趙曉群

(海南省藥品檢驗(yàn)所，海南 ?？?570216)

?

HPLC法測定雷貝拉唑鈉腸溶片有關(guān)物質(zhì)

趙曉群

(海南省藥品檢驗(yàn)所，海南 ?？?570216)

該研究用反相高效液相色譜法測定了雷貝拉唑鈉腸溶片的有關(guān)物質(zhì)。方法采用的色譜柱為ODS-3 5 μm 4.6 mm×150 mm(島津)；以乙腈-甲醇-水-三乙胺(300:100:600:5，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0)為流動(dòng)相；流速為1.0 mL/min；檢測波長為215 nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣量10 μL。雷貝拉唑主峰與各已知雜質(zhì)峰分離度良好。本方法能有效地控制雷貝拉唑鈉腸溶片的有關(guān)物質(zhì)。

雷貝拉唑鈉腸溶片；有關(guān)物質(zhì)；HPLC

雷貝拉唑鈉腸溶片(Rabeprazole Sodium Enteric-coated Tablets)在臨床上主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合口潰瘍、反流性食管炎、卓-艾(Zollinger-Ellison)綜合征(胃泌素瘤)。雷貝拉唑鈉(Rabeprazole Sodium)收載于新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)73冊[1]，采用HPLC測定有關(guān)物質(zhì)，未對單個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行控制。國內(nèi)其他已公開相關(guān)文獻(xiàn)也未對單雜進(jìn)行研究控制[2-4]。日本藥典[5]收載了該品種，有關(guān)物質(zhì)采用等度洗脫法，也未進(jìn)行單個(gè)雜質(zhì)控制。為此，通過上述的色譜條件，進(jìn)行摸索研究及優(yōu)化，確定本品的色譜條件，本實(shí)驗(yàn)建立了采用加校正因子的主成分自身對照法進(jìn)行測定，更準(zhǔn)確的測定雷貝拉唑鈉腸溶片中各雜質(zhì)的含量。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試藥

SPD-M20A、 LC-20AT，島津公司；CBM-20Alite，SCL類型；LC-solution色譜工作站； AB135-S型電子天平。

雷貝拉唑鈉腸溶片，海南中化聯(lián)合制藥工業(yè)股份有限公司(規(guī)格：20 mg，批號(hào)：20120401、20120402、20120403)；雷貝拉唑鈉對照品(純度93.1%)，中國食品藥品檢定研究院(批號(hào)：100658-201102)。

雜質(zhì)A、B、C、D、E、F對照品(均為LGC對照品)：

雜質(zhì)A批號(hào)618.02.07.02(雷貝拉唑硫化物，化學(xué)名：2-{[4-(3-Methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio}-1H-benzimidazole；含量：96.5%)；

雜質(zhì)B批號(hào)618.03.07.01(雷貝拉唑砜，化學(xué)名：2-[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-methyl-pyridin-2-yl]methylsulfonyl]benzoimidazole；含量：99.6%)；

雜質(zhì)C批號(hào)618.04.07.01(雷貝拉唑N-氧化物，化學(xué)名：Rabeprazole N-Oxide；含量：97.1%)；

雜質(zhì)D批號(hào)618.05.07.01(雷貝拉唑砜N-氧化物，化學(xué)名：2-[[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-methyl-1-oxido-2-pyridinyl]methyl]sulfonyl]-1H-benzimidazole；含量：99.5%)；

雜質(zhì)E批號(hào)7982(雷貝拉唑巰代雜質(zhì)，化學(xué)名：2-Mercaptobenzimidazole；含量：99.8%)；

雜質(zhì)F批號(hào)618.07.09.02(雷貝拉唑氯代雜質(zhì)，化學(xué)名：2-Chloromethyl-3-methyl-4-(3-methoxypropoxy)pyridine hydrochloride；含量：99.5%)。

乙腈、甲醇為色譜純，三乙胺、磷酸、氫氧化鈉均為分析純，水為純化水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：ODS-3 5 μm 4.6×150 mm (島津)，流動(dòng)相為乙腈-甲醇-水-三乙胺(300:100:600:5)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0)；檢測波長為215 nm；進(jìn)樣量10 μL，柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min。

1.2.2 溶液的配制

(1)供試品溶液 取本品5片，置200 mL量瓶中，加0.1 mol/L 的氫氧化鈉溶液40mL，超聲溶解，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液作為供試品溶液。

(2)對照溶液 精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加混合溶劑[0.1 mol/L氫氧化鈉:甲醇(4:1)]稀釋至刻度，作為對照溶液。

(3)對照品溶液 ①雷貝拉唑?qū)φ掌啡芤海壕芊Q取對照品適量，加混合溶劑[0.1 mol/L氫氧化鈉:甲醇(4:1)]溶解并稀釋成約含100 μg/mL的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用混合溶劑[0.1 mol/L氫氧化鈉:甲醇(4:1)]稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。②雜質(zhì)A溶液：精密稱取雜質(zhì)A適量，加乙腈溶解并稀釋成約含100 μg/mL 的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。③雜質(zhì)B溶液：精密稱取雜質(zhì)B適量，加乙腈溶解并稀釋成約含100 μg/mL 的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。④雜質(zhì)C溶液：精密稱取雜質(zhì)C適量，加乙腈溶解并稀釋成約含100 μg/mL的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。⑤雜質(zhì)D溶液：精密稱取雜質(zhì)D適量，加乙腈溶解并稀釋成約含100 μg/mL的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。⑥雜質(zhì)E溶液：精密稱取雜質(zhì)E適量，加乙腈溶解并稀釋成約含100 μg/mL的溶液(母液)；精密量取母液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。⑦雜質(zhì)F溶液：精密稱取雜質(zhì)F適量，加甲醇溶解并稀釋成約含100 μg/mL的溶液(母液)；精密量取母液 1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋成約10 μg/mL的溶液(定位液)。⑧混合溶液：精密量取上述①至⑦的母液各1 mL，同置于20 mL量瓶中，加混合溶劑[0.1 mol/L氫氧化鈉:甲醇(4:1)]稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3 方法學(xué)驗(yàn)證

1.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述“1.2.2”項(xiàng)下(3)對照品溶液中的溶液，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果見圖1及表1。

圖1 系統(tǒng)適用性結(jié)果

名稱保留時(shí)間比值雷貝拉唑鈉1.0雜質(zhì)A3.2雜質(zhì)B1.2雜質(zhì)C0.4雜質(zhì)D0.5雜質(zhì)E0.3雜質(zhì)F1.9

1.3.2 專屬性試驗(yàn)

(1)未破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉10 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

(2)強(qiáng)堿破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉10 mL，放置1 h，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

(3)強(qiáng)酸破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸10 mL，放置1 min，加0.1 mol/L氫氧化鈉20 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

(4)強(qiáng)光破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL(無色)量瓶中，置紫外燈下照射2 h，加0.1 mol/L氫氧化鈉10 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

(5)高溫破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉10 mL，在水浴加熱1 h，放涼至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

(6)強(qiáng)氧化破壞試驗(yàn) 取本品細(xì)粉約300 mg，置50 mL量瓶中，加0.01 mol/L高錳酸鉀溶液5 mL，放置5 min，加0.1 mol/L氫氧化鈉10 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在3000 rpm下離心10 min，取上清液。

分別精密量取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。

結(jié)果表明，本品在上述條件下均有不同程度的破壞，在強(qiáng)酸及高溫破壞條件下破壞較明顯；破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與雷貝拉唑鈉峰達(dá)到基線分離，雷貝拉唑鈉主峰與各已知雜質(zhì)峰均未檢出不純物，各峰的峰純度均良好；在各個(gè)波長點(diǎn)進(jìn)行雜質(zhì)峰比較，最終選擇215 nm的波長能夠檢出最多雜質(zhì)，本品專屬性較好。因此，采用上述色譜條件可滿足本品中的有關(guān)物質(zhì)測定的要求。

1.3.3 檢測限試驗(yàn)

分別精密量取“1.2.2”項(xiàng)下(3)對照品溶液中的雷貝拉唑鈉對照品定位溶液及各雜質(zhì)對照品溶液適量，加混合溶劑[0.1 mol/L氫氧化鈉:甲醇(4:1)]溶解并稀釋制成定位溶液，再逐級(jí)等比稀釋定位溶液，并精密量取上述溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

結(jié)果表明：雷貝拉唑鈉檢測限為15.01 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)A檢測限為15.02 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)B檢測限為4.41 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)C的檢測限為7.73 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)D的檢測限為16.04 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)E的檢測限為2.02 ng(S/N≈3)；雜質(zhì)F的檢測限為7.94 ng(S/N≈3)。

1.3.4 校正因子的測定

精密量取“1.2.2”項(xiàng)下(3)對照品溶液中的雷貝拉唑鈉對照品定位溶液及各雜質(zhì)對照品溶液適量，按上述測定方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

表2 校正因子計(jì)算結(jié)果

1.3.5 自身對照進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取“1.2.2”項(xiàng)下(3)對照品溶液中的混合溶液，精密量取10 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果見表3。

表3 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，上述對照品及雜質(zhì)溶液的進(jìn)樣精密度RSD(%)小于2.0%，能滿足本品的有關(guān)物質(zhì)測定的要求。

1.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按“1.2.2”項(xiàng)溶液的制備方法，平行制備6份供試品溶液，按上述的測定方法測定，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，本品有關(guān)物質(zhì)測定6份重復(fù)性較好，該色譜條件可滿足有關(guān)物質(zhì)測定的要求。

1.3.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述同一份供試品溶液，按上述的測定方法測定，每2 h測定1次，連續(xù)測定5次，試驗(yàn)結(jié)果表明，本品溶液在8 h內(nèi)不穩(wěn)定，部分雜質(zhì)隨時(shí)間的延長而增大，因此，本品有關(guān)物質(zhì)測定需臨用新制。

1.3.8 耐用性試驗(yàn)

分別采用不同的色譜條件，照“1.2.1”項(xiàng)下方法測定各雜質(zhì)的相對保留時(shí)間，結(jié)果表明，不同色譜柱進(jìn)行測定時(shí)，各雜質(zhì)的相對保留時(shí)間均符合規(guī)定。不同色譜柱進(jìn)行測定時(shí)不影響本品的有關(guān)物質(zhì)的檢測。結(jié)果見表4。

表4 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2 結(jié)果與討論

取三批供試品分別按上述方法要求測定，結(jié)果見表5。

表5 有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

由表5結(jié)果可知：

(1)雷貝拉唑鈉腸溶片國家藥品標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)中有關(guān)物質(zhì)測定方法，未對已知雜質(zhì)進(jìn)行研究控制[1-5]。本文通過色譜條件的摸索研究及方法的優(yōu)化，證明采用等度衡流洗脫法，可以滿足各個(gè)雜質(zhì)的分離及控制。

(2)參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)雷貝拉唑鈉腸溶片{WS1-(X-117)-2006Z}[1]、JP(16)標(biāo)準(zhǔn)[5]，測定波長均為290 nm，通過專屬性試驗(yàn)，分別在不同的測定波長下比較檢出雜質(zhì)峰的個(gè)數(shù)，證明本品在215 nm波長處能夠檢出最多雜質(zhì)峰，且檢出量也是最大，最終選擇215 nm作為本品的測定波長。

(3) 檢查有關(guān)物質(zhì)最常用的方法是不加校正因子的主成分自身對照法，但當(dāng)雜質(zhì)的校正因子超出0.9～1.1范圍時(shí)，測定結(jié)果已不能真實(shí)反映樣品質(zhì)量，不宜采用此法[6]。經(jīng)分析測定，雷貝拉唑鈉已知雜質(zhì)A～F中，只有雜質(zhì)B及雜質(zhì)C，校正因子在0.9～1.1的范圍，不需校正，其他的均超出了0.9～1.1的范圍，應(yīng)對結(jié)果加以校正，才能真實(shí)反映樣品質(zhì)量。

3 結(jié) 論

本方法采用的高效液相色譜法作為測定方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，雷貝拉唑鈉及各已知雜質(zhì)均達(dá)到良好分離，不干擾檢測，靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性較好。

[1] 國家藥品新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第73冊雷貝拉唑鈉腸溶片{WS1-(X-117)-2006Z} [S].2010:149-150.

[2] 肖揚(yáng)帆, 張娜, 陳延祥,等. HPLC法測定雷貝拉唑鈉腸溶片的含量和有關(guān)物質(zhì)[J]. 藥學(xué)研究, 2010, 29(8):472-474.

[3] 馬延, 王媛, 暢瑞苗,等. HPLC法測定雷貝拉唑鈉腸溶微丸的有關(guān)物質(zhì)[J]. 中國生化藥物雜志, 2015, 35(4):165-168.

[4] 裴曉麗, 劉明月, 張小山,等. HPLC測定雷貝拉唑鈉原料的含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2004, 40(8):631-631.

[5] JP XVI，2011:1332-1333；

[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(四部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

HPLC Determination of Related Substances in Rabeprazole Sodium Enteric-coated Tablets

ZHAOXiao-qun

(Hainan Province Institute of Drug Control, Hainan Haikou 570216, China)

An RP-HPLC method for the determination of related substances in Rabeprazole Sodium Enteric-coated Tablets was established. The chromatographic analysis was performed on C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)column. Acetonitrile-mehanol-water-triethylamine (300：100：600：5) mixtures (adjusted with phosphoric acid to pH 7.0) was applied as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 215 nm. The column temperature was room temperature,with 10 μL injection volume. Rabeprazole sodium and its specified related substances could be well separated. This method can be applied to control the related substances of Rabeprazole Sodium Enteric-coated Tablets.

Rabeprazole Sodium Enteric-coated Tablets; relative substances; HPLC

趙曉群(1979-)，女，碩士，主管藥師，研究方向：藥物檢驗(yàn)和藥品研發(fā)。

R927.2

A

1001-9677(2016)020-0096-04