李怡霖　倪　兵　高　艷　張　銀

661099　云南省 紅河州第三人民醫(yī)院 腫瘤分子與細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心

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非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變126例分析及評(píng)價(jià)

李怡霖倪兵高艷張銀

661099云南省 紅河州第三人民醫(yī)院 腫瘤分子與細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心

目的設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析及評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的發(fā)生率及基因突變類(lèi)型。方法以我院2013年3月至2015年8月接受治療的126例確診非小細(xì)胞肺癌患者為研究對(duì)象，根據(jù)PCR擴(kuò)增及基因測(cè)序原理分析及評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的發(fā)生率及基因突變類(lèi)型。結(jié)果：42例(33.33%)肺癌患者EGFR基因發(fā)生突變，其中26例(64.90%)患者外顯子19發(fā)生突變，13例(30.95%)患者外顯子21發(fā)生突變，僅3例(7.14%)患者外顯子20發(fā)生突變，其中外顯子19均為堿基缺失型突變，外顯子20及21均為堿基替換型突變。結(jié)論EGFR基因在非小細(xì)胞肺癌的預(yù)防、診斷、治療過(guò)程中具有十分重要的臨床價(jià)值。

非小細(xì)胞肺癌；EGFR基因；基因突變

云南省個(gè)舊市地區(qū)是全國(guó)重要的錫礦基地，其肺癌的發(fā)生率在全球處于較高水平。臨床數(shù)據(jù)表明，非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率占肺癌總數(shù)的80%以上，且晚期非小細(xì)胞肺癌目前臨床治療效率并不顯著，患者5年死亡率高達(dá)80%以上[1]。隨著醫(yī)療水平的逐步提高，靶向藥物、特異性藥物成為新藥研發(fā)領(lǐng)域的熱門(mén)藥物，臨床數(shù)據(jù)表明，針對(duì)EGFR的靶向藥物在治療非小細(xì)胞肺癌方面具有較好的臨床治療效率[2]。根據(jù)這一結(jié)果相關(guān)學(xué)者認(rèn)為EGFR基因與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展具有十分重要的關(guān)系，通過(guò)分析及評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因與正常人EGFR基因發(fā)生突變的差異可以為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)防、診斷、治療等提供重要的臨床依據(jù)，以下是本次研究的全部?jī)?nèi)容。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院2015年10月至2016年10月接受治療的126例確診(診斷標(biāo)準(zhǔn)：WHO肺癌分類(lèi)及診斷標(biāo)準(zhǔn)[3])非小細(xì)胞肺癌患者為研究對(duì)象。126例受試患者年齡介于27～76歲，平均年齡為58歲，年齡≥60歲患者66例，60歲以下患者60例；男性患者85例，女性患者41例；病理分期結(jié)果表明I期、II期、III期、IV期非小細(xì)胞肺癌患者分別為16例、25例、66例、19例，其中67例患者發(fā)生淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，應(yīng)用10%福爾馬林固定手術(shù)過(guò)程中患者癌癥組織，或分離晚期患者血漿。

1.2 方法

1.2.1 基因提取 將10%福爾馬林固定的肺癌組織切片離心管內(nèi)加入適量二甲苯進(jìn)行脫蠟處理，用乙醇將脫脂后的標(biāo)本清洗干凈后晾干。將晾干的標(biāo)本置于干凈離心管內(nèi)加入適量配制號(hào)的解離液及200 L磷酸鹽緩沖液和無(wú)水乙醇，震蕩后離心。將離心管內(nèi)離心后吸附DNA轉(zhuǎn)移到干凈離心管，加入30～100 LBuffer DTE，靜置5min后8000r/min速度離心1min，將提取DNA保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 基因檢測(cè) 應(yīng)用EGFR基因突變29種檢測(cè)試劑盒對(duì)上述提取的DNA進(jìn)行基因檢測(cè)，以上述提取的DNA作為模板，以PCR擴(kuò)增儀對(duì)EGFR基因19～21外顯子進(jìn)行基因擴(kuò)增，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)指標(biāo) 分別以年齡、性別作為分組因素，統(tǒng)計(jì)性別、年齡與非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變及突變基因類(lèi)型的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0對(duì)受試者EGFR基因突變概率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以外顯子19～21號(hào)基因作為統(tǒng)計(jì)依據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比(%)的形式表示，以t檢驗(yàn)或檢驗(yàn)表示組間差異，以P<0.05記為統(tǒng)計(jì)結(jié)果具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 年齡、性別因素與非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變的關(guān)系：統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，126例非小細(xì)胞肺癌患者共計(jì)42例發(fā)生EGFR基因突變，其中60歲以上患者31例，女性患者39例，即非小細(xì)胞肺癌與EGFR基因突變概率相關(guān)性顯著，其中年齡、性別因素是影響EGFR基因突變的主要因素，年齡的增大會(huì)增加非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變概率，女性患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，該統(tǒng)計(jì)結(jié)果具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1

表1 年齡、性別因素與非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變相關(guān)性(n/%)

2.2 EGFR基因突變類(lèi)型與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)性分析：實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明外顯子19～21號(hào)基因突變與非小細(xì)胞肺癌的診斷、治療具有顯著臨床相關(guān)性，其中19、21號(hào)外顯子突變類(lèi)型相關(guān)性更加顯著，即外顯子19、21與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)性十分顯著，在非小細(xì)胞肺癌預(yù)防、診斷、治療中具有顯著臨床價(jià)值。見(jiàn)表2

表2 EGFR基因突變類(lèi)型與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)性(n/%)

3 結(jié)論

EGFR基因是一種細(xì)胞膜表面的糖蛋白受體，與細(xì)胞表皮生長(zhǎng)顯著相關(guān)，該基因具有酪氨酸激酶活性，主要以信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的形式進(jìn)入細(xì)胞核，影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生命過(guò)程，因此該基因與非小細(xì)胞肺癌患者原癌基因的激活具有密切相關(guān)性[4]。隨著環(huán)境的惡化，生活壓力的增大，肺癌的發(fā)病率初步提高，非小細(xì)胞肺癌發(fā)病率占全部肺癌發(fā)病率總數(shù)的80%以上，且該疾病死亡率極高，5年內(nèi)存活率不足15%。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，探討EGFR基因與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性有助于非小細(xì)胞肺癌的預(yù)防、診斷、治療[5]。本文以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，應(yīng)用PCR擴(kuò)增儀及EGFR基因突變29種檢測(cè)試劑盒對(duì)EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)探討。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EGFR基因突變概率占非小細(xì)胞肺癌發(fā)病總概率的1/3，其中年齡、性別因素與EGFR基因突變概率密切相關(guān)，年齡60歲以上非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著增大，女性非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，且外顯子19和21是EGFR基因主要突變部位。綜上所述，EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌具有顯著相關(guān)性，通過(guò)檢測(cè)外顯子19、21可以達(dá)到對(duì)非小細(xì)胞肺癌高效的預(yù)防、診斷，并顯著提高非小細(xì)胞肺癌治療效率，為該病臨床治療提高監(jiān)控依據(jù)，具有很好的臨床價(jià)值。

[1] 林小梅,莫娟梅,鄒敏,等.EGFR突變的非小細(xì)胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的檢測(cè)及其臨床特征分析[J].中國(guó)病理生理雜志,2012,28(6):1135-1139.

[2]陳順平,蘇海燕,吳文喬,等.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變與擴(kuò)增及蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2015,31(6):657-665.

[3]趙瑾,田俏梅,黃玉梅,等.湖南地區(qū)238例非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變狀態(tài)分析[J].腫瘤藥學(xué),2014,4(3):187-192.

[4]周曉秋,王東關(guān),孫希印,等.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因和蛋白檢測(cè)的比較分析[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2012,28(10):1124-1126.

[5]羅煒,王慧.非小細(xì)胞肺癌患者外周血EGFR基因突變檢測(cè)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,41(20):3751-3755.

10.3969/j.issn.2095-9559.2016.06.023

2095—9559(2016)06—2631—02

2016-02-29