王煥 趙文團(tuán) 陳連芳

摘要：列當(dāng)（Orobanche spp and Phelipanche spp ）是一種在世界范圍內(nèi)危害嚴(yán)重的根寄生雜草，防除列當(dāng)?shù)难芯恳苍絹碓蕉唷Ｕ_地采集和預(yù)培養(yǎng)列當(dāng)種子是獲得正確防除列當(dāng)研究結(jié)果的前提。列出了大田正確采集列當(dāng)種子的方法，以及對采集到的種子進(jìn)行過篩提純、加洗潔精和吐溫0清洗后，再表面消毒和預(yù)培養(yǎng)，并通過發(fā)芽試驗(yàn)檢驗(yàn)此方法的可行性。結(jié)果表明，經(jīng)過處理的向日葵列當(dāng)、瓜列當(dāng)種子的發(fā)芽率最高分別為44%、91%。此方法可以應(yīng)用于列當(dāng)?shù)牟杉皖A(yù)處理過程中，可為列當(dāng)研究和防除提供參考。

關(guān)鍵詞：列當(dāng)；種子；采集；預(yù)培養(yǎng)；獨(dú)腳金內(nèi)酯類似物GR4

中圖分類號：41；944文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：100-9X（01）01-00-04[7]

Abstract：roorape （Orobanche spp and Phelipanche spp） are devastating root parasitic weeds worldwide Research afforts regarding its control have increased in any areas Proper collection and preconditioning of broorape seeds is relevant roorape seed field collection techniques and procedures to sieve the seeds for purification and addition of detergent and ween 0 for cleaning as well as surface sterilization and preconditioning of the seeds are described he feasibility of these ethods were exained by gerination tests he highest gerination rate of sunflower broorape （Orobanche cuana allr） and Egyptian broorape （Phelipanche aegyptiaca Pers） using the proposed ethods were 4% and 9%，respectively，indicating that the ethod could be applied to collect and pretreat Orobanche seeds in order to provide basic inforation to farers and/or researchers working in the field for the control of broorape weedsey words：Orobanche；seeds；collection；preconditioning；GR4

列當(dāng)是列當(dāng)科（Orobanchaceae）列當(dāng)屬（Orobanche spp）的一種根寄生植物，在地中海、亞洲西部、東歐、原蘇聯(lián)的南部以及非洲東部等地區(qū)均有分布，它可以寄生在傘形科、菊科、茄科、豆科、十字花科、亞麻科、葫蘆科、大麻科等很多植物的根部[1]。但由于自身缺乏葉綠素，列當(dāng)必須從寄主中掠奪水分和各種礦質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)才可以滿足自身的生長需要。列當(dāng)擁有十分復(fù)雜的生活史，對寄主植物的危害主要發(fā)生在出土之前的地下生長階段[-]。在相對適宜的溫度和濕度下，成熟的列當(dāng)種子才能夠?qū)γ劝l(fā)刺激物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)，這一階段被稱為列當(dāng)種子的預(yù)培養(yǎng)。在適宜的環(huán)境條件下，種子的萌發(fā)還必須經(jīng)過發(fā)芽刺激物質(zhì)的誘導(dǎo)才能夠開始，若沒有發(fā)芽刺激物質(zhì)的誘導(dǎo)即沒有寄主生長的情況下，約 1～周后列當(dāng)種子將會進(jìn)行二次休眠，等待來年有寄主時(shí)再萌發(fā)，這是列當(dāng)植物對環(huán)境的一種進(jìn)化適應(yīng)性選擇[4-]。因此，如何采集和預(yù)處理列當(dāng)種子是列當(dāng)研究的基礎(chǔ)。有研究表明向日葵列當(dāng)種子大小一般為00～400 μ，千粒質(zhì)量僅1～ g[]，但這一研究結(jié)論并未經(jīng)過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑囼?yàn)計(jì)數(shù)與統(tǒng)計(jì)處理，因此沒有科學(xué)參考性。目前國內(nèi)關(guān)于列當(dāng)種子采集與預(yù)處理這方面并無確切的文獻(xiàn)報(bào)道；而國際上也僅有以色列教授oel等做過7株向日葵列當(dāng)?shù)拇笾陆y(tǒng)計(jì)，他們的研究指出，7株向日葵列當(dāng)?shù)姆N子總和超過100萬粒[7]。在正確的采集和預(yù)處理列當(dāng)種子的基礎(chǔ)上，本項(xiàng)目組進(jìn)行了大量的關(guān)于列當(dāng)生物防除方面的試驗(yàn)，其中主要是對于列當(dāng)誘捕作物的研究，并發(fā)表了多篇文章，研究表明，小麥可以作為小列當(dāng)?shù)恼T捕作物[-10]，玉米、大豆、棉花和柳枝稷均可作為向日葵列當(dāng)?shù)恼T捕作物[11-14]。本項(xiàng)目組也多次向國內(nèi)相關(guān)單位無償提供列當(dāng)種子作為研究材料，促使其完成相關(guān)領(lǐng)域的研究，例如，Chai等研究出百合對瓜列當(dāng)具有化感作用，可以作為瓜列當(dāng)?shù)恼T捕作物[1]；同時(shí)hang等研究出根寄生植物列當(dāng)和莖寄生植物菟絲子通過基因水平轉(zhuǎn)移可獲得十字花科特有的胡豆合成酶樣基因[1]。為使國內(nèi)其他項(xiàng)目組更多地開展列當(dāng)種子防除研究、研究人員能夠自行采集和預(yù)處理列當(dāng)種子，本文對列當(dāng)種子的采集和預(yù)處理做一簡要的介紹。

[1][]1材料與方法

[]11試驗(yàn)材料

瓜列當(dāng)種子采集于新疆建設(shè)兵團(tuán)第二師二十七團(tuán)帶有蒴果的列當(dāng)?shù)闹仓?，向日葵列?dāng)采集于陜西省定邊縣周臺子鄉(xiāng)向日葵地里。采集后的植株在陰涼處晾干。采集列當(dāng)種子所需要的材料包括塑料袋、手套等。

[]1列當(dāng)種子的采集

在生長有列當(dāng)?shù)牡乩?，選取顏色發(fā)黑、蒴果變黃色的植株（圖1）；如果整個(gè)植株是黑色的，要注意查看蒴果是否有破裂，采集蒴果未破裂的植株。首先，將列當(dāng)植株輕輕拔出并裝入個(gè)嵌套好的中型塑料袋（超市購物袋即可），值得注意的是，在這里我們需要剪去列當(dāng)植株偏上部的蒴果和偏下部的蒴果。將剪去頭部和尾部的列當(dāng)植株裝袋，1個(gè)塑料袋裝0～0株即可。將采集好的植株放置在陰涼的地方晾干，大約1周。然后自上向下將晾干的列當(dāng)植株上的所有蒴果捋下來，再用雙手用力搓開捋下的所有蒴果，將種子搓出來，并用土壤篩篩去蒴果殼和土，這樣即可得到相對純凈的列當(dāng)種子。

[]1列當(dāng)種子前處理需要的材料和設(shè)備

列當(dāng)種子、吐溫0、洗潔精、土壤篩、鑷子、濾紙、勺子、1 000 L燒杯、玻璃棒、光學(xué)顯微鏡、超聲波清洗機(jī)、超凈工作臺、簸箕、01、0、10 g/L的G4。

[]14列當(dāng)種子的預(yù)處理[]

將采集到的種子過篩提純。將篩子由上到下按由大到小的順序排列，依次為10、04、0、04、01 ，最下邊為空盤子。過完篩之后04 篩子上的是蒴果殼，01 篩子下面底盤上的是土，其他篩子上的是列當(dāng)種子和雜物的混合物，需要進(jìn)一步清理。一般采用水清洗種子。將過完篩子的列當(dāng)種子放入1 000 L燒杯中，并加入～ L洗潔精和適量的水，用玻璃棒攪拌。燒杯中的液體過篩（01 ），并沖洗～次，洗掉種子表面的灰塵。再將種子放入燒杯中，加入10 L表面活性劑（吐溫0）和適量的水。用玻璃棒攪拌后，將燒杯放入超聲波清洗機(jī)中1～ in。靜置1～ in，種子出現(xiàn)了分層現(xiàn)象：上層多為未成熟的列當(dāng)種子及雜質(zhì)，下層則是較成熟的列當(dāng)種子。取下層種子分開重復(fù)沖洗多次，將分開的列當(dāng)種子沖洗干凈后，放在超凈工作臺并晾干，選用透氣性較好的網(wǎng)袋儲藏備用。

[1][]列當(dāng)種子表面消毒及預(yù)培養(yǎng)將清理干凈的列當(dāng)種子用1%（體積分?jǐn)?shù)）次氯酸鈉溶液超聲 in，然后用蒸餾水沖洗次。再用7%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇超聲波 in，用蒸餾水沖洗干凈，直到洗出來的水為無色，然后在超凈工作臺晾干備用。

在培養(yǎng)皿內(nèi)（直徑90 ，高0 ）鋪層濾紙，加入適量蒸餾水，然后在濾紙上均勻鋪直徑的玻璃纖維濾片（hatan G/A）約10片，將表面消毒晾干后的列當(dāng)種子均勻撒到玻璃纖維濾片上，每片0～40粒，并用4 L無菌水濕潤濾紙及列當(dāng)種子，培養(yǎng)皿以Parafil封口，在 ℃的黑暗條件下預(yù)培養(yǎng) d。用預(yù)培養(yǎng)后的列當(dāng)種子分別采用01、0、10 g/L的獨(dú)腳金內(nèi)酯類似物GR4進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。

[1][]結(jié)果與分析

根據(jù)我們對1個(gè)向日葵列當(dāng)蒴果的計(jì)數(shù)分析可知，向日葵列當(dāng)每株平均生產(chǎn)種子174萬粒（0萬～萬粒）[P]，每株平均有個(gè)蒴果（～9個(gè)），每個(gè)蒴果平均生產(chǎn)104 g種子（9～7 g），平均千粒質(zhì)量414 g （14～7 g），在種子計(jì)數(shù)過程中我們分別在多株向日葵列當(dāng)?shù)纳?、中、下部各采?個(gè)蒴果進(jìn)行分析（表1）。

首先，每個(gè)蒴果在上、中、下部生產(chǎn)的種子數(shù)均達(dá)到了 000粒以上，且不同部位的蒴果在向日葵列當(dāng)種子的數(shù)量上沒有顯著差異；同樣，上、中、下部的蒴果中的種子質(zhì)量均達(dá)到了0 g 以上，但不同部位的種子質(zhì)量沒有顯著差異；而千粒質(zhì)量分別為、4、47 g，不同部位向日葵列當(dāng)?shù)那ЯＹ|(zhì)量差異也不顯著。雖然以上種向日葵列當(dāng)?shù)南嚓P(guān)特性在統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果上并沒有顯著差異，但發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果表明（表），不同部位的向日葵列當(dāng)種子發(fā)芽率之間存在有顯著差異，我們分別采用了種濃度的GR4來進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，結(jié)果顯示向日葵列當(dāng)?shù)闹虚g部分的種子發(fā)芽率均為最高，且顯著高于上、下部種子的發(fā)芽率，其中在0 g/L的GR4的刺激下，向日葵列當(dāng)中部的發(fā)芽率最高，為44%。

根據(jù)我們對1個(gè)瓜列當(dāng)碩果的計(jì)數(shù)分析，瓜列當(dāng)每枝平均生產(chǎn)種子萬粒（0萬～1萬粒），每枝平均有個(gè)蒴果（1～41個(gè)），每個(gè)蒴果平均生產(chǎn)種子17 g（17～07 g），平均千粒質(zhì)量17 g （1～ g）。在種子計(jì)數(shù)過程中我們分別在多株瓜列當(dāng)植株的上、中、下部各采集1個(gè)蒴果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示瓜列當(dāng)植株每個(gè)蒴果的中、下部產(chǎn)生的種子數(shù)均超過了1 00粒，而上部平均產(chǎn)生的種子數(shù)則未超過1 000粒，與中、下部有顯著差異。但上、中、下部的蒴果的種子質(zhì)量卻沒有顯著差異，均超過了140 g，并且瓜列當(dāng)植株不同部位的千粒質(zhì)量也均達(dá)到了90 g以上，不同部位的種子千粒質(zhì)量之間差異不顯著（表）。但發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果表明，不同部位的瓜列當(dāng)種子發(fā)芽率之間存在顯著差異，同樣在種濃度的GR4的刺激下，瓜列當(dāng)?shù)闹虚g部分的種子發(fā)芽率均為最高，且顯著高于上、下部種子的發(fā)芽率，其中在0 g/L的GR4的刺激下，瓜列當(dāng)中部的發(fā)芽率最高，為91%（表4）。

[1][]結(jié)論與討論

在采集列當(dāng)種子及前期處理過程中應(yīng)有嚴(yán)格規(guī)范，保證所采集的列當(dāng)種子品質(zhì)能夠滿足室內(nèi)相關(guān)試驗(yàn)的科學(xué)性要求。首先，在采集時(shí)，要盡量篩選整株顏色發(fā)黑、蒴果變黃色的植株，并且根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果得出，不同部位的列當(dāng)種子發(fā)芽率之間存在顯著差異，列當(dāng)植株中部的種子發(fā)芽率較高，無論是向日葵列當(dāng)還是瓜列當(dāng)，其植株中部產(chǎn)生的種子發(fā)芽率均超過了0%。因此，在采集向日葵列當(dāng)和瓜列當(dāng)時(shí)應(yīng)剪去偏上部和偏下部的蒴果，盡量保留列當(dāng)植株中部的蒴果；在后期晾曬過程中，如果能夠等待種子自然開裂，只收集成熟的種子，則可確保獲得發(fā)芽率較高的列當(dāng)種子。

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