宋倪媛 陳徐 李霞 何曉紅 張妍

[摘要] 目的 探討紫杉醇聯(lián)合洛鉑治療晚期卵巢癌的療效及其對核苷酸切除修復(fù)交錯互補(bǔ)基因1（ERCC1）、β-鏈蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）表達(dá)的影響。 方法 選取2008年1月～2013年5月崇州市人民醫(yī)院診治的60例卵巢癌患者為研究對象，根據(jù)術(shù)后化療方案的不同將患者分為紫杉醇+卡鉑組（PC組）和紫杉醇+洛鉑組（PL組），每組各30例。觀察并比較兩組患者化療后近遠(yuǎn)期臨床療效；采用熒光定量PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗分別檢測血液ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表達(dá)水平。 結(jié)果 PC組和PL組的總體有效率分別為76.66%和83.33%，疾病控制率為93.33%和96.67%；PL組的治療有效率和疾病控制率均略高于PC組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；PL組的不良反應(yīng)發(fā)生率（16.67%）明顯低于PC組（40.00%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；隨訪結(jié)果顯示，兩組1年、2年生存率、局部復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移率、平均生存時間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；PL組患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表達(dá)和蛋白含量均顯著低于PC組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；但兩組患者β-catenin的mRNA表達(dá)和蛋白含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 紫杉醇聯(lián)合洛鉑對晚期卵巢癌具有較好的臨床療效且不良反應(yīng)少，ERCC1和β-tubulin Ⅲ表達(dá)水平的降低可能是其潛在的作用機(jī)制。

[關(guān)鍵詞] 紫杉醇；洛鉑；卵巢癌；核苷酸切除修復(fù)交錯互補(bǔ)基因1；β-鏈蛋白；β3-微管蛋白

[中圖分類號] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）02（c）-0115-04

Efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of the advanced ovarian cancer and its influence on the expression of ERCC1， β-catenin and β-tubulin Ⅲ

SONG Niyuan CHEN Xu LI Xia HE Xiaohong ZHANG Yan

Department of Obstetrics， the People's Hospital of Chongzhou City， Sichuan Province， Chongzhou 611230， China

[Abstract] Objective To explore the efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of advanced ovarian cancer and its influence on the expression of nucleotide excision repair cross complementing gene 1 （ERCC1）， β-catenin and β-tubulin Ⅲ. Methods Sixty patients with advanced ovarian cancer from January 2008 to May 2013 in the People's Hospital of Chongzhou City were selected as the research objects， and divided into Paclitaxel plus Carboplatin group （PC group） and Paclitaxel plus Lobaplatin group （PL group） according to the different treatment， each group had 30 cases. After treatment， the short and long term clinical curative effects were observed and compared between the two groups. The expressions of β-tubulin Ⅲ， β-catenin and ERCC1 of the blood samples were detected by fluorescence quantitative PCR and ELISA assay. Results The overall efficiency rate of PC group and PL group were 76.66% and 83.33% respectively， and the disease control rate were 93.33% and 96.67% respectively. The overall efficiency rate of PL group was slightly higher than the PC group， no statistically significant difference was observed between two groups （P > 0.05）； the incidence of adverse reactions in the PL group （16.67%） was significantly lower than that in the PC group （40.00%）， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the follow-up results showed that， the 1 year and 2 year survival rate， rate of local recurrence and metastasis and average survival time of two groups had no statistically significant difference （P > 0.05）； the mRNA expressions and protein contents of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ of the PL group were significantly lower than those of the PC group， the differences were statistically significant （P < 0.01）， but no significant difference was found in the expression of β-catenin （P > 0.05）. Conclusion Paclitaxel combined with Lobaplatin has good clinical efficacy and less adverse reactions in the treatment of advanced ovarian cancer， and the reduced expression of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ may be the potential mechanism.

[Key words] Paclitaxel； Lobaplatin； Ovarian cancer； ERCC1； β-catenin； β-tubulin Ⅲ

卵巢癌是臨床上常見的婦科惡性腫瘤之一，病死率高居各類婦科腫瘤的首位[1]，治療上以腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合鉑類藥物化療為主[2]。紫杉醇是紅豆杉屬植物中復(fù)雜的次生代謝物，對多種腫瘤均具有良好療效[3]，洛鉑則是一種穩(wěn)定的水溶性鉑類烷化劑，屬于第3代鉑類抗腫瘤藥物[4]，本研究擬探討紫杉醇與洛鉑聯(lián)合化療策略的臨床療效和安全性及核苷酸切除修復(fù)交錯互補(bǔ)基因1（excision repair cross complementing，ERCC1）、β-鏈蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）的表達(dá)水平變化?，F(xiàn)總結(jié)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年1月～2013年5月四川省崇州市人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）診治的60例卵巢癌患者為研究對象，年齡32～71歲，平均（40.54±7.36）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期[5]Ⅲ期42例，Ⅳ期18例；Karnofsky評分70～85分，平均（75.86±6.04）分；漿液型29例，黏液型21例，混合性漿液黏液型8例，透明細(xì)胞癌2例；低分化45例，中分化12例，高分化3例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診卵巢癌，且CT或MRI檢測均未發(fā)現(xiàn)明顯的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；②肝腎功能、心電圖檢查及骨髓功能檢查無明顯異常；③未接受任何放療或化療，且無腹部或盆腔手術(shù)史；④Karnofsky評分均≥70分，可耐受全程的治療；⑤預(yù)計生存時間>6個月。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。所有患者均經(jīng)腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)治療，并根據(jù)術(shù)后化療方案的不同將患者分為紫杉醇+卡鉑組（PC組）和紫杉醇+洛鉑組（PL組），每組各30例，兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 治療方案

PL組患者給予靜脈滴注紫杉醇（辰欣藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號H20057404）135～175 mg/m2，靜脈滴注洛鉑（海南長安國際制藥有限公司，批準(zhǔn)文號H20080359）50 mg/m2，每21天為1個療程；PC組患者則予以135～175 mg/m2紫杉醇靜脈滴注；卡鉑（齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號H20020181）血藥濃度-時間曲線下面積（area under the curve，AUC） = 5.0靜脈滴注，每21天為1個療程。治療過程中詳細(xì)觀察患者不良反應(yīng)發(fā)生的情況，計算不良反應(yīng)發(fā)生率[6]。

1.3 實(shí)時熒光定量PCR法測定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達(dá)

分別采集化療前后患者的血液，離心后提取RNA，行熒光定量PCR檢測。PCR引物的合成均由上海Invitrogen公司承擔(dān)完成，引物序列參考文獻(xiàn)[7-8]。ERCC1：上游5'-TTGGCGACGTAATTCCCGA-3'，下游5'-CAGGTTGTGGTAGCGGAGG-3'；β-tubulin Ⅲ：上游5'-GTTCTGGGAA GTCATCAGTGATGA-3'，下游5'-GTCCGAGTCGCCCACGTA-3'；β-catenin：上游5'-GCCACAGGATTACAAGAAGC-3'，下游5'-CCACCAGAGTGAAAAGAACG-3'；GAPDH：上游5'-CCTCAAGATCATCAGCAAT-3'，下游5'-CCATCCACAG TCTTCTGGGT-3'。SYBR Green熒光PCR反應(yīng)參數(shù)條件均為95℃，預(yù)變性5 min，1個循環(huán)；95℃變性10 s、退火延伸（ERCC1和β-tubulin Ⅲ，60℃；β-catenin，58℃）15 s，72℃ 20 s，持續(xù)40個循環(huán)；以2-ΔΔCt方法分別計算各樣本各個基因的Ct值，并用GAPDH的Ct值進(jìn)行校正。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達(dá)

分別采集化療前后患者血液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達(dá)水平。其中，ERCC1、β-tubulin Ⅲ檢測試劑盒購于上海朗頓生物科技有限公司；β-catenin檢測試劑盒由上海拜力生物科技有限公司提供。檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.5 近期臨床療效評價

依據(jù)實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)[9]評估臨床療效：①完全緩解（CR）：腫瘤完全消失且無新病灶出現(xiàn)，持續(xù)大于1個月；②部分緩解（PR）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積縮小≥50%并持續(xù)1個月以上，其他病變無明顯進(jìn)行性加重；③穩(wěn)定（SD）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積縮小<50%且增大≤25%；④進(jìn)展（PD）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積增大>25%。總體治療有效率 = （CR+PR）/總例數(shù)×100%；疾病控制率=（CR+PR+SD）/總例數(shù)×100%。

1.6 遠(yuǎn)期隨訪觀察

追蹤隨訪觀察2年，分別計算兩組患者的平均生存時間、1、2年生存率及腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的發(fā)生率。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本的Student-t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；應(yīng)用Kaplan-Meier法計算兩組患者的總體生存時間，Log-rank檢驗分析兩組間生存時間的差異；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者近期臨床療效比較

PL組的治療總體有效率和疾病控制率均略高于PC組，兩組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2 = 0.417、0.351，均P > 0.05）。見表1。

表1 兩組患者總體有效率和疾病控制率比較（例）

注：CR：完全緩解；PR：部分緩解；SD：進(jìn)展；PD：進(jìn)展

2.2 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較

PL組患者的總不良反應(yīng)發(fā)生率明顯低于PC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2 = 4.022，P < 0.05）。見表2。

表2 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生狀況比較（例）

注：與PC組比較，*P < 0.05

2.3 兩組患者遠(yuǎn)期臨床療效比較

兩組患者1年生存率、2年生存率、局部復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移率和平均生存時間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3、圖1。

表3 兩組患者隨訪生存分析結(jié)果比較

圖1 兩組患者生存時間比較

2.4 兩組患者ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表達(dá)水平比較

PL組患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表達(dá)和蛋白含量均顯著低于PC組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；但兩組患者β-catenin的mRNA表達(dá)和蛋白含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表4。

3 討論

紫杉醇聯(lián)合卡鉑的治療方案是晚期卵巢癌術(shù)后化療的標(biāo)準(zhǔn)方案，但有高達(dá)50%左右的患者在治療結(jié)束后出現(xiàn)疾病的復(fù)發(fā)或?qū)λ幬锂a(chǎn)生嚴(yán)重的耐受性，導(dǎo)致治療失敗[10-12]。而且，紫杉醇與卡鉑的聯(lián)合化療方案也極易誘發(fā)外周神經(jīng)毒性、骨髓抑制、消化道反應(yīng)等諸多副作用[13-14]。本研究采用紫杉醇配合洛鉑靜脈滴注的方式治療晚期卵巢癌患者，結(jié)果顯示PL的總體治療有效率、1年和2年生存率、平均生存時間均略高于PC組，但兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；PL組患者的不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于PC組，表明紫杉醇聯(lián)合洛鉑對患者機(jī)體的損傷較小，治療效果相對更優(yōu)，且在一定程度上可延長患者的生存時間。

研究顯示，ERCC1的表達(dá)水平不僅與腫瘤細(xì)胞DNA損傷修復(fù)密切相關(guān)，還是導(dǎo)致鉑類抗腫瘤藥物耐藥的關(guān)鍵基因[15-17]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PL組患者的ERCC1表達(dá)水平顯著低于PC組，提示了紫杉醇聯(lián)合洛鉑對卵巢癌患者高表達(dá)的ERCC1水平有更為顯著的抑制作用。β-tubulin Ⅲ即3型β微管蛋白，是抗微管藥物作用的主要靶點(diǎn)，高表達(dá)的β-tubulin Ⅲ同樣可以導(dǎo)致抗微管化療藥物的耐藥[18-19]。本研究結(jié)果顯示，PL組患者β-tubulin Ⅲ表達(dá)水平明顯低于PC組，該結(jié)果充分表明紫杉醇配合洛鉑的應(yīng)用可顯著增強(qiáng)抗微管藥物紫杉醇對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。β-catenin是一種介導(dǎo)細(xì)胞黏附、增殖與凋亡的多功能蛋白，也是鉑類藥物耐藥的關(guān)鍵因子[20-23]，但本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者β-catenin的表達(dá)水平無明顯差別，提示PL和PC用藥策略對β-catenin的影響無明顯差別，但β-catenin是否可作為卵巢癌療效判定的指標(biāo)尚需要大樣本臨床試驗加以證實(shí)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 楊念念，嚴(yán)亞瓊，鄭榮壽，等.中國2009年卵巢癌發(fā)病與死亡分析[J].中國腫瘤，2013，22（8）：617-621.

[2] 張愛臣，佟玲玲.卵巢癌的診治進(jìn)展[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科，2013，5（1）：5-8.

[3] 陳霄紅.紫杉醇聯(lián)合卡鉑治療卵巢癌的臨床研究[J].中國臨床研究，2014，27（3）：327-329.

[4] Hoff PM，Saad ED，Costa F，et al. Literature review and practical aspects on the management of Lobaplatin-associated toxicity [J]. Clin Colorectal Cancer，2012，11（2）：93-100.

[5] 林仲秋，謝玲玲，李晶.FIGO2013卵巢癌，輸卵管癌，腹膜癌新分期解讀[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2013，29（12）：921-923.

[6] Edwards IR，Aronson JK. Adverse drug reactions：definitions，diagnosis，and management [J]. The Lancet，2000，356（9237）：1255-1259.

[7] 陳可心，李琛，秦譽(yù)，等.ERCC1，TUBB3在上皮性卵巢癌中表達(dá)及其臨床病理特征和相關(guān)性的研究[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2014，28（4）：294-298.

[8] 張根豪，劉俊文，蘇利沙，等.阿司匹林對人卵巢癌組織和SKOV3細(xì)胞SOX7表達(dá)和Wnt/β-catenin信號通路的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2015，10（2）：240-243.

[9] Edeline J，Boucher E，Rolland Y，et al. Comparison of tumor response by response evaluation criteria in solid tumors （RECIST） and modified RECIST in patients treated with sorafenib for hepatocellular carcinoma [J]. Cancer，2012，118（1）：147-156.

[10] Pignata S，Scambia G，Katsaros D，et al. Carboplatin plus Paclitaxel once a week versus every 3 weeks in patients with advanced ovarian cancer （MITO-7）：a randomised，multicentre，open-label，phase 3 trial [J]. Lancet Oncol，2014，15（4）：396-405.

[11] 賀凌云，朱煒，羅君玲.單周與3周紫杉醇聯(lián)合卡鉑方案治療卵巢癌臨床療效分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2015， 17（9）：12-15.

[12] 于俊麗.紫杉醇聯(lián)合卡鉑不同給藥途徑治療卵巢癌52例療效分析[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2015，9（3）：134-135.

[13] Pignata S，Scambia G，F(xiàn)errandina G，et al. Carboplatin plus Paclitaxel versus Carboplatin plus pegylated liposomal doxorubicin as first-line treatment for patients with ovarian cancer：the MITO-2 randomized phase Ⅲ trial [J]. J Clin Oncol，2011，29（27）：3628-3635.

[14] Dalton HJ，Yu X，Hu L，et al. An economic analysis of dose dense weekly Paclitaxel plus Carboplatin versus every-3-week Paclitaxel plus Carboplatin in the treatment of advanced ovarian cancer [J]. Gynecol Oncol，2012，124（2）：199-204.

[15] Steffensen KD，Waldstrom M，Jakobsen A. The relationship of platinum resistance and ERCC1 protein expression in epithelial ovarian cancer [J]. Int J Gynecol Cancer，2009，19（5）：820-825.

[16] 張自森，李燦宇，巴楠，等.晚期卵巢癌患者外周血與腹腔積液中ERCC1基因表達(dá)研究[J].中國婦幼保健，2013， 28（20）：3342-3344.

[17] 于艷麗，熊艷杰，田志華，等.上皮性卵巢癌DNA-PKcs和ERCC1表達(dá)與預(yù)后相關(guān)因素分析[J].中國臨床新醫(yī)學(xué)，2013，6（6）：519-523.

[18] 王秋芳，朱士娜，劉暉，等.卵巢上皮癌組織MyD88和β-Ⅲ微管蛋白表達(dá)[J].中華腫瘤防治雜志，2013，20（14）：1086-1089.

[19] 杜培，張曉薇，陳禮全，等.原發(fā)性上皮性卵巢癌患者中β-tubulinⅢ表達(dá)與紫杉醇化療耐藥的相關(guān)性研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（7）：1107-1109.

[20] 胡雪梅，張繼學(xué)，王瑞軍，等.Ezrin、E-cadherin和β-catenin在卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2010，36（1）：31-34.

[21] 陳蘭花，李榮崗，孫麗霞，等.β-catenin、P53和E-cadherin在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床病理研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2015，22（17）：61-63，66.

[22] 薛令軍，李培梅，湯祎，等.β-連環(huán)素和P65在喉癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)系研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（6）：4-5，8.

[23] 張巧玲，楊永強(qiáng).髓系白血病患者骨髓單個核細(xì)胞β-連環(huán)蛋白mRNA的表達(dá)[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（20）：4-7.

（收稿日期：2015-11-20 本文編輯：任 念）