王騰　田海梅　李茉　張超　李艷芬　劉靜　王小兵　齊軍　吳健雄　張偉#

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院1生物檢測(cè)中心，2檢驗(yàn)科，3腹外科，北京　100021

血清巨噬細(xì)胞抑制因子-1在肝癌患者中的臨床診斷價(jià)值△

王騰1田海梅1李茉1張超1李艷芬1劉靜1王小兵1齊軍2吳健雄3張偉1#

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院1生物檢測(cè)中心，2檢驗(yàn)科，3腹外科，北京100021

目的初步探討血清中巨噬細(xì)胞抑制因子-1（M IC-1）的濃度在肝癌患者中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法分別采用雙抗體夾心ELISA法和電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)271例未經(jīng)治療的肝癌患者，48例肝臟良性疾病患者，30例乙肝攜帶者及104例健康對(duì)照者的血清M IC-1濃度和血清甲胎蛋白（AFP）濃度。結(jié)果在肝癌患者中血清M IC-1濃度比較，男性患者高于女性患者，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.255）；有病毒性肝炎史患者高于無(wú)病毒性肝炎史患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.038）；M IC-1濃度隨肝癌患者臨床巴塞羅那分期（BCLC）進(jìn)展而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同分化程度組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.146）；不同病理類(lèi)型，肝細(xì)胞癌組高于膽管細(xì)胞癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.044）；M IC-1在早期肝癌患者（0期和A期）中顯示出良好的診斷敏感度，優(yōu)于AFP。肝癌患者組血清M IC-1濃度高于肝臟良性疾病組、乙肝攜帶者組及健康對(duì)照者；根據(jù)肝癌患者及健康對(duì)照者的受試者操作特性曲線(xiàn)（ROC）設(shè)定1.8 ng/m l作為M IC-1診斷肝癌的界值時(shí)，特異度和敏感度分別為96.2%和97.4%，高于AFP的96.2%和73.1%。結(jié)論本研究結(jié)果顯示M IC-1可成為理想的癌篩查及診斷血清腫瘤標(biāo)志物，在肝癌診斷特別是早期診斷方面顯示出良好應(yīng)用前景。

肝癌；巨噬細(xì)胞抑制因子-1；腫瘤標(biāo)志物；臨床價(jià)值

Oncol Prog，2016，14（4）

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer）指起源于肝細(xì)胞和肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其中肝細(xì)胞癌占90%以上［1］。肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居我國(guó)惡性腫瘤第四位，病死率居第二位，僅次于肺癌［2］。全世界肝癌患病和死亡案例中，50%發(fā)生在我國(guó)［3］。肝癌早期癥狀不明顯，大部分患者就診時(shí)已是中晚期，失去手術(shù)治療機(jī)會(huì)且預(yù)后差。如果能夠做到早期發(fā)現(xiàn)診斷給予有效的治療，可以顯著提高患者生存率，延長(zhǎng)生存時(shí)間，提高患者生存質(zhì)量。目前，臨床廣泛應(yīng)用的肝癌輔助診斷標(biāo)志物為甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP），但受多種因素影響，AFP在肝癌早期診斷中敏感度僅為40%～60%［4-5］。因此僅使用AFP作為篩查和診斷工具會(huì)有較高的漏診率［6-9］。超聲是肝癌診斷中最常用最有效的無(wú)創(chuàng)檢查手段，但診斷依賴(lài)醫(yī)師知識(shí)經(jīng)驗(yàn)及設(shè)備狀態(tài)，難以對(duì)腫物良惡性進(jìn)行區(qū)分，此外超聲存在檢測(cè)盲區(qū)，對(duì)早期肝癌的檢出率不高［10］。因此，臨床上迫切需要找到一種更加靈敏的血清腫瘤標(biāo)志物以輔助檢測(cè)早期原發(fā)性肝癌。

巨噬細(xì)胞抑制因子-1（macrophage inhibitory cytokine-1，M IC-1）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型免疫相關(guān)腫瘤標(biāo)志物［11］，有研究表明M IC-1在肝癌細(xì)胞中高表達(dá)并分泌至細(xì)胞外，因此可成為早期肝癌較好的診斷標(biāo)志物［12-13］。本研究通過(guò)在較大樣本中檢測(cè)肝癌、肝臟良性疾病、乙肝攜帶者及正常人群血清M IC-1水平，并分析肝癌患者M(jìn) IC-1水平與其臨床特征的關(guān)系，旨在探討M IC-1在肝癌診斷中的臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年7月至2015年2月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院門(mén)診及住院的肝癌和肝良性疾病患者的血清標(biāo)本。肝癌及肝良性疾病患者均經(jīng)腫瘤醫(yī)院病理科組織病理學(xué)診斷確診，且首次采血前未接受過(guò)任何治療。其中肝癌患者271例，年齡22～83歲，平均年齡（55.7±10.3）歲，具體資料見(jiàn)表1。肝部良性疾病患者48例，其中男性12例，女性36例，年齡24～74歲，平均年齡（49.2±11.5）歲；病理分類(lèi)為肝血管瘤21例，肝囊腫12例，肝硬化結(jié)節(jié)7例，肝細(xì)胞壞死3例，肝細(xì)胞炎癥2例，肝血管平滑肌脂肪瘤2例，神經(jīng)鞘瘤1例。采集中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院防癌科同期的體檢人群中具有完整體檢報(bào)告的健康成人和乙肝攜帶者的血清標(biāo)本。其中乙肝攜帶組男性30例，年齡33～62歲，平均年齡（44±9.3）歲。健康對(duì)照組104例，其中男性51例，女性53例，年齡19～74歲，平均年齡（47.2± 12.7）歲。

1.2血清樣品的采集

采用帶有惰性分離膠的進(jìn)口真空采血管采集入組患者和體檢者空腹靜脈血4 m l，自然凝集30 m in、8℃，4000 rpm離心15 m in分離血清，分裝并-80℃保存待測(cè)。

1.3MIC-1的測(cè)定方法

M IC-1檢測(cè)試劑盒由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院生物檢測(cè)中心研發(fā)，北京金紫晶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)并提供。采用生物素-親和素放大系統(tǒng)的ELISA雙抗體夾心兩步法，以伯樂(lè)公司imark酶標(biāo)儀，450 nm、655 nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)各孔OD值。操作嚴(yán)格按照儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4AFP的測(cè)定方法

采用Cobas 601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑盒（Roche公司）進(jìn)行檢測(cè)。操作嚴(yán)格按照儀器和試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，高、低質(zhì)控品值均在要求范圍內(nèi)。

表1　271例肝癌患者的基本臨床特征

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各組的血清M IC-1濃度均值（±s）和中位數(shù)。Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析各組M IC-1濃度，Wilcoxon檢驗(yàn)分析配對(duì)樣本，ROC曲線(xiàn)分析M IC-1檢測(cè)效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1肝癌組內(nèi)的MIC-1濃度比較2.1.1根據(jù)性別分組肝癌組男性患者血清M IC-1濃度為（6.33±3.72）ng/m l，女性為（5.66±3.31）ng/m l，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.255）。

2.1.2根據(jù)有無(wú)肝炎病史分組肝癌組有病毒性肝炎史的患者血清M IC-1濃度為（6.40±3.80）ng/m l，高于無(wú)病毒性肝炎史患者的（5.12±2.42）ng/m l，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.038）。

2.1.3根據(jù)臨床分期分組肝癌組中，0期（極早期）患者血清M IC-1濃度為（3.73±0.56）ng/m l；A期（早期）患者血清M IC-1濃度為（4.54±2.31）ng/m l；B期（中期）患者血清M IC-1濃度為（5.96±3.75）ng/m l；C期（晚期）患者血清M IC-1濃度為（6.65±3.78）ng/m l。M IC-1濃度隨患者臨床BCLC分期增高而升高（P＜0.01）。其中，C期患者的血清M IC-1濃度高于0期和A期患者的血清M IC-1濃度（P＜0.05）。B期患者血清M IC-1濃度高于0期患者的血清M IC-1濃度（P＜0.05）。（圖1）

圖1　肝癌組不同臨床分期患者血清M IC-1濃度比較

2.1.4根據(jù)分化程度分組根據(jù)臨床病理診斷將肝癌組患者分為3組，低分化+中低分化組24例，中分化組47例，高分化組20例。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，低+中低分化組血清M IC-1濃度為（4.39±2.15）ng/m l，中分化組血清M IC-1濃度為（4.77±2.32）ng/m l，高分化組血清M IC-1濃度為（4.22±1.84）ng/m l。各亞組的血清M IC-1濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.146）。

2.1.5根據(jù)病理類(lèi)型分組根據(jù)病理類(lèi)型分組，肝細(xì)胞癌組254例，膽管細(xì)胞癌組14例，肝細(xì)胞癌組的M IC-1濃度為（6.30±3.74）ng/m l，高于膽管細(xì)胞癌組的（4.17±0.28）ng/m l，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.044）。

2.2肝癌、肝良性疾病、健康對(duì)照及乙肝攜帶組間MIC-1濃度比較

比較肝癌、肝良性疾病、健康對(duì)照及乙肝攜帶組的血清M IC-1濃度，結(jié)果顯示肝癌組M IC-1水平均顯著高于其他3組（P＜0.01）；肝良性疾病組M IC-1濃度顯著高于乙肝攜帶組（P＜0.01）及健康對(duì)照組（P＜0.01）；乙肝攜帶組M IC-1濃度顯著高于健康對(duì)照組（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　肝癌、肝良性疾病、健康對(duì)照及乙肝攜帶組的M IC-1濃度中位數(shù)及四分位間距值（ng/m l）

2.3MIC-1和AFP診斷肝癌的價(jià)值比較

分別以肝癌和正常對(duì)照組的M IC-1和AFP濃度繪制ROC曲線(xiàn)，M IC-1的曲線(xiàn)下面積顯著優(yōu)于AFP，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。以1.80 ng/m l M IC-1水平作為診斷肝癌的界值時(shí)，約登指數(shù)最大，特異度和敏感度分別為96.2%、97.4%；以4.94 ng/m l AFP水平為診斷界值時(shí)，約登指數(shù)最大，特異度和敏感度分別為96.2%、73.1%；M IC-1的敏感度高于AFP，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（圖2、表3）

2.4MIC-1與AFP在肝癌早期的診斷效能

通過(guò)檢測(cè)早期肝癌患者（BCLC分期中0和A期）血清M IC-1與AFP濃度，比較兩種標(biāo)志物在早期肝癌的檢出率。結(jié)果顯示M IC-1在早期肝癌患者中有良好的診斷敏感性，遠(yuǎn)優(yōu)于AFP（P＜0.01），提示M IC-1在肝癌早期診斷中具有較好的診斷價(jià)值。（表4）

圖2　M IC-1和AFP肝癌診斷效能的ROC曲線(xiàn)

3　討論

M IC-1作為T(mén)GF-β家族成員，廣泛參與細(xì)胞凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程。正常人血清中的成熟M IC-1蛋白呈低水平穩(wěn)定表達(dá)，在某些病理狀態(tài)下如腫瘤、急性損傷及炎癥時(shí)其表達(dá)可顯著升高［14］。對(duì)多種類(lèi)型腫瘤患者的血清M IC-1濃度進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)腫瘤患者血清M IC-1濃度高于正常對(duì)照，其升高時(shí)間早于其他通用的腫瘤標(biāo)志物，有望成為具有能早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的新腫瘤標(biāo)志物［15-18］。

本研究應(yīng)用自主研發(fā)的血清M IC-1檢測(cè)試劑盒，對(duì)肝癌患者、肝臟良性疾病患者、乙肝攜帶者及健康對(duì)照者血清M IC-1濃度進(jìn)行了檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示肝癌患者血清M IC-1濃度顯著高于健康對(duì)照組、乙肝攜帶者組和肝臟良性疾病組；肝臟良性疾病患者血清M IC-1濃度也有增高，說(shuō)明血清M IC-1濃度可提示疾病的嚴(yán)重程度和對(duì)肝臟的損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)在肝癌患者中，血清M IC-1濃度隨肝癌進(jìn)展程度而逐漸升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（結(jié)果見(jiàn)圖2），顯示血清M IC-1濃度與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為評(píng)估肝癌發(fā)生及進(jìn)展的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)用于臨床。

表3　M IC-1和AFP的診斷效能指標(biāo)

表4　肝癌組早期患者M(jìn) IC-1與AFP的陽(yáng)性檢出率［n（%）］

為了獲得血清M IC-1檢測(cè)肝癌的最佳臨界值，本研究基于肝癌組（包括早期肝癌患者和中晚期肝癌患者）的血清M IC-1濃度繪制了ROC曲線(xiàn)，綜合血清標(biāo)志物檢測(cè)的靈敏度和特異度，選擇1.80 ng/m l作為M IC-1檢測(cè)肝癌的界值。在該界值下，M IC-1檢測(cè)肝癌的靈敏度為97.4%，特異度為96.2%，AFP靈敏度為73.1%，特異度為96.2%，M IC-1檢測(cè)結(jié)果顯著高于AFP。ROC曲線(xiàn)的分析結(jié)果進(jìn)一步證明，M IC-1對(duì)于肝癌的診斷能力顯著優(yōu)于AFP（P＜0.01）。

作為早期篩查使用的腫瘤標(biāo)志物，要求在腫瘤發(fā)生的早期就有較好的敏感度和特異度，本研究比較了M IC-1和AFP在早期（0期及A期）肝癌患者中的診斷能力。結(jié)果顯示，在特異度相同的情況下M IC-1檢測(cè)早期肝癌的陽(yáng)性率為97.3%，顯著高于AFP（63.7%）。對(duì)肝癌患者的早期篩查具有重要意義。

在研究M IC-1與肝癌組織分化程度與病理類(lèi)型中發(fā)現(xiàn)，M IC-1在不同肝癌組織分化程度和病理類(lèi)型之間差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明M IC-1對(duì)不同分化程度及病理類(lèi)型的肝癌都有較高的檢出效能。

綜上所述，血清M IC-1濃度的檢測(cè)對(duì)于肝癌的診斷效能優(yōu)于AFP，可以有效補(bǔ)充AFP的不足，作為一種新的腫瘤標(biāo)志物在輔助肝癌早期診斷中具有重要價(jià)值。

［1］衛(wèi)生部.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16（10）:929-946.

［2］陳萬(wàn)青，鄭榮壽，曾紅梅，等.2011年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析［J］.中國(guó)腫瘤，2015，24（1）:1-10.

［3］Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics［J］.CACancer J Clin，2011，61（2）:69-90.

［4］Yokoyama N，Shirai Y，Ajioka Y，et al.Immunohistochemically detected hepatic m icrometastases predict a high risk of intrahepatic recurrence after resection of colorectal carcinoma liver metastases［J］.Cancer，2002，94（6）:1642-1647.

［5］Lee CY，K HCP.Liver transplantation for hepatocellular carcinoma:an appraisal of current controversies［J］.Liver Cancer，2012，1（3-4）:183-189.

［6］Braillon A.Is the american association for the study of liver diseases recommendation for hepatocellular carcinoma screening a cul-de-sac［J］.World J Gastroenterol，2013，19（21）:3369-3370.

［7］Daniele B，Bencivenga A，Megna AS，et al.Alpha-fetoprotein and ultrasonography screening for hepatocellular carcinoma［J］.Gastroenterology，2004，127（5 Suppl 1）:108-112.

［8］Sterling RK，Wright EC，Morgan TR，et al.Frequency of elevated hepatocellularcarcinoma（HCC）biomarkersin patients w ith advanced hepatitis C［J］.Am J Gastroenterol，2012，107（1）:64-74.

［9］Tamura Y，Igarashi M，Suda T，et al.Fucosylated fraction of alpha-fetoprotein as a predictor of prognosis in patients w ith hepatocellular carcinoma after curative treatment［J］. Dig Dis Sci，2010，55（7）:2095-2101.

［10］郭萬(wàn)學(xué)，燕山，楊浣宜，等.超聲醫(yī)學(xué)［M］.6版.北京:人民軍醫(yī)出版社，2011:84.

［11］Bootcov MR，Bauskin AR，Valenzuela SM，et al.M IC-1，a novel macrophage inhibitory cytokine，is a divergent member of the TGF-beta superfam ily［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，1997，94（21）:11514-11519.

［12］Liu X，Chi X，Gong Q，et al.Association of serum level of grow th differentiation factor 15 w ith liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma［J］.PLoS One，2015，10（5）: e0127518.

［13］劉開(kāi)坤，查斌山，劉悅芳，等.GDF15在大鼠早期肝癌和人小肝癌組織中的表達(dá)［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008（4）:439-444.

［14］Bauskin AR，Brown DA，Kuffner T，et al.Role of macrophage inhibitory cytokine-1 in tumorigenesis and diagnosis of cancer［J］.Cancer Res，2006，66（10）:4983-4986.

［15］付超，齊軍，張偉.M IC-1作為腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展［J］.癌癥進(jìn)展，2011，9（4）:355-360.

［16］付超，王小兵，田海梅，等.肺癌患者血清中巨噬細(xì)胞抑制因子-1水平初探［J］.癌癥進(jìn)展，2011（4）:384-388.

［17］趙文雅，王小兵，田海梅，等.巨噬細(xì)胞抑制因子-1聯(lián)合多種標(biāo)志物在結(jié)直腸癌診斷中的價(jià)值研究［J］.癌癥進(jìn)展，2014（3）:291-297.

［18］王小兵，付超，吳凡，等.胰腺癌患者血清中巨噬細(xì)胞抑制因子-1的大樣本臨床研究［J］.癌癥進(jìn)展，2011，9（4）: 367-373.

Clinical value of serum M IC-1 level in patients w ith liver cancer△

WANG Teng1TIAN Hai-mei1LI Mo1ZHANG Chao1LI Yan-fen1LIU Jing1WANG Xiao-bing1QI Jun2WU Jian-xiong3
ZHANG Wei1#1Tumor Marker Research Center，2Clinical Laboratory，3Department of Abdom inal Surgery，Cancer Institute&Hospital，Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100021，China

Objective To study the clinical value of serum macrophages inhibitory cytokine-1（M IC-1）in patients w ith liver cancer.Method Serum levels of M IC-1 and AFP in 271 patients w ith liver cancer were detected by double-antibody ELISA Kit and Roche Cobas 601 ECL analyzer，in which 48 cases were w ith benign liver disease，30 were HBV carriers，and there were 104 healthy subjects.Results M IC-1 level in male patients was higher than that in females，w ith no significant differences observed（P=0.255）；And patients w ith history of viral hepatitis had higher M IC-1 level than those w ithout（P=0.037）；M IC-1 level elevated as the clinical progression of BCLC increased（P＜0.05）；The M IC-1 levels in all subgroups of differentiation were sim ilar（P=0.146）；While in respect of pathological types，M IC-1 was significantly higher in hepatocellular carcinoma than in cholangiocarcinoma（P=0.044）；It was demonstrated that M IC-1 was of superior sensitivity compared w ith AFP in diagnosing patients w ith liver cancer in early stage（stage 0 and A）；When the cutoff value of M IC-1 was set at 1.8 ng/m l in ROC curve of liver cancer patients vs healthy subjects，the specificity and sensitivity of M IC-1 were 96.2%and 97.4%，and were better than AFP at 96.2%and 73.1%，respectively.Conclusion Our results suggest that M IC-1 may be an ideal serum marker for screening and diagnosis of liver cancer，especially in the early stage.

liver cancer；macrophage inhibitory cytokine-1；tumor marker；clinical value

R735.7

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.10

2015-12-22）

國(guó)家自然科學(xué)基金（81441080；81502023）；北京市科技計(jì)劃課題（Z121107001012066）

（corresponding author），郵箱：zhangww1954@126.com