張利霞

(遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬(珠海)醫(yī)院感染科，廣東珠海 519100)

?

·論著·

恩替卡韋對乙型肝炎患者干擾素誘導(dǎo)單核因子作用*

張利霞

(遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬(珠海)醫(yī)院感染科，廣東珠海 519100)

目的探討恩替卡韋抗病毒治療過程中不同時期慢性乙型肝炎(HBV)患者外周血中干擾素誘導(dǎo)單核因子(Mig)的水平變化。方法40例應(yīng)用恩替卡韋治療的慢性乙型肝炎患者，采用ELISA 法定量檢測治療前后的血清Mig水平，并同時檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、HBV DNA水平。結(jié)果使用恩替卡韋抗病毒治療后，血清Mig及HBsAg、HBeAg、HBV DNA明顯下降，且治療后24周比治療后12周下降明顯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論恩替卡韋能下調(diào)Mig，降低血清HBsAg、HBeAg、HBV DNA 水平，有利于控制疾病進(jìn)展。

慢性乙型肝炎；干擾素誘導(dǎo)單核因子；恩替卡韋

乙型肝炎病毒(HBV)感染是嚴(yán)重危害人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題，每年約100萬人病死于與HBV感染相關(guān)的疾病[1-3]。既往研究表明細(xì)胞免疫異?？赡苁荋BV發(fā)病的重要原因[4]。雖然慢性病毒性肝炎的致病機制還未完全清楚，但已明確證實免疫病理損傷起重要作用，其中趨化因子的作用也日益受到重視?，F(xiàn)監(jiān)測服用恩替卡韋治療慢性乙型肝炎患者不同時期外周血中干擾素誘導(dǎo)單核因子(Mig)水平，探討Mig在肝臟免疫損傷中的重要作用，并通過恩替卡韋治療前后Mig水平的動態(tài)變化，了解抗病毒藥物對患者免疫狀態(tài)的影響，為臨床治療方案的選擇、評價療效和判斷預(yù)后提供新的思路，報道如下。

1　資料與方法

1．1一般資料該科2014年1月至2015年12月收治的慢性乙型肝炎患者40例，男33例，女7例，年齡20～50歲，平均年齡(30．5±2．5)歲。均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，納入標(biāo)準(zhǔn)：血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性(+)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)陽性(+)、抗-e抗原(抗-HBe)陽性(+)、HBV DNA(+)，HBV DNA≥1．0×105copy/mL)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)升高，且下限高于正常值2倍，病程均超過6個月。排除其他病毒感染和引起肝功能損害的原因。3個月內(nèi)未曾用過抗病毒和免疫抑制劑治療。

1．2方法(1)所有患者自愿接受恩替卡韋抗病毒治療，并簽署知情同意書?；颊咴谝话惚８?、降酶、退黃治療基礎(chǔ)上給予恩替卡韋(博路定)0.5 mg，口服1次/日，觀察24周。(2)分別于用藥前、用藥12、24周晨起空腹采集外周靜脈血3管，每管5 mL，分離血清置-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫謩e用于Mig、HBsAg、HBeAg水平及HBV DNA載量檢測。(3)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測Mig，試劑采用上海江萊生物科技有限公司提供的Mig試劑盒，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。使用免疫熒光定量，應(yīng)用該院檢驗科提供的羅氏E-170及配套試劑檢測HBsAg和HBeAg水平，運用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，采用該院檢驗科提供的伯樂PCR分析儀及配套試劑進(jìn)行HBV DNA載量檢測。

2　結(jié)　　果

2.1患者治療前后各指標(biāo)檢測結(jié)果比較40例患者治療12、24周后血清Mig與HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平明顯下降，與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。治療24周與治療12周比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。見表1。

2.2采用Spearman相關(guān)性分析不同時期Mig與HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平變化的相關(guān)性顯示，患者治療前Mig水平與HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.462,P<0.05)，治療12、24周Mig水平與HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平呈正相關(guān)(r=0.153,P<0.05)。

表1　　患者治療前后各指標(biāo)檢測結(jié)果比較±s)

注：與治療前比較，△P<0.05; 與治療12周比較，*P<0.05。

3　討　　論

HBV感染引起肝臟炎性中T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫參與其發(fā)生發(fā)展，而淋巴細(xì)胞遷移至肝細(xì)胞的過程受多種因子的影響，其中發(fā)現(xiàn)趨化因子與淋巴細(xì)胞受體的相互結(jié)合是重要因素之一。趨化因子是一類能使細(xì)胞發(fā)生趨化作用的細(xì)胞因子總稱，在對外界抗原刺激產(chǎn)生免疫應(yīng)答過程中可吸引活化的T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等，通過 G蛋白偶聯(lián)受體途徑進(jìn)入炎性損傷區(qū)域并發(fā)揮作用[5]。干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)和Mig是國內(nèi)外新發(fā)現(xiàn)的CXC類的趨化因子,主要是由干擾素等誘導(dǎo)產(chǎn)生[6]。研究表明在慢性HBV感染應(yīng)答中，CXC趨化因子IP-10和Mig的高表達(dá)可強烈吸引T細(xì)胞至肝臟，一方面協(xié)助機體清除感染肝細(xì)胞，另一方面通過分泌損害肝臟炎性遞質(zhì)導(dǎo)致肝病進(jìn)展[7]。Kakimi等[8]利用HBV轉(zhuǎn)基因鼠模型，被動轉(zhuǎn)導(dǎo)對HBV特異的CTL，發(fā)現(xiàn)肝臟中IP-10和Mig迅速增高，如果阻斷這些趨化因子就會減少宿主源性單核細(xì)胞在肝臟的浸潤，從而降低肝組織損傷的嚴(yán)重性。有證據(jù)表明肝炎病毒感染可誘導(dǎo)感染肝細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)趨化因子IP-10，表達(dá)CXCR3的T細(xì)胞可受IP-10的吸引，遷移至感染的組織，導(dǎo)致大量肝細(xì)胞損傷[9-10]。由于炎性部位肝細(xì)胞大量壞死，損傷可能進(jìn)一步導(dǎo)致被動脫落進(jìn)入血液循環(huán)的IP-10明顯增加，而血清IP-10水平與肝臟炎性損害程度有關(guān)，也就是說肝臟炎性損害程度越重，血清IP-10水平越高。臨床上對IP-10的研究報道甚多，而對Mig的研究相對較少。本研究通過對40例運用恩替卡韋抗病毒治療的患者不同時期Mig表達(dá)水平進(jìn)行分析比較，證實治療后Mig水平均低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

目前慢性乙型肝炎的治療以抗病毒抑制病毒復(fù)制為主，無法徹底清除乙型肝炎病毒，而抗病毒治療最理想的目標(biāo)是能夠達(dá)到HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，其次是達(dá)到HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換和維持低水平的病毒載量。國內(nèi)外研究表明血清HBsAg與HBeAg、HBV DNA載量之間有一定相關(guān)性，監(jiān)測血清HBsAg水平能夠較準(zhǔn)確地反映HBV DNA在體內(nèi)的復(fù)制情況[11]。有學(xué)者研究表明，HBsAg和HBV DNA水平之間有良好的相關(guān)性，定量檢測血清HBsAg可反映宿主體內(nèi)HBV DNA水平，對評價抗病毒治療的療效和判斷預(yù)后具有重要意義[12]。目前恩替卡韋(博路定)是臨床常用的環(huán)戊基鳥嘌呤核苷類抗病毒藥物，其三膦酸鹽與HBV多聚酶的天然底物dGTP競爭，可抑制HBV復(fù)制過程中的DNA多聚酶啟動、反轉(zhuǎn)錄及HBV DNA正鏈合成過程，阻斷病毒復(fù)制[13]。本研究結(jié)果表明，患者治療12、24周后HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平均低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療24周HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平均低于治療12周，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示恩替卡韋能有效降低乙型肝炎病毒載量，但慢性乙型肝炎不僅是病毒性疾病，也是免疫性疾病，目標(biāo)是通過抗病毒治療實現(xiàn)持久免疫控制，恩替卡韋是否具有免疫調(diào)控作用尚不清楚，有待進(jìn)一步研究證實。

綜上所述，趨化因子Mig參與了慢性乙型肝炎的炎性反應(yīng)，同時也發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。Mig可作為療效監(jiān)測指標(biāo)之一，且與HBsAg、HBeAg、HBV DNA有密切聯(lián)系。應(yīng)用恩替卡韋抗病毒治療的過程中檢測外周血趨化因子 Mig水平變化，有助于觀察機體的免疫狀態(tài)，為臨床合理用藥提供依據(jù)，同時對Mig機制的深入研究，將有利于進(jìn)一步了解慢性乙型肝炎患者炎性發(fā)生、發(fā)展的機制。

[1]Lai CL,Ratziu V,Yuen MF,et al.Viral hepatitis B[J].Lancet,2003,362:2089-2094.

[2]Tan C,Xuan B,Hong J,et al.RNA interference against hepatitis B virus with endoribonuclease-prepared siRNA despite of the target sequence wariations[J].Virus Res,2007,126:172-178.

[3]Snyder LL,Esser JM,Pachuk CJ,et al.Vector design for liver-specific expression of multiple interfering RNAs that target hepatitis B virus transcripts[J].Antiviral Res,2008,80:36-44.

[4]羅亞文,林世德,羅軍敏,等.重型乙型肝炎患者血清干擾素誘導(dǎo)蛋白-10、干擾素的檢測及臨床意義[J].中華傳染病雜志,2008,26(4):244-247.

[5]Wang J,Zhao JH,Wang PP,et al.Expression of CXC chemokine IP-10 in patients with chronic hepatitis B[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2008,7(1):45-50.

[6]Liu MT,Chen BP,Oertel P,et al.The T cell chemoattrant IFN-inducible protein 10 is essential in host defense against viral-induced neurologic disease[J].J Immunol,2000,165:2327-2330.[7]趙金紅,錢麗麗.趨化因子及其受體在肝臟疾病中的作用[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2006,27(4):42.

[8]Kakimi K,Lane TE,Wieland S,et al.Blocking chemokine responsive to gamma-2/interferon IFN-gamma inducible protein and monokine induced by IFN-gamma activity in vivo reduces the pathogenetic but not the antiviral potential of hepatitis B virus-specific cytotoxic T lymphocytes[J].J Exp Med,2001,194(12)：1755.

[9]Vadan R,Gheorghe L,Becheanu G,et al.Predictive factors for the severity of liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C and moderate alcohol consumption[J].Rom J Gastroenterol,2003,12(3):183-187.

[10]Boisvert JJ,Sarobe P,Boya PH,et al.A recombinant adenovirus encoding hepatitis C virus core and E1 proteins protects mice against cytokine-induced liver damage[J].Hepatology,2003,37(2):461-470.

[11]江宇泳,李紅梅,王融冰.慢性乙型肝炎病毒感染與T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J].中國醫(yī)刊,2008,43(3):204.

[12]盧峰,廖雪雁,石爽,等.乙型肝炎病毒表面抗原定量檢測的臨床意義[J].肝臟,2009,14(2):65.

[13]Inada M,Yokosuka O.Current antiviral therapies for chronic hepatitis B[J].Hepatol Res,2008,38(6):535-542.

The function of entecavir to Mig in patients with chronic hepatitis*

ZHANGLixia

(DepartmentofHospitalInfection,theFifthAffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege,Zhuhai,Guangdong519100,China)

ObjectiveTo investigate the function of entecavir to γ-interferon induced monokine(Mig) for chronic hepatitis B patients.MethodsThe 40 cases of chronic hepatitis B patients were treated with entecavir tablet.The Mig level were detected by ELISA in 40 patients in the time before and after treatment of 12 weeks and 24 weeks;HBsAg,HBeAg level were analyzed by using electrochemiluminescence and HBV-DNA was tested by using real-time quantitative PCR(FQ-PCR).ResultsMig and HBsAg,HBeAg,HBV DNA levels were significantly lower than before treatment in the 40 patients(P<0.05).Compared with those in the time of 12 weeks after treatment,those indexes after treatment 24 weeks were significantly decreased(P<0.05).ConclusionEntecavir treatment can reduce the level of Mig,HBsAg and HBeAg,HBV DNA,and help to control disease progression in chronic hepatitis B.

chronic hepatitis B;γ-interferon induced monokine;entecavir

廣東省珠海市衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)學(xué)科研課題(2014087)。

張利霞，女，主治醫(yī)師，主要從事臨床病毒性肝炎的診治研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.001

A

1673-4130(2016)19-2661-03

2016-04-20

2016-06-15)