潘偉 汪海霞 劉霞

【摘要】目的：探討轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β3與纖維連接蛋白（FN）在絕經(jīng)或未絕經(jīng)婦女子宮肌瘤及子宮肌層中表達(dá)的水平變化及其意義。方法：采用免疫組化法（SP）檢測40例絕經(jīng)后子宮肌瘤婦女（絕經(jīng)組）、40例未絕經(jīng)子宮肌瘤婦女（未絕經(jīng)組）肌瘤組織及肌壁組織中的TGF-β3、FN的表達(dá)差異，同時將絕經(jīng)組婦女根據(jù)肌瘤是否發(fā)生萎縮分為萎縮組（17例）、未萎縮組（23例）并進(jìn)行上述指標(biāo)的比較。結(jié)果：絕經(jīng)組的肌瘤組織、肌壁組織中的TGF-β3表達(dá)評分分別為（3.11±0.78）分、（1.85±0.69）分均顯著的低于未絕經(jīng)婦女的（3.98±0.67）分、（2.31±0.82）分（P<0.05）；兩組婦女肌瘤組織和肌壁組織中的FN表達(dá)評分差異不顯著（P>0.05）。子宮肌瘤萎縮和未萎縮患者的子宮肌瘤組織、肌壁組織中TGF-β3、FN表達(dá)在兩組間差異均不顯著（P>0.05），萎縮組和未萎縮組的肌瘤組織TGF-β3表達(dá)分別為（2.90±0.65）分、（3.32±0.74）分均顯著的高于本組肌壁組織中的（1.85±0.67）分、（2.25±0.61）分（P<0.05）；兩組肌瘤和肌壁組織中的FN表達(dá)差異不顯著（P>0.05）。結(jié)論：TGF-β3表達(dá)可能與患者絕經(jīng)前后的激素水平改變有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化生長因子-β3；纖維連接蛋白；絕經(jīng)；子宮肌瘤；子宮肌層

Expression and biological significance oftransforming growth factor-β3 and fibronectin in uterine myoma and uterine muscle layerPAN Wei1， WANG Haixia2， LIU Xia2. 1. Department of Gynecology， Huangshi Central Hospital， Huangshi 435000， Hubei， China； 2. Department of Obstetrics， Huangshi AiKang Hospital， Huangshi 435000， Hubei， China

【Abstract】Objectives： To discuss the expression and biological significance of transforming growth factor-β3 and fibronectin in uterine myoma and uterine muscle layer. Methods： Using immunohistochemical method （SP）， 40 cases of postmenopausal uterine leiomyoma （postmenopausal group） and 40 cases of premenopausal uterine leiomyoma （premenopausal group） were selected. Different expression of TGF- beta-3 and NF on leiomyoma tissue and muscle tissues were detected. At the same time， postmenopausal group was divided into atrophy group （17 cases） and non-atrophy group （23 cases）. The above indexes of the two groups were compared. Results： The TGF- beta-3 expression scores of premenopausal group in muscle tissue and leiomyoma wall were （3.11±0.78） and （1.85± 0.69） points， which were significantly lower than these of premenopausal group （3.98 ± 0.67， 2.31 ± 0.82） （P<0.05）； FN expression score of two groups in leiomyoma tissue and muscle tissues had no significant difference （P>0.05）. TGF- beta-3 and FN expression of atrophy group and non-atrophy group in uterine fibroids and uterine tissues had no significant difference （P>0.05）. TGF- beta-3 expression of atrophy group and non-atrophy group in uterine fibroids were （2.90±0.65） and （3.32±0.74）， which were both significantly higher than these in uterine tissues of （1.85± 0.67） and （2.25± 0.61） （P<0.05）； FN expression of the two group in fibroids and muscle tissues did not show significant difference （P>0.05）. Conclusion： TGF- beta-3 expression of premenopausal patients is significantly higher than that of postmenopausal patients； TGF- beta-3 expression of atrophic group and non-atrophy patients in leiomyoma is higher than that in muscle wall tissue， without significant difference. TGF- beta-3 expression may be associated with hormone level changes in postmenopausal patients.

【Key words】Transforming growth factor beta-3； Fibronectin； Menopause； Uterine myoma； Uterine muscular layer

【中圖分類號】R737.33【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

子宮肌瘤作為女性生殖系統(tǒng)常見的良性腫瘤，其發(fā)病率約占全部女性生殖系統(tǒng)疾病的25%～30%，是導(dǎo)致女性子宮全切的重要原因。其發(fā)病機(jī)制與卵巢分泌的雌、孕激素對局部生長因子的自分泌和旁分泌調(diào)節(jié)，從而影響肌瘤細(xì)胞的生長和分化有關(guān)[1]。轉(zhuǎn)化生長因子-β3（transforming growth factor-β3， TGF-β3）與纖維連接蛋白（fibronectin ，F(xiàn)N）等多種生產(chǎn)因子均會對子宮肌瘤的生長、發(fā)展產(chǎn)生重要作用，從而出現(xiàn)肌細(xì)胞異常增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)聚集等[2，3]。為此，本研究針對TGF-β3以及FN在絕經(jīng)或未絕經(jīng)婦女子宮肌瘤及子宮肌層中表達(dá)的水平變化及其意義進(jìn)行探討?，F(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)報道如下。

1材料與方法

1.1一般材料

隨機(jī)選取我院婦科2013年1月至2013年12月收治的經(jīng)病理檢查證實(shí)的80例子宮肌瘤患者作為研究對象，絕經(jīng)組40例，年齡46～78歲，平均年齡（58.4±5.9）歲，絕經(jīng)時間（4.4±2.5）年，肌瘤最大徑4～8cm，平均（5.2±1.2）cm；未絕經(jīng)組40例，年齡33～52歲，平均年齡（44.5±6.1）歲，肌瘤最大徑3～8cm，平均（5.3±1.1）cm。兩組患者年齡差異顯著（P<0.05），肌瘤平均最大徑大小差異不顯著。

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)B超、術(shù)后標(biāo)本活檢確診為子宮肌瘤患者；近3個月內(nèi)未服用激素類藥物；均獲得研究知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并子宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性婦科疾?。缓喜?yán)重內(nèi)分泌性疾??；未進(jìn)行病理組織學(xué)或活檢確診；病歷資料不完整。

1.2檢查方法

于患者入院后，取清晨空腹肘靜脈血5mL，注入到不抗凝試管凝固后，以3000r/min的速度離心15min，提取血清置于-70℃的冰箱中保存；采用免疫組化（SP）法對TGF-β3與FN含量進(jìn)行檢測，免疫組化試劑盒由上海前塵生物科技有限公司生產(chǎn)（貨號：PK-6100），檢測程序嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

將采集到的患者子宮肌瘤樣本制成臘塊并進(jìn)行連續(xù)切片，將2張厚約4μm的組織切片進(jìn)行染色后置于江蘇捷達(dá)科技有限公司生產(chǎn)的JD801計(jì)算機(jī)分析系統(tǒng)圖像分析儀中，對染色后的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞間質(zhì)的組織染色強(qiáng)度進(jìn)行觀察，以其中存在棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn)。每張切片隨機(jī)選取5個視野，并將每個視野的陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行記錄，計(jì)算其平均值。

1.3分組及讀片標(biāo)準(zhǔn)

將絕經(jīng)組婦女根據(jù)肌瘤是否發(fā)生萎縮分為萎縮組（17例）、未萎縮組（23例）；子宮肌瘤萎縮的判定標(biāo)準(zhǔn)：子宮肌瘤在絕經(jīng)前出現(xiàn)，絕經(jīng)后逐漸縮小，患者的臨床癥狀不明顯，常在體檢或其他檢查中發(fā)現(xiàn)。

采用已知的陽性切片作為對照（TGF-β3采用胎盤組織，F(xiàn)N采用腎組織），以PBC代替一抗作為陰性標(biāo)準(zhǔn)，陽性染色主要為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、間質(zhì)為棕褐色染色，TGF-β3主要表現(xiàn)與細(xì)胞質(zhì)，NF主要表達(dá)與細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)，根據(jù)作色強(qiáng)度和作色面積進(jìn)行綜合評分。無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別為0、1、2、3分；作色面積按照無著色、著色面積<25%、25%～50%、51%～75%、>75%分別記分為0、1、2、3、4分；兩項(xiàng)評分之積為最終評分，作為TGF-β3、NF的表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析在SPSS17.0中進(jìn)行。計(jì)量資料以（±s）表示，采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)、組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1絕經(jīng)和未絕經(jīng)婦女子宮肌瘤組織和肌壁組織中的TGF-β3、FN表達(dá)差異絕經(jīng)組的肌瘤組織、肌壁組織中的TGF-β3表達(dá)評分均顯著的低于未絕經(jīng)婦女（P<0.05）；兩組婦女肌瘤組織和肌壁組織中的FN表達(dá)評分差異不顯著（P>0.05）。見表1。

2.2子宮肌瘤萎縮與未萎縮組婦女的TGF-β3、FN表達(dá)差異

子宮肌瘤萎縮和未萎縮患者的子宮肌瘤組織、肌壁組織中TGF-β3、FN表達(dá)在兩組間差異均不顯著（P>0.05），萎縮組和未萎縮組的肌瘤組織中的TGF-β3表達(dá)均顯著的高于本組肌壁組織（P<0.05）；兩組肌瘤和肌壁組織中的FN表達(dá)差異不顯著（P>0.05）。見表2。

3討論

子宮肌瘤作為女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，臨床上多采用促性腺激素釋放激素進(jìn)行治療，大部分患者經(jīng)治療后或者絕經(jīng)后子宮肌瘤會發(fā)生相應(yīng)的萎縮，但少數(shù)患者的肌瘤會繼續(xù)生長，甚至引發(fā)臨床癥狀[4]。子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制與卵巢分泌的雌、孕激素對局部生長因子的自分泌和旁分泌調(diào)節(jié)有關(guān)，從而影響肌瘤細(xì)胞的生長和分化[5，6]。Kulshrestha等 [7]針對絕經(jīng)前子宮肌瘤的研究表明，TGF-β3與FN等多種生長因子會通過促進(jìn)子宮肌細(xì)胞的生長從而促進(jìn)肌細(xì)胞異常增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)聚集等，在宮肌瘤的生長、發(fā)展產(chǎn)生重要作用。

TGF-β3作為一種具有結(jié)構(gòu)相關(guān)性的多功能細(xì)胞因子，主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，且具有較好的生物學(xué)活性。TGF-β3能夠促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的形成，加快其血管化進(jìn)程，并促進(jìn)細(xì)胞的創(chuàng)傷修復(fù)過程，參與了多種腫瘤的發(fā)病[8，9]。本研究結(jié)果顯示，絕經(jīng)組的肌瘤組織、肌壁組織中的TGF-β3表達(dá)評分均顯著的低于未絕經(jīng)患者，表明絕經(jīng)前子宮肌瘤組織中的TGF-β3表達(dá)明顯高于正常肌壁組織，而且TGF-β3會以自分泌和旁分泌的方式抑制正常的子宮細(xì)胞增殖，增加細(xì)胞外基質(zhì)的成分膠原蛋白、纖維連接蛋白以及蛋白聚糖的表達(dá)，并且促進(jìn)子宮肌瘤細(xì)胞的增殖。另外，本研究中子宮肌瘤萎縮和未萎縮患者的子宮肌瘤組織、肌壁組織中TGF-β3表達(dá)在兩組間差異均不顯著，但萎縮組和未萎縮組患者肌瘤組織TGF-β3表達(dá)均顯著高于本組肌壁組織，顯示絕經(jīng)后的非萎縮性肌瘤中的TGF-β3含量雖然與絕經(jīng)后的萎縮性肌瘤以及肌壁組織含量相近。絕經(jīng)后的非萎縮性肌瘤中的TGF-β3含量卻明顯高于正常肌壁組織，絕經(jīng)后婦女的萎縮性肌瘤中的TGF-β3含量表達(dá)卻與肌壁間相似，表明TGF-β3是導(dǎo)致絕經(jīng)后子宮肌瘤繼續(xù)生長的重要因素之一。Plewka等[10]研究表明，促性腺激素釋放激素類似物治療后患者的子宮肌瘤在縮小的同時，TGF-β3含量并未較治療組有所降低，因此推測促性腺激素釋放激素類似物的治療可引起患者血清中雌激素以及孕激素的表達(dá)水平有關(guān)。

FN作為細(xì)胞外基質(zhì)的重要成分，是存在于以血漿為主的體液、多數(shù)基膜中的以及軟組織基質(zhì)的大分子非膠原蛋白，主要在細(xì)胞內(nèi)以及細(xì)胞外基質(zhì)中表達(dá)，并在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用[11-13]。FN與體內(nèi)的大分子相互作用，并參與細(xì)胞骨架的形成、細(xì)胞的遷移以及分化，并參與細(xì)胞的癌性轉(zhuǎn)化[14，15]。本研究結(jié)果顯示，兩組婦女肌瘤組織和肌壁組織中的FN表達(dá)評分差異不顯著。另外，子宮肌瘤萎縮和未萎縮患者的子宮肌瘤組織、肌壁組織中FN表達(dá)在兩組間差異均不顯著，且子宮肌瘤和肌壁組織中的FN表達(dá)差異不顯著?？赡芘c本研究例數(shù)較少有關(guān)，需加大樣本量進(jìn)行下一步的研究。

綜上所述，未絕經(jīng)的子宮肌瘤患者的TGF-β3表達(dá)顯著高于絕經(jīng)患者，萎縮組、未萎縮組患者的肌瘤組織TGF-β3表達(dá)高于肌壁組織，組間比較差異不顯著，TGF-β3表達(dá)可能與患者絕經(jīng)前后的激素水平改變有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]閆美紅.ALDH1在子宮肌瘤細(xì)胞中的表達(dá)及ATRA對COLCOLCOLⅠ和FN表達(dá)的影響.太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2011.

[2]Ekin Murat， Cengiz Huseyin， Cihan Emine， et al. Genitourinary symptoms and their effects on quality of life in women with uterine myomas. Int Urogynecol J，2014，25（6）：807-810.

[3]羅潔梅，徐碧紅，鄒玉森.米非司酮對子宮肌瘤患者血TGF-β1和性激素水平的影響.中國婦幼保健，2013，28（24）：4050-4052.

[4]許繼芹，劉曼華，劉宏斌，等.子宮腺肌病部位、TGF-β1與痛經(jīng)的相關(guān)性研究.中國婦幼保健，2014，29（3）：454-456.

[5]申彩云，吳蕾.TGF-β3、FN在絕經(jīng)后子宮肌瘤及肌壁組織中的表達(dá)及意義.中國老年學(xué)雜志，2014（9）：2433-2434.

[6]金秀滿.妊娠合并子宮肌瘤患者分娩期剖宮產(chǎn)治療效果對比觀察.中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理，2015（7）：92-94.

[7]Kulshrestha Vidushi， Kriplani Alka，Agarwal Nutan， et al. Low dose mifepristone in medical management of uterine leiomyoma - an experience from a tertiary care hospital from north India. Indian J Med Res，2013，137（6）：1154-1162.

[8]Ciavattini Andrea， Di Giuseppe Jacopo， Cecchi Stefano，et al. Gynecologic laparoscopy in patients aged 65 or more： feasibility and safety in the presence of increased comorbidity. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol， 2014（175）：49-53.

[9]陳紅菊.TGF-β3和MMP-11在大鼠模型子宮肌瘤中的表達(dá)及意義.武漢：武漢科技大學(xué)，2012.

[10]Plewka Andrzej， Madej Pawel， Plewka Danuta， et al. Immunohistochemical localization of selected pro-inflammatory factors in uterine myomas and myometrium in women of various ages. Folia Histochem Cytobio，2013，51（1）：73-83.

[11]羅燕艷，欒峰，羅小婉，等.血清HE4在子宮富于細(xì)胞型平滑肌瘤中的表達(dá).實(shí)用癌癥雜志，2014（4）：387-388.

[12]Trovik Jone， Salvesen Helga Birgitte， Cuppens Tine， et al. Growth differentiation factor-15 as biomarker in uterine sarcomas..International journal of gynecological cancer. Int J Gynecol Cancer，2014，24（2）：252-259.

[13]郝艷麗，張晶，韓治宇，等.子宮肌壁間肌瘤經(jīng)皮微波消融后中遠(yuǎn)期療效觀察.中華醫(yī)學(xué)雜志，2014，94（9）：664-666.

[14]SethShikha， Goel Neeru， Singh Ekta， et al. Effect of mifepristone （25 mg） in treatment of uterine myoma in perimenopausal woman. J Midlife Health，2013，4（1）：22-26.

[15]盧秀平.宮腔鏡與開腹手術(shù)治療黏膜下子宮肌瘤的效果比較.中國綜合臨床，2015（2）：180-182.