徐　偉，陳亞妮，何珊珊，關(guān)　然，蘇小艷，胡松華

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310058）

奶牛急性大腸桿菌性乳房炎病例

徐偉，陳亞妮，何珊珊，關(guān)然，蘇小艷，胡松華

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310058）

奶牛發(fā)生臨床型乳房炎時(shí)通?？梢娙榉烤植考t、腫、熱、痛，奶產(chǎn)量下降，但鮮見病牛死亡。筆者遇到卻因大腸桿菌性乳房炎導(dǎo)致奶牛死亡的病例，報(bào)告如下。

1　發(fā)病及診療經(jīng)過

浙江某郊區(qū)奶牛場有荷斯坦泌乳奶牛1 300余頭。2016年2月15日，該場105牛舍109 097號(hào)奶牛突然發(fā)病，臨床癥狀表現(xiàn)為乳房紅腫、堅(jiān)硬，乳汁稀薄，初期呈清水樣，后期變?yōu)檠獦?，日產(chǎn)奶量由發(fā)病前的40公斤迅速下降，同時(shí)伴有呼吸和心率加快，眼角膜充血，眼圈下凹，體溫升高至41.5℃，精神委靡，食欲廢絕，急劇消瘦。該牛于2009年9月17日出生，發(fā)病時(shí)已生產(chǎn)5胎，最近一次產(chǎn)犢時(shí)間為2015年11月2日。病牛先后用以下方法治療：（1）青霉素1 600萬IU，鏈霉素1 000萬μg，靜脈注射，1日兩次；青霉素320萬IU，鏈霉素200萬μg，乳房灌注，1日兩次。該方法連續(xù)治療3 d后未見好轉(zhuǎn)；（2）四環(huán)素6 g，靜脈注射，1日兩次；鹽酸林可霉素20 mL（1.2 g），氨芐西林鈉2 g，乳房灌注，1日兩次。連續(xù)治療3 d后病牛體溫開始下降，但其他癥狀未見好轉(zhuǎn)；（3）紅霉素3 g，靜脈注射，1日兩次；鹽酸林可霉素20 mL（1.2 g），氨芐西林鈉2 g，乳房灌注，1日兩次。病牛連續(xù)治療3 d未見好轉(zhuǎn)，反而出現(xiàn)起臥困難，呻吟，乳房皮膚顏色變深等癥狀。2016年2月24日上午，病牛因醫(yī)治無效而死亡。尸體剖檢發(fā)現(xiàn)乳房有大量血水和化膿病灶。無菌采集乳房組織病料和病奶進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。

2　細(xì)菌的分離鑒定

按照下列方法進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查：（1）將病奶或乳腺組織病料接種于血瓊脂，置37℃溫箱培養(yǎng)24～48 h；（2）觀察菌落形態(tài)特征，挑取典型單個(gè)菌落接種于普通肉湯進(jìn)行增菌培養(yǎng)，37℃振蕩培養(yǎng)24 h，革蘭染色、鏡檢，判定細(xì)菌為革蘭陽性或革蘭陰性，球菌或桿菌；（3）將肉湯培養(yǎng)物劃線接種于營養(yǎng)瓊脂，37℃培養(yǎng)過夜，進(jìn)行生化鑒定。首先對(duì)革蘭陽性球菌進(jìn)行觸酶試驗(yàn)確定該菌為葡萄球菌或鏈球菌。結(jié)合鏡檢結(jié)果且觸酶陽性的判定為葡萄球菌，觸酶陰性的判定為鏈球菌。利用血漿凝固酶試驗(yàn)將葡萄球菌進(jìn)一步鑒定區(qū)分為金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）。利用CAMP、七葉苷水解、馬尿酸鈉水解、美藍(lán)牛乳還原等試驗(yàn)將鏈球菌進(jìn)一步鑒定區(qū)分為無乳鏈球菌、停乳鏈球菌或乳房鏈球菌。對(duì)革蘭陰性桿菌，接種于營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂及伊紅美藍(lán)瓊脂，37℃培養(yǎng)過夜，觀察細(xì)菌生長狀態(tài)，并按常規(guī)方法進(jìn)行相關(guān)生化鑒定。

3　細(xì)菌藥敏試驗(yàn)

用Kirby-Bauer瓊脂擴(kuò)散法對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，包括以下15種藥物：氨芐西林、丁胺卡那霉素、林可霉素、多西環(huán)素、阿莫西林、恩諾沙星、氟苯尼考、慶大霉素、妥布霉素、頭孢曲松、阿奇霉素、青霉素、四環(huán)素、紅霉素、多黏菌素B。37℃培養(yǎng)24 h后用游標(biāo)卡尺測量瓊脂表面抑菌圈直徑，并根據(jù)不同抗菌藥物藥敏紙片的判定標(biāo)準(zhǔn)判定為高敏、中敏或耐藥。

4　結(jié)果與分析

細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果表明，血瓊脂上呈圓形菌落、光滑、濕潤、無明顯溶血；革蘭測陰性桿菌；麥康凱瓊脂上菌落呈粉紅色；伊紅美藍(lán)瓊脂上菌落呈黑色、有金屬光澤。生化鑒定結(jié)果如表1。因此，判定為大腸桿菌（E.coli），病奶和組織病料中均檢出同樣細(xì)菌。

表1　生化試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表2。本研究分離菌對(duì)氨芐西林、林可霉素、多西環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考、青霉素、四環(huán)素、紅霉素等表現(xiàn)為不敏感；對(duì)丁胺卡那霉素、恩諾沙星、慶大霉素、妥布霉素、頭孢曲松、阿奇霉素等表現(xiàn)為敏感。

表2　藥敏試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)發(fā)病奶牛的臨床癥狀以及細(xì)菌學(xué)分離鑒定結(jié)果，該病例診斷為大腸桿菌引起的急性乳房炎。大腸桿菌是一種環(huán)境性致病菌，該病原侵入乳腺后可在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖，釋放出內(nèi)毒素（endotoxin），進(jìn)入血液引起毒血癥（toxemia）。由于毒素作用，病牛在臨床上出現(xiàn)體溫升高，食欲不振，呼吸和心率加快等全身癥狀。該病多發(fā)于產(chǎn)后高產(chǎn)奶牛，病情嚴(yán)重可導(dǎo)致病牛死亡。奶牛發(fā)病后，使用了青霉素、四環(huán)素、林可霉素、氨芐西林鈉和紅霉素等藥物治療。從表2可知，病牛分離菌對(duì)這些藥物均不敏感。由于治療無效，奶牛發(fā)病后第9天死亡。根據(jù)大腸桿菌性乳房炎的發(fā)病機(jī)理，在治療上除了使用敏感抗菌藥物消滅病原外，還應(yīng)針對(duì)內(nèi)毒素產(chǎn)生的毒血癥盡早進(jìn)行大劑量靜脈輸液，必要時(shí)使用皮質(zhì)激素和抗前列腺素藥物緩解全身癥狀。

胡松華，E-mail：songhua@zju.edu.cn