樣體積20μL。

附圖 專屬性圖譜。A：陰性空白溶液 B：空白溶液 C：供試品溶液 D：對(duì)照品溶液

2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取消旋卡多曲對(duì)照品約10mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制 取莫尼卡（消旋卡多曲片）20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含消旋卡多曲0.1mg的溶液，作為供試品溶液。

2.4 陰性模擬制劑的制備 按照消旋卡多曲片的處方工藝組成，制備不含消旋卡多曲的陰性模擬制劑。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在高效液相色譜法中理論塔板數(shù)是衡量色譜柱效能的參數(shù)之一，用于定量表示色譜柱的分離效率，其數(shù)值越大色譜柱的柱效越高。本次實(shí)驗(yàn)以消旋卡多曲的理論塔板數(shù)為指標(biāo)，考察了色譜柱的效能。具體方法為精密量取對(duì)照品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)得消旋卡多曲的理論塔板數(shù)為8656。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性試驗(yàn) 取陰性模擬制劑按照供試品溶液配制方法配制陰性空白溶液，取陰性空白溶液、空白溶液（流動(dòng)相）、對(duì)照品溶液、供試品溶液各20μL，在2.1色譜條件下分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，對(duì)比陰性空白試驗(yàn)圖譜、空白試驗(yàn)圖譜、對(duì)照品圖譜、供試品圖譜，確定流動(dòng)相與輔料是否影響消旋卡多曲的出峰。

對(duì)照品溶液和供試品溶液均在保留時(shí)間3.4min處出峰，而陰性空白溶液和空白溶液在相近的保留時(shí)間處均未出現(xiàn)干擾峰。由配制過(guò)程可知對(duì)照品溶液和供試品溶液中均含有消旋卡多曲，陰性空白溶液和空白溶液中均不含消旋卡多曲，因此可判定3.4min處的峰為消旋卡多曲峰。詳見(jiàn)附圖。

2.6.2 檢測(cè)限、定量限[3][4]取對(duì)照品溶液在2.1色譜條件下進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液中消旋卡多曲峰的信噪比為15000，遠(yuǎn)大于10。

取消旋卡多曲對(duì)照品溶液稀釋至消旋卡多曲峰高與基線噪音高度比約為10∶1確定定量限，之后再連續(xù)測(cè)定5針，記錄該色譜圖，計(jì)算其濃度。結(jié)果為10.97ng/ml，主峰保留時(shí)間的RSD=0.1%，峰面積的RSD=4.3%。

取消旋卡多曲對(duì)照品溶液稀釋至消旋卡多曲峰高與基線噪音高度比約為3∶1確定檢測(cè)限，之后再連續(xù)測(cè)定2針，記錄該色譜圖，計(jì)算其濃度。結(jié)果為4.316ng/ml，主峰保留時(shí)間的RSD=0.1%，峰面積的RSD=9.6%。

2.6.3 儀器精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，峰面積分別為5244.28027、5250.30664、5252.06592、5250.54102、5250.51221、5257.78760，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%。

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取莫尼卡（消旋卡多曲片）樣品，制備6份供試品溶液，按2.1中色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果為95.3%、96.8%、96.3%、95.4%、96.6%、96.7%，RSD=0.7%，重復(fù)性良好。

2.6.5 中間精密度試驗(yàn)[5][6]取三批莫尼卡（消旋卡多曲片）樣品，在相近的時(shí)間由不同的實(shí)驗(yàn)員采用不同的儀器進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)比測(cè)定的數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)員A的含量測(cè)定結(jié)果分別為96.0%、96.5%、95.2%，實(shí)驗(yàn)員B的含量測(cè)定結(jié)果分別為96.8%、95.8%、95.7%，兩者的結(jié)果相差不大表明此方法的中間精密度良好。

2.6.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)[7][8]稱取陰性模擬制劑[9]約25mg共9份，分別置100ml量瓶中，于1～3號(hào)中分別加入消旋卡多曲對(duì)照品8mg，4～6號(hào)中分別加入消旋卡多曲對(duì)照品10mg，7～9號(hào)中分別加入消旋卡多曲對(duì)照品12mg，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為80%、100%、120%的回收率溶液。取空白溶液、對(duì)照品溶液、回收率溶液按2.1中色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果如附表所示。

附表 回收率結(jié)果

2.6.7 線性關(guān)系考察 精密稱取消旋卡多曲對(duì)照品約20mg置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得線性系列溶液。按2.1色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品溶液濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程Y=49820X+150.62，相關(guān)系數(shù)r=0.99937，線性范圍為0.02158mg/mL～0.2003mg/mL。

2.6.8 溶液穩(wěn)定性考察 取對(duì)照品溶液和供試品溶液，在室溫條件下放置0h、3h、6h、12h、18h、24h、36h后分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，考察兩份溶液在36小時(shí)之內(nèi)的峰面積變化。計(jì)算得對(duì)照品溶液各時(shí)間點(diǎn)峰面積的RSD為0.5%，供試品溶液各時(shí)間點(diǎn)峰面積的RSD為0.4%。表明溶液在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 樣品含量測(cè)定 按2.2項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)下的方法制備3批供試品溶液，照2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品的含量。測(cè)得結(jié)果為3批樣品中消旋卡多曲含量分別為標(biāo)示量的96.0%、96.5%、95.2%，平均含量為95.9%。

3 結(jié)論與討論

綜上所述，本方法的系統(tǒng)適用性符合要求，專屬性高，定量準(zhǔn)確，精密度良好，線性范圍寬，溶液在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，適合于消旋卡多曲的含量測(cè)定[12-15]。本文中系統(tǒng)適用性試驗(yàn)僅考察了色譜柱的柱效，在后續(xù)試驗(yàn)中有已知雜質(zhì)后可以考察消旋卡多曲與已知雜質(zhì)的分離度是否符合要求，以增強(qiáng)系統(tǒng)的適用性。

在檢測(cè)限與定量限的考察中，定量限濃度確定后連續(xù)進(jìn)樣六次，而檢測(cè)限只進(jìn)樣了三次，后續(xù)亦可以進(jìn)樣六次或以上考察檢測(cè)限的準(zhǔn)確性與精密度[16][17]。

在專屬性考察中，后續(xù)可以考慮用破壞的方法進(jìn)行專屬性試驗(yàn)，即用酸、堿、高溫等條件破壞消旋卡多曲后再進(jìn)樣[10][11]。

本次試驗(yàn)中未考察該方法的耐用性，后續(xù)可以增加方法的耐用性試驗(yàn)?？赏ㄟ^(guò)改變流速、改變柱溫等改變色譜條件的一些參數(shù)以及在不同實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)考察方法是否耐用[18][19]。