馬超鋒，孫何云，張　軼，饒　兵

（信陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽 464000）

河南信陽犬弓形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查

馬超鋒，孫何云，張軼，饒兵

（信陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽 464000）

弓形蟲?。═oxoplasmosis）又稱弓形體病、弓漿蟲病，是由龔地弓形蟲（Toxoplasma gondii）寄生于人和多種動(dòng)物的有核細(xì)胞內(nèi)引起的一種人獸共患原蟲?。?］，呈世界性分布，可以感染人和幾乎所有的恒溫脊椎動(dòng)物（超過30種鳥類和300種哺乳動(dòng)物）［2］。據(jù)WTO 2009年報(bào)道，全世界有超過三分之一人口感染弓形蟲病，2005年公布的全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查報(bào)告顯示，我國人弓形蟲病平均感染率為7.88%［3］。弓形蟲病對(duì)人畜的危害很大，孕婦感染弓形蟲后會(huì)導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形，是免疫功能低下患者（如AIDS病人等）的主要死亡原因。貓是弓形蟲的終末宿主，犬和其他動(dòng)物是中間宿主。犬貓作為重要的伴侶動(dòng)物，近年來，養(yǎng)殖數(shù)量急速增加，與人接觸密切，是人感染弓形蟲的主要傳播方式之一。為了解信陽市近年來犬弓形蟲病感染情況，筆者歷時(shí)近3年采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)我市寵物醫(yī)院接診的犬只進(jìn)行了調(diào)查，以對(duì)該病的防控提供參考。

1　材料與方法

1.1樣品收集時(shí)間2013年7月-2015年12月。

1.2樣品的收集地點(diǎn)及制備從信陽市和諧動(dòng)物醫(yī)院、信陽市畜牧局寵物門診、摯愛寵物等6家門診，分別從不同品種、年齡、性別和健康狀況的犬只采集血液樣品1 324份，3 000 r/min離心10 min，取上清液于1.5 mL滅菌離心管中，統(tǒng)一編號(hào)。處理好的血清均置-20℃冰箱保存，備用待檢。

1.3試劑犬弓形蟲間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

1.4主要試驗(yàn)器材Thermo FC酶標(biāo)儀，美國Thermo公司；TDZ5-WS臺(tái)式低速離心機(jī)，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；10～1 000 μL單道移液器及25～300 μL多道移液器，德國Eppendorf公司；303系列電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海樹立儀器儀表有限公司；恒溫振蕩器；超聲波清洗器；96孔聚苯乙烯反應(yīng)板。

1.5方法

1.5.1編號(hào)每次試驗(yàn)應(yīng)在包被板上設(shè)空白對(duì)照孔1孔，陰性對(duì)照孔2孔，陽性對(duì)照孔2孔，其余為待檢樣品孔。

1.5.2樣品1∶40稀釋將樣品稀釋液每孔195 μL加到血清稀釋板上，加5 μL待檢樣品，充分混勻。

1.5.3將板條固定于板架上，剩余的板條用不干膠密封并放入密封袋中保存。每孔加入稀釋后樣品100 μL/孔。陰、陽性對(duì)照加2孔，100 μL/孔。空白對(duì)照孔不加樣。置37℃反應(yīng)30 min。

1.5.4洗板（一）：洗板機(jī)洗或手洗，方法如下：

1.5.4.1手洗傾去內(nèi)容物，用洗液注滿反應(yīng)孔，靜置15 s～30 s后棄去，在毛巾或吸水紙上拍干。如此洗板重復(fù)5次。

1.5.4.2洗板機(jī)洗洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時(shí)間為15 s～30 s，洗液應(yīng)注滿反應(yīng)孔，確保每次吸凈無殘留，全部洗完后在毛巾或吸水紙上拍干。

1.5.5加酶標(biāo)結(jié)合物除空白對(duì)照孔以外，各孔中加入酶標(biāo)結(jié)合物100 μL。置37℃反應(yīng)30 min。

1.5.6洗板，同1.5.4。

1.5.7加顯色液每孔加入顯色液A液50 μL，全部加完后再在每孔中加入顯色液B液50 μL，混勻。37±2℃顯色10 min。

1.5.8終止顯色完畢后立即于每孔加50 μL終止液，混勻。

1.5.9測(cè)定終止后應(yīng)在10 min內(nèi)完成判讀。對(duì)空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測(cè)定吸光值?；蚴褂秒p波長測(cè)定吸光值，測(cè)定波長為450 nm，參考波長可選630 nm或655 nm。

1.5.10結(jié)果判定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長測(cè)定OD值。陰性對(duì)照值≤0.20，陽性對(duì)照值＞0.60，證明實(shí)驗(yàn)成立。按以下方法判斷：陽性，樣品OD值≥0.5；可疑0.3≤樣品OD值平均值＜0.5；陰性：樣品OD值＜0.3，對(duì)于可疑樣品應(yīng)進(jìn)行重測(cè)，如果重測(cè)仍為可疑，則判為陰性。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)結(jié)果采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，通過X2檢驗(yàn)分析差異顯著性，P＜0.05時(shí)差異顯著，P＜0.01差異極顯著。

2　檢測(cè)結(jié)果

2.1信陽地區(qū)犬弓形蟲病總體感染情況2013年7月-2015年12月，共在6家寵物診療機(jī)構(gòu)收集到血液樣品1 324份。采用ELISA方法檢測(cè)犬弓形蟲病抗體，總體陽性率為11.3%，2013年、2014年和2015年的抗體陽性率分別為10.1%、11.4%和12.1%，各個(gè)年份均有弓形蟲抗體陽性檢出，但差異不顯著（P=0.718＞0.05）（見表1）。

2.2不同季節(jié)犬弓形蟲病感染情況從表2可以看出，不同季節(jié)弓形蟲抗體陽性率有變化，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%，X2檢驗(yàn)分析，P=0.558＞0.05，即各個(gè)季節(jié)間犬弓形蟲病抗體陽性率差異不顯著。

表1　不同年份犬弓形蟲抗體檢測(cè)情況

表2　不同季節(jié)犬弓形蟲抗體檢測(cè)情況

2.3不同性別犬弓形蟲病感染情況檢測(cè)結(jié)果顯示（見表3），雌性弓形蟲抗體陽性率為11.7%，略高于雄性的11.0%，但差異不顯著（P＞0.05）。

表3　不同性別犬弓形蟲抗體檢測(cè)情況

2.4不同年齡段犬弓形蟲病感染情況從表4可見，隨年齡增長，弓形蟲抗體陽性率在升高，1歲以內(nèi)最低，為8.0%，3歲以上最高，達(dá)到16.8%，對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行X2檢驗(yàn)分析顯示，各個(gè)年齡段間抗體陽性率差異極顯著（P＜0.01）。

表4　不同年齡犬弓形蟲抗體檢測(cè)情況

3　討論

弓形蟲病是重要的人獸共患傳染病，在人群中感染較普遍，各種動(dòng)物、特別是與人密切接觸的犬貓?jiān)诠蜗x的傳播中起到很重要的作用，因此，摸清犬的弓形蟲病感染情況，對(duì)人類健康有重要意義。國內(nèi)外一直都有犬弓形蟲病感染情況的報(bào)道。本次調(diào)查犬血清樣品1 324份，抗體陽性率為11.3%；省內(nèi)調(diào)查情況，王海燕［4］于2012年調(diào)查鄭州市犬弓形蟲抗體陽性率為34.9%，遠(yuǎn)高于本次調(diào)查。國內(nèi)其他省份，黃利權(quán)等［5］2011年調(diào)查浙江地區(qū)犬弓形蟲病抗體陽性率36.72%、張煥容等［6］2012年調(diào)查成都陽性率32.0%、汪萍等［7］2014年發(fā)現(xiàn)烏魯木齊的陽性率為31.8%、崔麗麗等［8］2012年調(diào)查北京地區(qū)為24.9%、鄧國強(qiáng)等［9］2014年調(diào)查長沙地區(qū)為23.8%、陳代雄等［10］2005年調(diào)查廣州地區(qū)抗體陽性率為20.7%，均高于本次調(diào)查；于迪等［11］2014年調(diào)查遼西地區(qū)犬弓形蟲抗體陽性率為14.2%、翟佳等［12］2014年調(diào)查的武漢地區(qū)陽性率為13.4%、鄭紅星等［13］2010年調(diào)查的蘭州地區(qū)陽性率為13.2%、高雅等［14］2011年調(diào)查的呼和浩特地區(qū)為12.4%、龔國華等［15］2009年調(diào)查上海市的陽性率為11.67%、王大為等［16］2014年調(diào)查東北部分地區(qū)陽性率為10.1%，與本次調(diào)查相近；馬明筠等［17］2012年調(diào)查的宜昌市犬弓形蟲抗體陽性率為8.2%、郭冀寧等［18］2014年調(diào)查的銀川市陽性率為7.96%、沈克飛等［19］2011年調(diào)查重慶主城區(qū)陽性率為5.6%、鄭世英等［20］2015年調(diào)查的山東省部分地區(qū)陽性率為3.5%、張如英等［21］2014年調(diào)查的東莞市陽性率為2.91%、黃紹明等［22］2008年調(diào)查的?？诘貐^(qū)為2.6%、車小蛟等［23］2015年調(diào)查甘肅天水陽性率為1.98%，均低于本次調(diào)查。本次調(diào)查的犬只以寵物門診接診病犬為主，弓形蟲陽性率還是偏高的，采取的治療方案還要結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行，下一步我們還要擴(kuò)大調(diào)查范圍，獲得更準(zhǔn)確翔實(shí)的數(shù)據(jù)。

本次犬弓形蟲抗體調(diào)查結(jié)果顯示，不同季節(jié)陽性率有差異，但不顯著，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%，與崔麗麗等［8］2012年報(bào)道的結(jié)果相近；不同性別間弓形蟲抗體陽性率差異不顯著，雌性略高于雄性（11.7%＞11.0%），與崔麗麗［8］、于迪［11］和汪萍［7］報(bào)道一致，與鄧國強(qiáng)［9］報(bào)道相反；不同年齡犬只間弓形蟲抗體陽性率差異極顯著，且隨年齡增大，陽性率有增大的趨勢(shì)，這與鄧國強(qiáng)［9］和鄭紅星［13］報(bào)告一致，分析原因可能與生長周期長，較易接觸帶蟲犬和感染環(huán)境中處于感染階段的弓形蟲卵囊有關(guān)。

弓形蟲病是一種重要的人獸共患病，且人群感染率較高，對(duì)人體危害較大，犬作為中間宿主，在弓形蟲病的傳播中起到重要作用，建議采取措施控制犬弓形蟲病的發(fā)生和傳播：一是加強(qiáng)犬只的得管理，定期檢測(cè)，積極防治；二是加大對(duì)犬貓的人獸共患病特別是弓形蟲病的監(jiān)測(cè)力度，發(fā)現(xiàn)陽性病畜，立即淘汰；三是為提高公眾對(duì)弓形蟲病的危害認(rèn)知度，開展形式多樣的宣傳活動(dòng)；四是注意日常衛(wèi)生，犬只糞便立即清除，接觸犬排泄物后要認(rèn)真洗手；五是避免犬采食生肉和不熟的奶蛋制品，養(yǎng)成良好的生活習(xí)慣。

［1］汪明.獸醫(yī)寄生蟲學(xué)［M］.3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：72-74.

［2］Jaroslav Flegr，Joseph Prandota，Michaela Sovicková，et al.Toxoplasmosis-A Global Threat.Correlation of Latent Toxoplasmosis with Specific Disease Burden in a Set of 88 Countries［J］.PLoS One，2014，9（3）：e90203.

［3］許隆祺，陳穎丹，孫鳳華，等.全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查報(bào)告［J］.中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2005，S1：332-340.

［4］王海燕，裴淑麗，郝振芳，等.鄭州市寵物弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，11：153-154.

［5］黃利權(quán)，李慧，何士根，等.浙江地區(qū)犬貓豬弓形蟲病的流行病學(xué)調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)雜志，2011，47（6）：39-41.

［6］張煥容，程方明，楊發(fā)龍，等.成都市區(qū)犬貓狂犬病病毒和弓形蟲感染的調(diào)查［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（4）：129-131.

［7］汪萍，陸桂麗，范玉娟，等.烏魯木齊市犬弓形蟲血清流行病學(xué)調(diào)查與分析［J］.中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2014，05：404-405.

［8］崔麗麗，于詠蘭，劉帥，等.北京地區(qū)犬貓弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)雜志，2012，48（3）：7-10.

［9］鄧國強(qiáng)，歐僚原，唐小明，等.長沙城區(qū)犬貓弓形蟲病血清學(xué)檢測(cè)［J］.中國獸醫(yī)雜志，2014，50（2）：74-75.

［10］陳代雄，譚嘉慶，胡穎，等.廣州地區(qū)貓、犬弓形蟲感染的唾液流行病學(xué)調(diào)查［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2005，5（5）：639-641.

［11］于迪，屈惠瑩，于金玲，等.遼西地區(qū)寵物犬剛地弓形蟲血清學(xué)調(diào)查［J］.畜牧與獸醫(yī)，2014，46（4）：87-88.

［12］翟佳，高興，李坤，等.武漢地區(qū)家犬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2014，03：14-15.

［13］鄭紅星，葉得河，祁珊珊.蘭州地區(qū)寵物犬弓形蟲病血清學(xué)檢測(cè)分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2010，46（11）：172-174.

［14］高雅，盧愛桃，甄建國，等.呼和浩特地區(qū)犬弓形蟲病防治效果觀察［J］.畜牧與飼料科學(xué)，2010，05：184-185.

［15］龔國華，周錦萍，孫泉云，等.上海市寵物門診犬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2009，17（4）：64-67.

［16］王大為，韓小虎，慕名揚(yáng)，等.中國東北地區(qū)部分動(dòng)物弓形蟲病的流行病學(xué)調(diào)查［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014，23：129-131.

［17］馬明筠，譚革，姜洶.宜昌市寵物犬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2012，05：47.

［18］郭冀寧.銀川市犬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2014，11：28-29.

［19］沈克飛，游斌杰，李成洪，等.重慶主城區(qū)寵物犬弓形蟲感染的血清學(xué)調(diào)查［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2011，02：47-48.

［20］鄭世英，鄭芳，李士平，等.山東省部分地區(qū)犬貓弓形蟲病流行情況調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)雜志，2015，51（3）：74-75.

［21］張如英，董瑜，梁國華，等.東莞市犬弓形蟲抗體血清學(xué)調(diào)查［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2014，08：33-34.

［22］黃紹明，周秋平，崔克，等.?？诘貐^(qū)寵物犬貓弓形蟲的感染情況分析［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2008，7（8）：1462-1392.

［23］車小蛟，郭慧琳，孟林明，等.甘肅天水犬布魯菌病等3種人畜共患病血清學(xué)調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)雜志，2015，51（1）：81.

S852.72+2

B

0529-6005（2016）09-0080-03

2016-01-18

2014年信陽市科技攻關(guān)項(xiàng)目（140054）

馬超鋒（1981-），男，高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防治，E-mail：machaofeng5@163.com