朱江 李穎毅 張輝

【摘要】目的：探討局部亞低溫聯(lián)合糖皮質(zhì)激素對(duì)急性睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后睪丸抗氧化能力與精子活力的影響。方法：選擇2010年1月至2015年3月我院收治的的急性睪丸扭轉(zhuǎn)者80例，按照隨機(jī)數(shù)字法分為兩組，各40例，對(duì)照組在患者入院后開始口服醋酸地塞米松片，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合使用局部亞低溫處理，比較兩組預(yù)后SOD、MDA及總抗氧化能力、干預(yù)前后兩組NO含量及NOS活性，并統(tǒng)計(jì)兩組干預(yù)后精液常規(guī)及精子DNA碎片（DFI）指數(shù)。結(jié)果：干預(yù)后，觀察組SOD顯著高于對(duì)照組（P<0.05），而MDA則顯著低于對(duì)照組（P<0.05），總抗氧化能力以顯著高于對(duì)照組（P<0.05），干預(yù)后觀察組NO含量及NOS活性顯著低于干預(yù)前及干預(yù)后對(duì)照組（P<0.05），干預(yù)后觀察組精液中精子密度、精子活動(dòng)率及精子活力均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且精子DNA碎片顯著少于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論：對(duì)于急性睪丸扭轉(zhuǎn)者實(shí)施局部亞低溫聯(lián)合糖皮質(zhì)激素處理，能顯著提高睪丸抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等缺血缺氧再灌注損傷，減少精子破壞，提高精子活力。

【關(guān)鍵詞】局部亞低溫；糖皮質(zhì)激素；復(fù)位急性睪丸扭轉(zhuǎn)；抗氧化能力；精子活力

Effect of local mild hypothermia joint sugar temperament hormone on the testicular antioxidant capacity and sperm motility after reset of acute testicular torsionZHU Jiang， LI Yingyi， ZHANG Hui. Department of Urology， Baoji Peoples Hospital， Baoji 721000， Shaanxi， China

【Abstract】Objectives： To investigate the effect of local mild hypothermia joint sugar temperament hormone on the testicular antioxidant capacity and sperm motility after reset of acute testicular torsion. Methods： 80 patients with acute testicular torsion from January 2010 to March 2015 in our hospital were selected and randomized into two groups， each of 40 cases. The control group orally took dexamethasone acetate tablets， and the observation group received local mild hypothermia on its basis. The SOD， MDA and total antioxidant capacity， NO content and NOS activity before and after the intervention were compared to summarize the semen and sperm DNA fragmentation （DFI） index. Results： After the intervention， SOD in the observation group was significantly higher than control group （P<0.05）； MDA was significantly lower than control group （P<0.05）； total antioxidant capacity was significantly higher control group （P<0.05）. After intervention， the NO content and NOS activity was significantly lower than pre-intervention in observation group and otherwise in control group （P<0.05）. After intervention， the semen sperm concentration， sperm motility and sperm motility in observation group was significantly higher than control group （P<0.05）， while sperm DNA fragmentation was significantly less than control group （P<0.05）. Conclusions： Local mild hypothermia joint sugar temperament hormone can significantly improve the testicular antioxidant capacity and reduce the lipid peroxidation and other hypoxia-ischemia-reperfusion injury， thusly reducing sperm damage and improving sperm motility.

【Key words】Local mild hypothermia； Sugar temperament hormone； Reset acute testicular torsion； Antioxidant capacity； Sperm motility

【中圖分類號(hào)】R697+.22【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

睪丸扭轉(zhuǎn)主要是因?yàn)榫靼l(fā)生扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致，其可發(fā)生于任何年齡階段，其中急診科收治的超過(guò)25%陰囊方面急診為睪丸扭轉(zhuǎn)，如未能得到及時(shí)救治，需要切除睪丸的比例甚至超過(guò)50%[1]。其好發(fā)于新生兒期及青春期者，占青春期睪丸急診的50%以上比例，本病早期極易誤診，已經(jīng)成為中青年尤其是青春期男性失去睪丸的最主要原因，進(jìn)而導(dǎo)致男性不育癥的發(fā)生。臨床經(jīng)驗(yàn)證實(shí)[2]，對(duì)于懷疑睪丸扭轉(zhuǎn)者甚至對(duì)于不能排除診斷者，應(yīng)及時(shí)手術(shù)治療，以最大限度減少睪丸缺血缺氧時(shí)間，提高患者預(yù)后。盡管對(duì)于擬者已經(jīng)明確盡快實(shí)施手術(shù)治療的價(jià)值，但部分患者入院后因主觀猶豫等，未能及時(shí)簽署手術(shù)和麻醉同意書，以及重要的術(shù)前檢查，如超聲、凝血常規(guī)、心電圖等亦需要一定時(shí)間，為更好的挽救患者病變睪丸，提高治療效果，臨床急需一種在本階段內(nèi)更好的減少睪丸缺血缺氧的方法[3]。

地塞米松是一種長(zhǎng)效類糖皮質(zhì)激素，具有抑制炎癥反應(yīng)、降低毛細(xì)血管通透性、抑制免疫反應(yīng)及減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等作用。以往將其用于急性睪丸扭轉(zhuǎn)患者圍術(shù)期，具有一定保護(hù)作用[4]。但畢竟其為全身用藥，無(wú)法有效透過(guò)血睪屏障。本研究聯(lián)合局部低溫處理，以往研究已經(jīng)證實(shí)，低溫能有效降低基礎(chǔ)代謝率，減輕機(jī)體缺血缺氧再灌注損傷，將其應(yīng)用于睪丸扭轉(zhuǎn)大鼠，可有效保護(hù)睪丸組織，減少生精小管上皮細(xì)胞損傷。本院近年對(duì)于急性睪丸扭轉(zhuǎn)者實(shí)施局部亞低溫聯(lián)合糖氣質(zhì)激素處理，并分析復(fù)位后對(duì)睪丸抗氧化能力與精子活力的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2010年1月至2015年3月我院收治的的急性睪丸扭轉(zhuǎn)者80例，所有患者均經(jīng)術(shù)前臨床癥狀，影像學(xué)檢查擬診，并經(jīng)術(shù)中所見確診，納入標(biāo)準(zhǔn)為年齡18～40歲中青年患者，既往體檢無(wú)特殊遺傳病史、無(wú)精神病史，排除合并嚴(yán)重凝血功能障礙，合并嚴(yán)重心、肺、肝、腎功能障礙，合并免疫系統(tǒng)疾病，合并全身結(jié)核感染，合并惡性腫瘤及近3個(gè)月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素者。按照隨機(jī)數(shù)字法分為兩組，各40例，其中觀察組：年齡18～40歲，平均（26.5±1.4）歲，發(fā)病至手術(shù)時(shí)間1～12h，平均（4.1±1.3）h，發(fā)病部位：左側(cè)者16例，右側(cè)者21例，雙側(cè)者3例；對(duì)照組：年齡18～40歲，平均（25.9±1.3）歲，發(fā)病至手術(shù)時(shí)間1～12h，平均（4.0±1.3）h，發(fā)病部位：左側(cè)者15例，右側(cè)者21例，雙側(cè)者4例，兩組年齡、發(fā)病至手術(shù)時(shí)間及發(fā)病部位等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

對(duì)于確診或高度疑診者，均盡早在腰硬聯(lián)合麻醉下實(shí)施手術(shù)治療，其中對(duì)照組在患者入院后開始口服醋酸地塞米松片（國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H41020096），每次4mg，早晚各1次，連續(xù)服用至術(shù)后7d。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合使用局部亞低溫處理，將局部穩(wěn)定控制為30～32℃，實(shí)施局部亞低溫的時(shí)間為患者入院后行術(shù)前準(zhǔn)備過(guò)程及術(shù)后1d內(nèi)，整個(gè)過(guò)程中避免使用麻醉后鎮(zhèn)痛泵，并密切觀察患出局部變化情況，了解患處溫度、感覺、活動(dòng)情況及血運(yùn)情況等變化。

1.3觀察指標(biāo)

所有患者入組前均簽署知情同意書，并申報(bào)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，比較兩組預(yù)后SOD、MDA及總抗氧化能力，干預(yù)前后兩組NO含量及NOS活性，并統(tǒng)計(jì)兩組干預(yù)后精液常規(guī)及精子DNA碎片（DFI）指數(shù)。

1.4測(cè)定方法

抽取患處股靜脈血，通過(guò)WST法測(cè)定血SOD活性，通過(guò)TBA法測(cè)定血MDA含量，采用FRAP法測(cè)定機(jī)體股靜脈血總抗氧化能力，NO檢測(cè)使用Griess法，NOS活性測(cè)定采用終點(diǎn)比色法進(jìn)行，以上所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書由具有5年以上工作經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室技師進(jìn)行，精液常規(guī)測(cè)定標(biāo)本留取為患者出院時(shí)，通過(guò)手淫的方法進(jìn)行收集，其中DFI使用精子DNA碎片檢測(cè)試劑盒（三明市和眾生物技術(shù)有限公司 YZB/閩明0030-2013），通過(guò)SCD法嚴(yán)格在40倍光鏡下進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)判斷大暈環(huán)、中暈環(huán)及小暈環(huán)與無(wú)暈環(huán)比例判度精子損傷程度，計(jì)算精子DNA碎片。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間均數(shù)的比較使用t檢驗(yàn)，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組干預(yù)后SOD、MDA及總抗氧化能力比較

干預(yù)后，觀察組SOD顯著高于對(duì)照組（P<0.05），而MDA則顯著低于對(duì)照組（P<0.05），總抗氧化能力以顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。見表1。

2.2干預(yù)前后兩組NO含量及NOS活性比較

干預(yù)前兩組NO含量及NOS活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），干預(yù)后觀察組NO含量及NOS活性顯著低于干預(yù)前及干預(yù)后對(duì)照組（P<0.05）。見表2。

2.3兩組干預(yù)后精液常規(guī)及精子DNA碎片（DFI）指數(shù)比較

干預(yù)后觀察組精液中精子密度、精子活動(dòng)率及精子活力均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且精子DNA碎片顯著少于對(duì)照組（P<0.05）。見表3。

3討論

睪丸扭轉(zhuǎn)作為泌尿外科陰囊最常見的急癥，其發(fā)生扭轉(zhuǎn)后的睪丸將出現(xiàn)嚴(yán)重的缺血缺氧反應(yīng)，及時(shí)對(duì)扭轉(zhuǎn)精索進(jìn)行復(fù)位并盡量減少睪丸缺氧性損傷是提高患者預(yù)后，減少睪丸切除率及術(shù)后繼發(fā)不育率的關(guān)鍵手段[5]。近年研究已經(jīng)證實(shí)手術(shù)睪丸生精功能的損傷與患病時(shí)睪丸缺血缺氧時(shí)間有關(guān)，主要是因長(zhǎng)時(shí)間的缺血缺氧手術(shù)復(fù)位后再灌注導(dǎo)致睪丸內(nèi)活性氧自由基產(chǎn)生過(guò)多所致[6]。其中術(shù)后睪酮的分泌、睪丸的血液灌注以及精子的成熟均與氧自由基超載有關(guān)[7]。

睪丸扭轉(zhuǎn)即使復(fù)位，因機(jī)體發(fā)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)以及缺血再灌注損傷等均可引起睪丸抗氧化能力的降低和生精功能的損傷。超氧化物歧化酶（SOD）是目前研究最多的一種體內(nèi)超氧陰離子清除劑，其能迅速有效的清除體內(nèi)過(guò)氧離子及羥基等自由基，對(duì)于睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后因缺血再灌注損傷，導(dǎo)致組織內(nèi)出現(xiàn)大量的氧或羥自由基，引起SOD的顯著下降[8]。丙二醛（MDA）是一種較為常見的組織、細(xì)胞受到氧或羥自由基攻擊后產(chǎn)物，對(duì)于缺血再灌注損傷中，其能間接反映組織損傷程度[9]。針對(duì)大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)模型的研究證實(shí)[10]，低溫對(duì)于睪丸扭轉(zhuǎn)后的精原細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用，其認(rèn)為如果睪丸扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致缺血時(shí)間超過(guò)0.5h，通過(guò)亞低溫處理4h，能保留超過(guò)90%曲細(xì)精管內(nèi)的生精上皮進(jìn)而促使精原細(xì)胞成活，如果缺血缺氧時(shí)間超過(guò)6h，使用低溫處理仍能保留約80%的生精上皮，尤其是睪丸內(nèi)生殖細(xì)胞，通過(guò)低溫處理后顯著提高了其對(duì)缺血缺氧的耐受力，減少生殖細(xì)胞的凋亡。本組發(fā)現(xiàn)干預(yù)后，觀察組SOD顯著高于對(duì)照組，而MDA則顯著低于對(duì)照組，同時(shí)整體總抗氧化能力顯著高于對(duì)照組。究其原因可能與低溫減少組織、細(xì)胞的新陳代謝，提高了對(duì)缺血缺氧的耐受性，減少了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)對(duì)組織細(xì)胞的損傷有關(guān)。

一氧化氮（NO）在組織缺血再灌注損傷中的作用是雙重的，一氧化氮合酶則是成和NO所必須的催化劑，兩者水平之間具有正相關(guān)性。低濃度的NO具有血管張力調(diào)節(jié)作用，可顯著舒張血管，增加局部血流量，當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)則有明顯的細(xì)胞毒性作用[11]。對(duì)于缺血再灌注損傷中，局部過(guò)高的NO水平將大量與活性氧O2-相結(jié)合，產(chǎn)生ONOO-，后者則是對(duì)睪丸的生精功能有明顯的破壞作用，其不但會(huì)降低精子活力，而且還會(huì)攻擊生精上皮細(xì)胞DNA，導(dǎo)致生精上皮細(xì)胞細(xì)胞核的降解而發(fā)生凋亡，影響術(shù)后生育功能[12]。本組發(fā)現(xiàn)干預(yù)后觀察組NO含量及NOS活性顯著低于干預(yù)前及干預(yù)后對(duì)照組，考慮觀察組通過(guò)低溫處理，在低溫環(huán)境下，睪丸細(xì)胞的新陳代謝顯著減慢，氧耗量減少[13]，同時(shí)ATP能量消耗亦減少，進(jìn)而氧、羥自由基產(chǎn)生減少，進(jìn)而減少了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)導(dǎo)致的機(jī)體損傷[14]。精子密度與精子活動(dòng)率為評(píng)價(jià)男性生育能力的最重要因素[15]，本研究發(fā)現(xiàn)，干預(yù)后觀察組精液中精子密度、精子活動(dòng)率及精子活力均顯著高于對(duì)照組，同時(shí)精子DNA碎片顯著少于對(duì)照組。提示聯(lián)合低溫治療后，能更好的保護(hù)生精管上皮細(xì)胞免受脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，不至于明顯影響精子數(shù)量及其活動(dòng)率。

綜上所述，對(duì)于急性睪丸扭轉(zhuǎn)者實(shí)施局部亞低溫聯(lián)合糖皮質(zhì)激素處理，能顯著提高睪丸抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等缺血缺氧再灌注損傷，減少精子破壞，提高精子活力。

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