張江召+黃知平

【摘要】 目的 研究自體來源的慢性粒細(xì)胞性白血?。–ML）樹突狀細(xì)胞（DCs）治療慢性粒細(xì)胞（慢粒）白血病的基礎(chǔ)及臨床效果。方法 28例CML患者， 均接受體外誘導(dǎo)的自體慢粒來源DC靜脈回輸治療， 分析DC激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)自體來源CML的殺傷作用以及DC回輸前后外周血T調(diào)節(jié)性細(xì)胞的變化情況。結(jié)果 培養(yǎng)后， HLA-DR、CDla、CD80、CD86陽性細(xì)胞分別占（85.5±11.4）%、（62.5±19.5）%、（59.4±25.0）%、（54.6±19.8）%。DC回輸后， 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（DTH）均呈陽性， 紅斑直徑為10 mm左右， 外周血CD3+和CD4+T細(xì)胞百分率升高較為明顯， CD8+T細(xì)胞百分率變化不大。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查提示為慢粒緩解期， Ph染色體檢測(cè)提示陽性細(xì)胞數(shù)呈下降趨勢(shì)， BCR-ABL融合基因陽性細(xì)胞所占比例為57.0%～94.0%。治療期間， 部分患者偶有低熱表現(xiàn)， 未影響治療。結(jié)論 自體來源的DCs治療CML可激活T淋巴細(xì)胞對(duì)CML細(xì)胞的特異性殺傷作用， 生成的機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)可促進(jìn)慢粒緩解。

【關(guān)鍵詞】 慢性粒細(xì)胞性白血病；樹突狀細(xì)胞；T調(diào)節(jié)性細(xì)胞；免疫反應(yīng)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.052

慢性粒細(xì)胞性白血病是一種以粒系細(xì)胞慢性增殖為主要特征的惡性克隆性疾病， 相關(guān)研究證實(shí)， 激發(fā)自體特異性初始T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞的產(chǎn)生， 對(duì)CML細(xì)胞具有一定的殺傷作用。樹突狀細(xì)胞是目前已知的抗原遞呈能力最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞（APC）， 其表面CD80等高表達(dá)共刺激分子可由造血干細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞等誘導(dǎo)分化成熟， 這也構(gòu)成了自體來源DC治療CML的基礎(chǔ)[1]。本研究選取本院收治的28例CML患者作為研究對(duì)象， 旨在探討回輸自體來源DC治療該類病癥的臨床效果， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2014年3月～2015年10月收治的CML患者28例作為研究對(duì)象， 均為初發(fā)初治患者， 經(jīng)骨髓細(xì)胞學(xué)、免疫分型檢查并確診， 符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)， 其中男18例， 女10例， 年齡25～40歲， 平均年齡（28.8±3.8）歲， 初始白細(xì)胞為（260～520）×109/L， Ph染色和BCR-ABL融合基因均為陽性。

1. 2 方法

1. 2. 1 試驗(yàn)方案 所用試劑包括鼠抗人CDla單克隆抗體和CD86單克隆抗體（均為PE標(biāo)記）， 抽取患者外周抗凝血， 應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）， 鏡下觀察所誘導(dǎo)的DC的形態(tài)， 流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD80、CD86；采用熒光原位雜交法（FISH）對(duì)誘導(dǎo)后細(xì)胞的源性進(jìn)行分析， 與健康體檢者PBMC誘導(dǎo)的DC進(jìn)行對(duì)照， 采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）法對(duì)BCR-ABL融合基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)；獲得并激活T淋巴細(xì)胞， 調(diào)整自體CML細(xì)胞濃度， 分析其對(duì)CML細(xì)胞的殺傷作用。

1. 2. 2 治療方案 均采用VCDP方案， 停用化療藥物后， 回輸DC， 每次回輸前， 以水浴常規(guī)復(fù)蘇低溫保存DC， 溫度為37℃， 經(jīng)射線照射后再置入生理氯化鈉溶液中， 靜脈輸注， 回輸數(shù)量為（4.2～6.0）×106， 1次/周， 連續(xù)治療4周。均在化學(xué)治療前無菌抽取外周血， 進(jìn)行DC的擴(kuò)增、誘導(dǎo)和凍存。在回輸前后均進(jìn)行DTH試驗(yàn)， 記錄紅斑直徑；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞百分率， 分別在回輸后第1、3個(gè)月檢測(cè)外周血Ph染色體、白細(xì)胞計(jì)數(shù)， 并計(jì)算BCR-ABL融合基因陽性細(xì)胞所占比例。

2 結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果顯示， 經(jīng)重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重組人白細(xì)胞介素4（rhIL-4）、抗人重組腫瘤壞死因子（rHTNFα）培養(yǎng)后， HLA-DR、CDla、CD80、CD86陽性細(xì)胞分別占（85.5±11.4）%、（62.5±19.5）%、（59.4±25.0）%、（54.6±19.8）%。DC回輸后， DTH均呈陽性， 紅斑直徑為10 mm左右， 外周血CD3+和CD4+T細(xì)胞百分率升高較為明顯， CD8+T細(xì)胞百分率變化不大。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查提示為慢粒緩解期， Ph染色體檢測(cè)提示陽性細(xì)胞數(shù)呈下降趨勢(shì)， BCR-ABL融合基因陽性細(xì)胞所占比例為57.0%～94.0%。治療期間， 部分患者偶有低熱表現(xiàn)， 未影響治療。

3 討論

DC用于腫瘤免疫治療是現(xiàn)階段研究的一大熱點(diǎn)， 回輸DC現(xiàn)已成為防止白血病復(fù)發(fā)的一大手段， 雖然目前臨床對(duì)不同DC回輸途徑的激發(fā)免疫作用效果評(píng)價(jià)尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)， 但是普遍認(rèn)為回輸利于DC在體內(nèi)的分布， 對(duì)于CML而言， 調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)， 逆轉(zhuǎn)對(duì)CML抗原的耐受， 是啟動(dòng)回輸自體來源的DC的基礎(chǔ)[2]。體內(nèi)外研究均證實(shí)， DC能遞呈腫瘤抗原， 限制特異抗腫瘤的T細(xì)胞應(yīng)答， 其在抗腫瘤免疫中發(fā)揮的作用已得到公認(rèn)。與常規(guī)治療方法相比， 自體來源的DC治療CML可直接激發(fā)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞， 減少自身免疫性疾病的發(fā)生幾率， 同時(shí)還具備鑒別免疫源性的白血病抗原、輔助腫瘤免疫治療等潛在應(yīng)用優(yōu)勢(shì)， 目前已取得的臨床效果以及今后的應(yīng)用前景均較為理想[3， 4]。本組研究中， 納入患者均接受回輸DC治療， 進(jìn)行為期3個(gè)月的觀察， CML患者骨髓象為慢粒緩解期， Ph染色體陽性細(xì)胞數(shù)和BCR-ABL融合基因陽性細(xì)胞所占比例均呈下降趨勢(shì)， 基本上達(dá)到了治療預(yù)期。

綜上所述， 自體來源的DCs治療CML可激活T淋巴細(xì)胞對(duì)CML細(xì)胞的特異性殺傷作用， 生成的機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)可促進(jìn)慢粒緩解， 且治療的安全性較高， 可作為CML治療的新方法， 在臨床上加以推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 王椋， 曲學(xué)彬， 趙春華.慢性粒細(xì)胞白血病腫瘤干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床， 2011， 10（4）：404-408.

[2] 崔久嵬， 牛超， 李薇， 等. CML來源的DC激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)自體CML細(xì)胞的殺傷作用. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志， 2011， 24（8）： 931-934.

[3] 熊彬， 金七妹， 宋飛雪.人GITRL和IL-21基因?qū)ML來源樹突狀細(xì)胞功能的影響.中國(guó)免疫學(xué)雜志， 2014， 17（9）：1189-1194.

[4] 饒燕飛， 鄒湉， 楊桂玲， 等.轉(zhuǎn)染慢性粒細(xì)胞白血病總RNA對(duì)樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗白血病作用的體外研究.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)， 2013， 12（6）：529-532.

[收稿日期：2016-05-13]