王炳高　袁新顏　邢志博　王鳳梅　侯紅　張艷輝

青島市中心（腫瘤）醫(yī)院乳腺外科，青島266042

三陰性乳腺癌組織STAT3、AR、MMP-13表達(dá)與預(yù)后狀況的關(guān)系研究

王炳高#袁新顏邢志博王鳳梅侯紅張艷輝

青島市中心（腫瘤）醫(yī)院乳腺外科，青島266042

目的探討三陰性乳腺癌組織中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子及轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT3）、雄激素受體（AR）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）表達(dá)與預(yù)后狀況的關(guān)系。方法選取三陰性乳腺癌患者組織180例作為研究組，同期選取行乳腺纖維腺瘤切除術(shù)患者正常乳腺組織160例作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)STAT3、AR、MMP-13表達(dá)情況。結(jié)果研究組STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。STAT3、AR、MMP-13評(píng)分與TNM分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），與組織學(xué)分化程度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。經(jīng)Cox多因素分析顯示，STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為T(mén)NBC患者預(yù)后的影響因素。結(jié)論三陰性乳腺癌組織STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)明顯增高，且可能與臨床病理特征與預(yù)后狀況具有緊密的關(guān)系。

三陰性乳腺癌；STAT3；AR；MMP-13；預(yù)后

Oncol Prog，2016，14（6）

三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是指人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（human epithelial growth factor receptor-2，HER-2）、孕激素受體（progestrone receptor，PR）與雌激素受體（estrogen receptor，ER）表達(dá)陰性的乳腺癌類型，其具有易轉(zhuǎn)移與侵襲性等病理特點(diǎn)，預(yù)后差。目前缺乏針對(duì)HER-2、PR、ER等受體的有效內(nèi)分泌治療與生物靶向治療［1］，臨床尚無(wú)有效的治療手段。本研究通過(guò)探討TNBC組織信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子及轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）、雄激素受體（androgen receptor，AR）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）表達(dá)與預(yù)后狀況的關(guān)系，以探尋TNBC患者的發(fā)病機(jī)制，分析可否作為T(mén)NBC患者新型分子標(biāo)志物與治療靶向標(biāo)志物，從而改善TNBC患者的臨床療效與預(yù)后狀況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取青島市中心（腫瘤）醫(yī)院2012年3月至2013年3月收治的TNBC患者組織180例作為研究組，年齡32～73歲，平均年齡（49.03±5.15）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性，全部患者均符合三陰性乳腺癌的病理組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，自愿參加本研究試驗(yàn)并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝腎功能障礙，心肺功能不全與精神性疾病患者。同期選取我院行乳腺纖維腺瘤切除術(shù)的160例患者正常乳腺組織作為對(duì)照組，均經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實(shí)為正常乳腺組織，年齡31～72歲，平均年齡（48.97±5.08）歲。兩組患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測(cè)方法

SP試劑盒購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司，"HW＞W(wǎng)%兔抗人單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，AR兔抗人單克隆抗體（cell signaling technology）、兔抗人MMP-13多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，DAB底物顯色劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。全部組織標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)三陰性乳腺癌組織與正常乳腺組織STAT3、AR、MMP-13蛋白表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3觀察指標(biāo)

采用半定量積分法，隨機(jī)選取5個(gè)視野，總計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。陽(yáng)性染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)染色為0分，微弱染色為1分，清晰染色且細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色為2分，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核呈深棕色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤20%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)21%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%為3分；上述兩項(xiàng)評(píng)分相乘，0～2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)-計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，兩組間的計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)，TNBC患者預(yù)后影響因素采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率比較

研究組STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1），研究組STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)情況見(jiàn)圖1。

表1　兩組患者STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率比較［n（%）］

圖1　TNBC患者組織中STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)情況（SP×200）

2.2STAT3、AR、MMP-13表達(dá)與TNBC臨床特征的關(guān)系

STAT3、AR、MMP-13表達(dá)與TNBC患者TNM分期、組織學(xué)分化程度及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，其中與TNM分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），與組織學(xué)分化程度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。（表2）

表2　STAT3、AR、MMP-13評(píng)分與TNBC臨床特征的相關(guān)性分析（r）

2.3TNBC患者預(yù)后影響因素的Cox多因素分析

經(jīng)Cox多因素回歸分析顯示，STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為T(mén)NBC患者預(yù)后的影響因素（P＜0.05），其中STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)與高TNM分期級(jí)別、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是TNBC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，高組織學(xué)分級(jí)是TNBC患者預(yù)后的保護(hù)因素。（表3）

3　討論

TNBC約占乳腺癌的15%，其具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早、復(fù)發(fā)率高與侵襲性強(qiáng)等特點(diǎn)［3］。因此，TNBC的預(yù)后狀況欠佳。TNBC的病理機(jī)制尚未完全闡明，因此增加了TNBC患者的治療難度［4］。探明TNBC的病理機(jī)制有助于準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后狀況，同時(shí)，通過(guò)探尋具有診治價(jià)值的TNBC分子標(biāo)志物在指導(dǎo)治療靶點(diǎn)中具有重要的價(jià)值［5］。

STAT3是人類胚胎期干細(xì)胞自我更新的主要基因之一，在癌癥組織中激活［6］。因此，STAT3在腫瘤干細(xì)胞自我更新與自我維持中發(fā)揮主要作用，并可作為腫瘤干細(xì)胞調(diào)控的重要基因。被激活的STAT3基因通過(guò)介導(dǎo)多種基因表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡與抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)等。相關(guān)文獻(xiàn)證實(shí)，STAT3與惡性腫瘤患者的預(yù)后狀況具有明顯的關(guān)系［7］。另有文獻(xiàn)報(bào)道顯示，被激活的STAT3通過(guò)促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞增殖與抑制腫瘤干細(xì)胞分化，通過(guò)抑制STAT3表達(dá)而發(fā)揮阻礙腫瘤干細(xì)胞生長(zhǎng)的作用［8］。結(jié)合本研究結(jié)果，STAT3過(guò)表達(dá)可作為T(mén)NBC及預(yù)后狀況的危險(xiǎn)因素。

表3　TNBC患者預(yù)后影響因素的Cox多因素分析

乳腺癌是激素依賴性腫瘤，乳腺癌細(xì)胞均呈陽(yáng)性表達(dá)。相關(guān)文獻(xiàn)證實(shí)，AR通路是TNBC病理形成的重要環(huán)節(jié)［9-11］。本研究結(jié)果顯示，AR在TNBC組織中的表達(dá)顯著增高，且與TNM分期、組織學(xué)分化程度及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有緊密的關(guān)系，有望成為T(mén)NBC患者預(yù)后的重要評(píng)估指標(biāo)。

MMP-13是MMP家族成員之一，其在腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)期間發(fā)揮重要的作用。作為鋅依賴性蛋白酶超家族，MMP家族成員可降低細(xì)胞外基質(zhì)的基底膜與蛋白成分［12］。因此，MMP在間質(zhì)細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)與惡性腫瘤病情進(jìn)展之間具有一定的關(guān)系。MMP-13通過(guò)降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅹ型膠原纖維，原纖維蛋白，蛋白多糖與纖維連接蛋白，在基底細(xì)胞癌、皮膚癌、結(jié)直腸癌與瘢痕癌中過(guò)表達(dá)，且與癌組織的生物學(xué)行為及其預(yù)后具有一定的關(guān)系［13］。本研究結(jié)果表明，MMP-13在TNBC組織中顯著高表達(dá)，提示MMP-13在TNBC的病情發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。同時(shí)，TNMⅢ～Ⅳ期、低組織學(xué)分化程度與有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)MP-13陽(yáng)性表達(dá)率可能更高。結(jié)合Cox多因素回歸分析結(jié)果，MMP-13陽(yáng)性表達(dá)提示預(yù)后狀況欠佳，其與相關(guān)文獻(xiàn)具有一致性［14］。STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P＜0.05），TNM分期越高，組織學(xué)分化程度越低，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率越高。而TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是公認(rèn)的影響預(yù)后的因素，且受到眾多因素的影響。乳腺癌多種生物學(xué)特征均可能對(duì)生存具有重要的影響，STAT3、AR、MMP-13蛋白表達(dá)對(duì)生存的影響程度尚有待進(jìn)一步的研究探討。因此，STAT3、AR、MMP-13等多種基因網(wǎng)絡(luò)與信號(hào)傳導(dǎo)通路可能共同參與TNBC的病理形成，探尋TNBC信號(hào)傳導(dǎo)通路及其相互間的關(guān)聯(lián)有助于加深TNBC病理原因的認(rèn)識(shí)。

綜上所述，三陰性乳腺癌組織STAT3、AR、MMP-13陽(yáng)性表達(dá)明顯增高，且與臨床病理特征及預(yù)后狀況具有緊密的關(guān)系。

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Correlation between STAT3，AR，MMP-13 expression and prognosis in triple negative breast cancer

WANG Bing-gao#YUAN Xin-yan XING Zhi-bo WANG Feng-mei HOU Hong ZHANG Yan-hui
Department of Breast Surgery，Qingdao Central Hospital，Qingdao 266042，China

ObjectiveTo study the correlation between the expression of signal transducer and activator of transcription 3（STAT3），androgen receptor（AR），matrix metalloproteinase-13（MMP-13）expression in triple negative breast cancer（TNBC）tissues and the prognosis.Method180 patients with TNBC were enrolled as study group，while another 160 patients with normal breast tissue and had breast fibroadenoma resection during the same period were included as control group；Immunohistochemical SP method was applied to detect the expression level of STAT3，AR，and MMP-13. ResultThe positive expression rate of STAT3，AR and MMP-13 in the study group was significantly higher than that in the control group（P＜0.05）.Besides，STAT3，AR，and MMP-13 scores were positively correlated with TNM stage，and axillary lymph node metastasis（P＜0.05），though negatively correlated with histological differentiation（P＜0.05）.In Cox multivariate analysis，the positive expression of STAT3，AR，and MMP-13，TNM stage，histological grade，and lymph node metastasis were all factors influencing the prognosis of TNBC patients.ConclusionThe positive expression of STAT3，AR and MMP-13 was significantly increased in the triple negative breast cancer tissues，which may be closely related to the clinicopathological characteristics and prognosis.

triple negative breast cancer；STAT3；AR；MMP-13；prognosis

R737.9

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.29

2016-02-23）

（corresponding author），郵箱：wbgqd1965@126.com