帕提曼·米吉提唐努爾·阿不力米提古扎努爾·阿布都西庫(kù)爾古扎麗努爾·阿不力孜

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦外五科，烏魯木齊830054

HPV16-E6-DNA病毒載量對(duì)預(yù)測(cè)宮頸癌患者生存狀況的影響

帕提曼·米吉提唐努爾·阿不力米提古扎努爾·阿布都西庫(kù)爾古扎麗努爾·阿不力孜#

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦外五科，烏魯木齊830054

目的探討宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒16型致癌基因E6（HPV16-E6-DNA）的病毒載量對(duì)預(yù)測(cè)宮頸癌患者生存狀況的影響。方法選取126例宮頸癌患者為研究對(duì)象，提取宮頸癌組織DNA，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)宮頸癌組織中HPV16-E6-DNA病毒載量，根據(jù)檢測(cè)的HPV16-E6-DNA載量將患者分為低載量組（＜106copy/ng）與高載量組（≥106copy/ng）。采用Kaplan-Meier法計(jì)算兩組患者的生存率，采用Cox回歸對(duì)影響患者5年生存率的因素進(jìn)行分析。結(jié)果比較兩組患者間一般資料特征，年齡、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存率分析顯示，低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%和74.29%，高載量組患者1年、3年及5年生存率分別為89.09%、62.60%和51.37%，低載量組高于高載量組，兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Cox多因素回歸分析結(jié)果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的主要因素。結(jié)論HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后密切相關(guān)，可作為術(shù)后宮頸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。

宮頸癌；人乳頭瘤病毒；預(yù)后

Oncol Prog，2016，14（6）

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，在發(fā)展中國(guó)家，占生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第一位，嚴(yán)重危害女性的健康［1］。高危型人乳頭狀瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）持續(xù)感染被公認(rèn)為是引起宮頸癌的必要病因。致癌基因E6是HPV16型的早期基因，其病毒載量及所編碼的蛋白與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)［2］。本研究對(duì)126例宮頸癌患者的HPV16-E6-DNA載量進(jìn)行檢測(cè)，分析其對(duì)患者生存狀況的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取2009年1月至2010年1月于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院采取宮頸癌根治術(shù)治療的126例宮頸癌患者為研究對(duì)象，年齡26～79歲，平均年齡（56.4±7.8）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者初始治療均選擇宮頸癌根治術(shù)；②病理組織活檢確診為宮頸癌，凱普HPV分型法檢測(cè)法確定HPV16感染陽(yáng)性；③婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）對(duì)宮頸癌分期為Ib～I(xiàn)Ia；④隨訪資料完整；⑤患者及家屬對(duì)本研究知情同意。排除未到達(dá)隨訪終止時(shí)間或事件失訪的患者。126例患者中，鱗癌109例，腺癌17例；組織學(xué)分化程度低分化23例，中分化45例，高分化58例。

1.2HPV16-E6-DNA載量檢測(cè)及分組

首先提取患者宮頸癌變組織中的DNA，采用Qiagen DNA提取試劑盒（德國(guó)QIAGEN公司生產(chǎn)）對(duì)凍存宮頸組織中的DNA進(jìn)行提取，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書，DNA溶液-80℃冷藏備用。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定HPV16-DNA-E6載量，引物由大連寶生物工程公司合成（引物編號(hào)LZDl74），引物序列如下：

HPV16-DNA-E65'-GCAAGCAACAGTTACTGCGACGT-3'（nt201-223）5'-GCAACAAGACATACATCGACCGG-3'（nt501-523）

使用pUCm-T/HPV16-E6質(zhì)粒（南京金斯瑞生物科技有限公司）制備標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品的HPV16-E6基因，從而得出DNA相對(duì)含量，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值。將HPV16-E6-DNA載量＜106copy/ng患者分為低載量組（n=71），載量≥106copy/ng患者為高載量組（n=55）。

1.3觀察指標(biāo)

從確診之日起進(jìn)行隨訪，前2年每6個(gè)月隨訪1次，以后每12個(gè)月隨訪1次，隨訪采用門診或電話隨訪的形式。隨訪初共138例患者，隨訪期間12例患者失訪，最終126例患者納入研究。以患者死亡、隨訪截止作為隨訪結(jié)束點(diǎn)。分析比較兩組患者間臨床資料，觀察兩組患者1年、3年及5年的生存率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟-件對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，Log-rank法進(jìn)行組間對(duì)比，采用Cox回歸對(duì)影響患者5年生存率的因素進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

單因素卡方檢驗(yàn)顯示年齡、FIGO分期、宮旁浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與載量相關(guān)（P＜0.05）；組織學(xué)分化程度、病理類型、腫瘤直徑、病灶類型和深肌層浸潤(rùn)與載量無(wú)關(guān)（P＞0.05）。（表1）

2.2病毒載量對(duì)生存狀況的影響

低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%及74.29%，高載量組患者1年、3年及5年生存率分別為89.09%、62.60%及51.37%，低載量組高于高載量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 8.539，P=0.004）。（圖1）

表1　126例患者HPV16-E6-DNA病毒載量與臨床特征的關(guān)系

2.3宮頸癌患者生存狀況的影響因素分析

采用Cox回歸分析對(duì)影響宮頸癌患者5生存率的因素進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的主要因素（P＜0.05）。（表2）

3　討論

圖1　不同HPV16-E6-DNA病毒載量患者生存曲線

HR-HPV持續(xù)感染是宮頸癌及宮頸病變發(fā)生發(fā)展的必要條件［3］，HR-HPV感染狀態(tài)與宮頸癌的進(jìn)展密切相關(guān)，HR-HPV陽(yáng)性的CNI-I者向高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)高于陰性者，而且隨著隨訪時(shí)間的延長(zhǎng)，進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)逐漸增大［4］。在對(duì)非典型性鱗狀細(xì)胞患者疾病的進(jìn)展情況的監(jiān)測(cè)過(guò)程中，HR-HPV-DNA檢測(cè)優(yōu)于重復(fù)細(xì)胞學(xué)檢查，病毒載量與宮頸病變嚴(yán)重程度相關(guān)［5］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，HPV16型是我國(guó)女性最為常見(jiàn)的感染類型［6-7］。致癌基因及其所編碼蛋白在宮頸癌的發(fā)病機(jī)制和早期診治的作用而倍受關(guān)注，高危型HPV癌基因E6對(duì)于惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)起重要作用，其在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用成為目前學(xué)者們研究的熱點(diǎn)［8］。HPV16與50%以上的宮頸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其E6癌蛋白是病毒生命周期的主要蛋白之一，在誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程中起重要作用，且與病毒復(fù)制，宿主細(xì)胞周期調(diào)控，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞增殖及細(xì)胞惡性表型轉(zhuǎn)化有關(guān)，通過(guò)多種作用機(jī)制影響宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)展［9-11］。本研究提取患者宮頸組織中的DNA，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)宮頸癌組織中HPV16-E6-DNA病毒載量，分析HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌病理學(xué)特征的關(guān)系及其對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

表2　宮頸癌患者5年生存率影響因素分析

本研究結(jié)果顯示，不同HPV16-E6-DNA載量患者間年齡、FIGO分期、宮旁浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果說(shuō)明HPV16-E6-DNA載量越高患者宮頸癌臨床分期越嚴(yán)重、伴有宮旁浸潤(rùn)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。亦有研究報(bào)道腫瘤直徑，存在淋巴轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要原因［12］。本研究Kaplan-Meier生存分析顯示HPV16-E6-DNA低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%及74.29%，高于高載量組的89.09%、62.60%及51.37%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道HPV16-E6-DNA病毒拷貝數(shù)＞107copy/ng組5年總生存率為39.4%，105～107copy/ng患者為44.0%，＜105copy/ng患者為86.3%，HPV16-E6-DNA病毒載量是宮頸癌根治性切除術(shù)后的總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，可作為宮頸癌根治性切除術(shù)后的預(yù)后預(yù)測(cè)因子之一［13］。進(jìn)一步采用Cox回歸對(duì)影響宮頸癌患者的5年生存率的因素進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的主要因素，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在大多數(shù)研究中報(bào)道其是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。

綜上所述，HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)評(píng)估術(shù)后宮頸癌患者的預(yù)后有指導(dǎo)作用，但尚需要多中心大樣本的研究進(jìn)一步確定。

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The effect of HPV16-E6-DNAviral load on the survival of patients with cervical cancer

MIJITI Patiman ABULIMITI Tangnuer ABUDUXIKUER Guzhanuer ABULIZI Guzhalinuer#
Department of 5th Gynecological Surgery，Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，Xinjiang，China

ObjectiveTo investigate the predictive value of oncogenes E6 of human papillomavirus type 16（HPV16-E6-DNA）on the survival of patients with cervical cancer.Method126 patients with cervical cancer were included in the study，and the cervical cancer DNA were extracted from cervical tissues.Viral load of HPV16-E6-DNA were detected by fluorescence quantitative PCR，and then patients were stratified as low load group（HPV16-E6-DNA＜106copy/ng）and high load group（HPV16-E6-DNA≥106copy/ng）according to the PCR results.Survival rate was calculated by Kaplan-Meier，and the factors affecting the 5-year survival were analyzed by Cox regression analysis.ResultAge，F(xiàn)IGO stage and lymph node metastasis in the two groups were statistically different，which were of statistically significance（P＜0.05）.Kaplan-Meier survival analysis showed that，1-，3-and 5-year survival rates of low load group were 95.67%，89.32%and 74.29%，and were 89.09%，62.60%，51.37%in high load group，respectively，and the difference was statistically significant（P＜0.01）.Cox multivariate regression analysis showed that，HPV16-E6-DNA viral load and lymph node metastasis were the main prognostic factors in patients with cervical cancer.ConclusionHPV16-E6-DNA viral load was closely associated with the long-term prognosis of patients with cervical cancer，which is useful in predicting the postoperative prognosis in those patients.

cervical cancer；human papillomavirus；prognosis

R737.33

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.14

2015-12-18）

（corresponding author），郵箱：gzlnr@qq.com