姚佳梅，邱新建，黃惠勇*，趙琳琳，王文波，周露，王勝，陳瓊，胡隨瑜

（1.中南大學湘雅醫(yī)院老年病科，湖南長沙410008；2.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷研究所，湖南長沙410208；3.中南大學湘雅醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，湖南長沙410008）

枳殼對丁螺環(huán)酮在健康大鼠體內(nèi)藥物動力學的影響

姚佳梅1，邱新建2，3，黃惠勇2*，趙琳琳3，王文波3，周露3，王勝3，陳瓊1，胡隨瑜3

（1.中南大學湘雅醫(yī)院老年病科，湖南長沙410008；2.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷研究所，湖南長沙410208；3.中南大學湘雅醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，湖南長沙410008）

目的研究枳殼對丁螺環(huán)酮在健康大鼠體內(nèi)藥物動力學的影響。方法將SD大鼠隨機分為丁螺環(huán)酮組，丁螺環(huán)酮加枳殼低劑量組（15 g/kg），丁螺環(huán)酮加枳殼高劑量組（30 g/kg），測定給藥后5、10、20、30、45、60、90、120、240、360、480、600 min丁螺環(huán)酮的血藥濃度，計算并比較其藥動學參數(shù)。結(jié)果與丁螺環(huán)酮組比較，丁螺環(huán)酮加枳殼低劑量組和高劑量組中丁螺環(huán)酮AUC（0-t）分別增加2.49和4.18倍，Cmax分別增加1.63和2.57倍，Tmax從0.28 h分別延長至0.52和1.06 h，t1/2從0.96 h分別延長至2.18和4.87 h，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論枳殼可增加同服藥物丁螺環(huán)酮的AUC（0-t）和Cmax，提高丁螺環(huán)酮生物利用度，并有劑量依賴性趨勢，枳殼與丁螺環(huán)酮發(fā)生顯著的藥動學相互作用。

枳殼；丁螺環(huán)酮；藥物動力學；藥動學相互作用

〔Abstract〕Objective To investigate the effect of Fructus aurantii on the pharmacokinetics of buspirone in healthy rats. Methods SD rats were randomly divided into buspirone group，the low dose group of Fructus aurantii（15 g/kg）plus buspirone，and the high dose group of Fructus aurantii（30 g/kg）plus buspirone，respectively.The blood concentrations of buspirone were determined after 5，10，20，30，45，60，90，120，240，360，480，600 min and their pharmacokinetic parameters were calculated.Results Compared with the buspirone group，the AUC（0-t）of the low dose group and high dose group were increased by 2.49 and 4.18 time and the Cmaxwere increased by 1.63 and 2.57 time，respectively.The Tmaxof the low dose group and high dose group were extended from 0.28 h to 0.52 h and 1.06 h and the t1/2were extended from 0.96 h to 2.18 h and 4.87 h，respectively.The differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Fructus aurantii can increase the AUC（0-t）and Cmaxof buspirone，improve the bioavailability of buspirone，and the changs of parameters show the dependence trendency.Fructus aurantii and buspirone have significant pharmacokinetic interactions.

〔Keywords〕Fructus aurantii；buspirone；pharmacokinetics；pharmacokinetic interactions

丁螺環(huán)酮為非苯二氮卓類抗焦慮藥，主要用于治療廣泛性焦慮，亦可輔助治療抑郁癥。焦慮患者常伴有功能性消化不良等胃腸動力障礙，長期服用丁螺環(huán)酮等抗焦慮藥物常導致胃腸道不適［1］。疾病的中西醫(yī)結(jié)合治療是臨床最常用的方法之一，丁螺環(huán)酮常與抗焦慮抑郁復方柴胡疏肝散、四逆散等復方協(xié)同治療焦慮癥，增強抗焦慮且改善胃腸道不適［2］。

枳殼首載于《雷公炮炙論》，為臨床最常用的理氣藥物之一，具理氣寬中，行滯消脹之功，為柴胡疏肝散、四逆散等常用抗焦慮抑郁方的重要組成中藥?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明，枳殼具有調(diào)節(jié)胃腸動力、抗抑郁、抑菌［3-5］等藥理作用。枳殼為酸橙干燥未成熟果實入藥，酸橙和葡萄柚同屬蕓香科，柑橘亞科，柑橘屬，柑橘亞屬［6-7］。文獻報道：葡萄柚汁可與40多種臨床常用藥物（丁螺環(huán)酮、辛伐他汀等）發(fā)生藥動學相互作用甚至毒副反應［8］。枳殼與葡萄柚汁富含大量相同黃酮類成分［6-7］，枳殼是否與葡萄柚汁一樣影響丁螺環(huán)酮的代謝并發(fā)生顯著藥動學相互作用有待研究，柴胡疏肝散等抗焦慮抑郁復方是否因含枳殼與丁螺環(huán)酮聯(lián)用發(fā)生藥動學相互作用亦有待研究。

本研究通過建立高選擇性、高靈敏度HPLCMS/MS分析方法，檢測并比較丁螺環(huán)酮單獨服用和聯(lián)用枳殼后丁螺環(huán)酮血藥濃度及藥動學參數(shù)，闡明枳殼對丁螺環(huán)酮藥物動力學的影響，為枳殼及其復方與西藥安全、有效的臨床聯(lián)用提供實驗參考。

1　材料

1.1藥品及試劑

枳殼購自中南大學湘雅醫(yī)院中藥房（產(chǎn)地：湖南，編號：2013040611），鹽酸丁螺環(huán)酮片（江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號：20121201），丁螺環(huán)酮標準品（純度＞98%，中國藥品生物制品檢定所，批號：101059-201101），磺胺甲噁唑（純度＞99%，中國藥品生物制品檢定所，批號：100025-200904），甲醇和乙腈為色譜純（美國Tedia公司），冰醋酸和乙醇為分析純（天津市恒興化學試劑制造有限公司），純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

1.2主要儀器

LC-MS液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津有限公司）；API 3200三重四極質(zhì)譜儀（加拿大應用生物系統(tǒng)公司）；Zorbax Eclipse C18反相色譜柱（德國安捷倫科技有限公司）；BP211D電子分析天平（德國賽多利斯公司）；SIGMA2-16K高速冷凍離心機（德國SIGMA公司）；HGC-12A氮吹儀（北京成萌偉業(yè)科技有限公司））。

2　方法與結(jié)果

2.1藥物制備

枳殼湯劑制備：稱取枳殼350 g置于不銹鋼鍋中，加入8倍水浸泡30 min，電磁爐加熱至沸騰后，文火煎煮30 min，過濾，藥渣再加入6倍水加熱至沸騰后文火煎煮30 min，過濾，合并兩次濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至生藥濃度1.7 g/mL，-20℃冰箱保存。丁螺環(huán)酮：鹽酸丁螺環(huán)酮片（5 mg/片）溶于純凈水中，超聲30 min，配制成濃度為0.5 mg/mL溶液。

2.2動物及分組

SD大鼠，SPF級，雄性，體質(zhì)量200～250 g，由中南大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SYXK（湘）2011-0001。將24只SD大鼠隨機分為3組：丁螺環(huán)酮組（0.9%生理鹽水10 mL/kg灌胃8 d，前7天，2次/d，第8天上午灌胃生理鹽水1次，灌胃30 min后再予丁螺環(huán)酮5 g/kg），枳殼15g/kg加丁螺環(huán)酮組（枳殼15 g/kg灌胃8 d，前7天，2次/d，第8天灌服枳殼1次，30 min后予丁螺環(huán)酮5 g/kg），枳殼30 g/kg加丁螺環(huán)酮組（枳殼30 g/kg灌胃8 d，具體灌胃方法同枳殼低劑量組）。分別于灌胃丁螺環(huán)酮后5、10、20、30、45、60、90、120、240、360、480、600 min尾靜脈取血500μL，4000 r/min離心15 min，取血漿上清液200μL，-20℃冰箱保存待測。

2.3血樣本預處理方法

將200μL血漿置入5 mL的EP管中，加入50μL的內(nèi)標磺胺甲噁唑（SMZ，3.775μg/mL），加入2 mL乙酸乙酯和0.5 mL二氯甲烷，超聲溶解混合5 min，10000 r/min離心10 min，取上清液于另一EP管，置40℃水浴，氮氣流吹干。殘留物加入1 mL甲醇復溶，超聲溶解5 min后，10000 r/min離心10 min，上清液中加入1 mL蒸餾水，超聲溶解5 min，LC-MS分析前用0.22μm過濾膜過濾。

2.4色譜及質(zhì)譜條件

反相色譜柱：Zorbax Eclipse C18（4.6 mm× 250 mm，3.5μm），溫度保持在40℃，流動相：甲醇∶0.1%甲酸（40∶60，v/v）；流速：0.3 mL/min；進樣量：10μL；整個分析流程用時2 min。碰撞能量（CE）：丁螺環(huán)酮43 V，SMZ 22 V。正離子模式優(yōu)化去簇電壓（DP）：丁螺環(huán)酮65V，SMZ 50 V。氮氣作為霧化氣和輔助氣，質(zhì)譜采用ESI正離子多反應（MRM）方式檢測：離子選擇通道分別為m/z386→121.7（丁螺環(huán)酮）和m/z 409→237.7（SMZ）。其他離子噴霧電壓：5500 V；離子源溫度（TEM）：500℃；氣簾氣（CUR）：20 psi；碰撞氣體（CAD）：5 psi，霧化氣（GS1）：50 psi；輔助氣（GS2）：50 psi。

2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

2.6方法學評價

2.6.1專屬性在上述色譜條件下，分別取空白血漿、空白血漿加標準品溶液、大鼠灌胃丁螺環(huán)酮30 min后血漿，進行專屬性測定。丁螺環(huán)酮和內(nèi)標SMZ保留時間分別為2 min和1.5 min，峰形良好，分離完全無雜峰，不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)干擾，結(jié)果見圖1（A-C）。

圖1　丁螺環(huán)酮與內(nèi)標SMZ的色譜圖

2.6.2標準曲線和與最低定量下限取空白血漿200μL，加入丁螺環(huán)酮標準品溶液，按“2.3”項下方法制備血漿樣品，配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、4.8、14.4、43.2、129.6 ng/mL血漿樣本。以丁螺環(huán)酮與SMZ峰面積比為橫坐標（x），丁螺環(huán)酮濃度為縱坐標（y），加權(quán)最小二乘法1/x2進行回歸運算，丁螺環(huán)酮線性回歸方程：

y=26.16x+0.69

結(jié)果表明：丁螺環(huán)酮血藥濃度的線性范圍0.05～129.60 ng/mL，r=0.9984，線性關(guān)系良好。信噪比S/N=10時的濃度為最低定量下限（Lower Limit of Quantitation，LLOQ），本方法中丁螺環(huán)酮LLOQ為0.05 ng/mL。

2.6.3精密度按“2.3”項下方法制備成丁螺環(huán)酮血漿濃度分別為0.8、4.8和43.2 ng/mL，各濃度均制備5個樣本，同一天測定5次以檢測日內(nèi)精密度，連續(xù)測定5 d以檢測日間精密度，RSD均小于2%，結(jié)果表明該方法日內(nèi)、日間精密度良好。

2.6.4加樣回收率按“2.3”項下方法制備濃度為0.8、4.8和43.2 ng/mL血漿樣品5份，通過比較實測濃度與標測濃度的濃度比計算加樣回收率，結(jié)果顯示樣品加樣回收率均在99%以上，RSD小于5%。

2.6.5穩(wěn)定性按“2.3”項下方法制備低、中、高3個濃度的血漿質(zhì)控樣本，分別于室溫下放置4 h，反復凍融3次，-20℃冰箱保存7天，考查丁螺環(huán)酮的穩(wěn)定性。結(jié)果表明在上述3種條件下，樣本的穩(wěn)定性均良好，RSD小于3%。

2.6.6質(zhì)譜結(jié)果質(zhì)譜采用ESI正離子多反應（MRM）方式檢測，丁螺環(huán)酮和內(nèi)標SMZ分別選擇m/z 386.2/122.1和254.1/156.1。丁螺環(huán)酮和內(nèi)標SMZ的質(zhì)譜圖見圖2。

2.7藥物動力學研究

圖2　丁螺環(huán)酮（A）與內(nèi)標SMZ（B）的質(zhì)譜圖

大鼠灌服丁螺環(huán)酮后不同時間點取血，繪制藥-時曲線（見圖3）。使用DAS藥代動力學數(shù)據(jù)分析程序，統(tǒng)計藥動學參數(shù)（見表1）。丁螺環(huán)酮加枳殼低劑量組（15 g/kg）和高劑量組（30 g/kg）中丁螺環(huán)酮AUC（0-t）分別增加2.49和4.18倍，Cmax分別增加1.63和2.57倍，Tmax從0.28 h分別延長至0.52和1.06 h，t1/2從0.96 h分別延長至2.18和4.87 h，與丁螺環(huán)酮組比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明丁螺環(huán)酮與枳殼聯(lián)用可顯著增加丁螺環(huán)酮的血藥濃度及生物利用度，延長半衰期，且呈劑量依賴性趨勢。

表1　丁螺環(huán)酮的主要藥動學參數(shù)（±s，n=8）

表1　丁螺環(huán)酮的主要藥動學參數(shù)（±s，n=8）

注：與丁螺環(huán)酮組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與丁螺環(huán)酮組+枳殼15 g/kg比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

藥動學參數(shù)丁螺環(huán)酮組AUC（0-t）［ng/（mL·h）］MRT（0-t）（h）t1/2（h）Tmax（h）Cmax（ng/mL）21.55±4.96 3.53±0.33 0.96±0.11 0.28±0.10 7.43±3.15丁螺環(huán)酮+枳殼（15 g/kg）組53.67±12.30* 3.75±0.36 2.18±0.35* 0.52±0.21* 12.11±2.18*丁螺環(huán)酮+枳殼（30 g/kg）組90.08±21.62*#3.40±0.20 4.87±0.64*#1.06±0.34*#19.09±3.36*#

圖3　各組大鼠丁螺環(huán)酮藥物濃度-時間曲線

3　討論

藥物相互作用（drug-drug interaction，DDI）是指幾種藥物同時服用，藥物的效應加強或削弱甚至發(fā)生毒副反應。DDI包括藥動學和藥效學相互作用，藥動學相互作用是指一種藥物改變同服藥物的吸收、分布和代謝，引起藥效改變或發(fā)生不良反應。本實驗基于枳殼與葡萄柚汁同科同屬，且含有大量相同黃酮類成分，葡萄柚汁可與大量同服藥物發(fā)生藥動學相互作用的特性，進行了枳殼與丁螺環(huán)酮的藥動學相互作用研究，結(jié)果表明，與丁螺環(huán)酮組相比較，丁螺環(huán)酮加枳殼（15 g/kg）低劑量組丁螺環(huán)酮AUC（0-t）和Cmax分別增加了2.49倍和1.63倍（P＜0.05）；丁螺環(huán)酮加枳殼（30 g/kg）高劑量組丁螺環(huán)酮AUC（0-t）和Cmax分別增加了4.18倍和2.57倍（P＜0.05）。不同劑量枳殼與丁螺環(huán)酮聯(lián)用，丁螺環(huán)酮的Tmax明顯延長，消除半衰期t1/2顯著增加，有劑量依賴性趨勢。枳殼與丁螺環(huán)酮發(fā)生了顯著的藥動學相互作用，提示枳殼可能與大量常用西藥發(fā)生藥動學相互作用甚至毒副反應。

藥動學相互作用的機理是中西藥相互作用研究的熱點，CYP450酶是人體主要的藥物代謝酶，絕大多數(shù)藥物經(jīng)CYP450酶代謝，主要包括CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6等，約有50%以上的藥物經(jīng)CYP3A4代謝。CYP450酶可被許多臨床藥物抑制和誘導，導致藥物代謝減少或增加［9］。P-gp是與代謝密切相關(guān)的藥物轉(zhuǎn)運蛋白，腸黏膜P-gp可將底物從腸上皮細胞泵回腸腔從而限制藥物的吸收［10］。CYP450和P-gp介導了絕大多數(shù)藥物的藥動學相互作用，鑒于兩者在DDI中的重要性，美國FDA規(guī)定新藥需進行與藥動學相關(guān)的CYP450和P-gp研究［11］。課題組前期研究表明，枳殼中成分水合橙皮內(nèi)酯為可抑制CYP1A2和CYP2C9酶，具有發(fā)生藥動學相互作用的潛質(zhì)［12］，另有文獻報道，枳殼成分柚皮苷通過抑制CYP3A4活性增加他莫昔芬的AUC和Cmax（P＜0.01）［13］。柚皮素和橙皮素可同時抑制CYP3A4與P-gp使非洛地平生物利用度成倍增加［14-15］。枳殼與丁螺環(huán)酮發(fā)生藥動學相互作用的機理可能與所含成分對CYP450和P-gp的作用相關(guān)。

中西醫(yī)結(jié)合治療焦慮癥是臨床常用方法之一，丁螺環(huán)酮常與柴胡疏肝散、四逆散等含枳殼復方協(xié)同抗焦慮，增強抗焦慮作用且改善胃腸動力。枳殼為上述復方的重點組成中藥，枳殼復方協(xié)同抗焦慮可能與枳殼顯著增加丁螺環(huán)酮血藥濃度，提高其生物利用度，延長半衰期有關(guān)，改善胃腸動力可能與枳殼具有行氣導滯之功有關(guān)。中西藥聯(lián)用的藥物相互作用研究一方面有利于闡明中西藥聯(lián)用增效的作用機理，另一方面提高聯(lián)合用藥的安全性，避免毒副作用的產(chǎn)生。課題組將進一步研究復方與丁螺環(huán)酮的藥物相互作用，為臨床安全、有效的中西藥聯(lián)用提供實驗參考。

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（本文編輯蘇維）

Effects of Fructus aurantii on Pharmacokinetics of Buspirone in Healthy Rats

YAO Jiamei1，QIU Xinjian2，3，HUANG Huiyong2*，ZHAO Linlin3，WANG Wenbo3，ZHOU Lu3，WANG Sheng3，CHEN Qiong1，HU Suiyu3
（1.Department of Gerontology，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410008，China；2 Institute of TCM Diagnostics，Hunan University of Chinese medicine，Changsha，Hunan 410007，China；3 Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410008，China）

R285.6；R969.2

A

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.09.004

2016-06-29

國家中醫(yī)藥管理局全國名老中醫(yī)藥專家胡隨瑜傳承工作室建設項目（國中醫(yī)藥人教發(fā)［2014］20號）；國家自然科學基金青年基金資助項目（81202807）；中國博士后科學基金第57批面上資助項目（2015M572254）。

姚佳梅，女，主治醫(yī)師，研究方向：老年醫(yī)學。

〔通迅作者〕*黃惠勇，男，教授，博士研究生導師，E-mail：tony27000@aliyun.com。