包　剛，劉　永，劉亞麗，常　虹,劉　瑩

(1.吉林油田總醫(yī)院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 放射治療科)

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MMP-13在骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中的表達(dá)分析

包剛1，劉永1，劉亞麗1，常虹1,劉瑩2*

(1.吉林油田總醫(yī)院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 放射治療科)

骨性關(guān)節(jié)炎(OA)為臨床中常見(jiàn)的一種非炎性、退行性、漸進(jìn)性、慢性關(guān)節(jié)病變[1]。目前，骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制還尚未明確。本文主要探討OA患者滑膜組織中MMP-13表達(dá)情況及意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取34例2014年3月-2015年5月在本院接受診治的OA患者為觀察組。男性10例，女性24例；年齡：19-70歲，平均(54.34±3.43)歲。選取同期在本院骨科接受治療的34例非OA患者作為對(duì)照組。男16例，女18例；年齡：20-70歲，平均(52.17±2.65)歲。在性別、年齡等一般資料比較上，2組患者無(wú)顯著性差異(P>0.05)。所有入選患者均在接受手術(shù)治療過(guò)程中獲取滑膜標(biāo)本作為本次研究檢測(cè)對(duì)象。

1.2儀器及方法

北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一抗MMP-13及相關(guān)試劑盒，由Dako公司生產(chǎn)的Envision試劑盒等，嚴(yán)格按照試劑盒具體說(shuō)明實(shí)施相關(guān)操作。具體操作步驟表現(xiàn)如下：收集患者接受關(guān)節(jié)置換、膝關(guān)節(jié)鏡、截肢手術(shù)等，從髕上囊位置切除下來(lái)的滑膜組織。在術(shù)后60 min之內(nèi)，使用生理鹽水對(duì)標(biāo)本進(jìn)行3次反復(fù)沖洗，然后迅速取1/2的標(biāo)本放置于液氮罐中，待實(shí)施Western blot蛋白提取操作時(shí)使用。使用濃度為10%的福爾馬林對(duì)另外1/2標(biāo)本進(jìn)行固定，再石蠟將其包埋，然后實(shí)施連續(xù)4 μm 切片。選用Envision法實(shí)施免疫組化染色，MMP-13一抗?jié)舛仍O(shè)置為1∶100，實(shí)施抗原經(jīng)高壓修復(fù)。按照試劑盒說(shuō)明嚴(yán)格執(zhí)行Western blot實(shí)驗(yàn)具體操作。

1.3結(jié)果判斷

陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%；弱陽(yáng)性(+)：11%≤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%；陽(yáng)性：25%<陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<50%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥50%。僅存在均勻或片狀黃染，或者未見(jiàn)顆粒者均視為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究結(jié)果通過(guò)SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料行χ2分析處理，以P<0.05表示差異比較存在顯著性。

2　結(jié)果

在Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果方面：MMP-13蛋白在對(duì)照組滑膜組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.263±0.431，在觀察組中的相對(duì)表達(dá)量為1.064±0.231，觀察組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。在免疫組化染色檢測(cè)方面：在對(duì)照組患者的滑膜組織僅見(jiàn)少部分MMP-13蛋白表現(xiàn)為陽(yáng)性表達(dá)，觀察組患者滑膜組織中MMP-13蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1-4。

表1　2組患者M(jìn)MP-13表達(dá)情況

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

圖1對(duì)照組MMP-13表達(dá)

圖2觀察組MMP-13在胞漿中表達(dá)

圖3觀察組MMP-13在漿細(xì)胞胞漿中表達(dá)

圖4觀察組MMP-13在細(xì)胞間質(zhì)中表達(dá)

3　討論

有報(bào)道指出，MMPs參與OA病理過(guò)程中，關(guān)鍵酶主要為基質(zhì)降解素(MMP-3)和明膠酶3(MMP-13)。MMP-13的作用主要是將膠原分子中所存在的三維螺旋結(jié)構(gòu)進(jìn)行分解，其對(duì)Ⅱ型膠原蛋白的降解尤為突出[2]。由此可推測(cè)，在OA的發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程中，MMP-13可直接降解軟骨基質(zhì)，同時(shí)，在OA病理機(jī)制中某種蛋白通道的激活中也有可能與MMP-13存在密切相關(guān)性[3]。本次研究結(jié)果顯示，在OA患者的滑膜組織中存在MMP-13蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，其陽(yáng)性率顯著高于非OA患者。Western blot操作結(jié)果顯示，MMP-13蛋白在OA患者中的表達(dá)量表現(xiàn)為明顯增高，與非OA患者表達(dá)量比較存在顯著性差異。研究顯示，MMP-13蛋白、MMP-3蛋白在OA患者滑膜組織中均表現(xiàn)為顯著高表達(dá)，Pearson相關(guān)分析，MMP-13蛋白與MMP-3蛋白的表達(dá)為正相關(guān)[4]。

[1]賞后來(lái),郭亭,趙建寧.骨性關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)的意義及研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2012,25(02)：204.

[2]張明,劉立宏,郭文娟,等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)骨性關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)液中miR-140的表達(dá)[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,37(12):1210.

[3]劉揚(yáng).白細(xì)胞介素-24基因在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用及意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2016,26(13): 63.

[4]賀占坤,沈杰威.MMP-2、MMP-3、MMP-9和TIMP-1評(píng)價(jià)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(32): 3872.

1007-4287(2016)09-1548-02

2015-09-22)