王文惠　楊衛(wèi)華　張冬英

[摘 要] 目的：分析系統(tǒng)性硬皮?。⊿ystemic sclerosis，SSc）患者輔助型T細(xì)胞17（T-helper 17，Th17）水平與疾病活動(dòng)相關(guān)性，探討Th17在SSc發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：選取我院2012年2月—2016年2月收治的107例SSc患者，按照其Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分，將>3分患者納入活動(dòng)組，將≤3分患者納入非活動(dòng)組，并選取同期50名健康體檢者，納入對(duì)照組。檢測(cè)各組受試者Th17、Treg細(xì)胞、IL-17水平，計(jì)算上述指標(biāo)與患者疾病活動(dòng)的相關(guān)性。結(jié)果：活動(dòng)組Th17水平高于非活動(dòng)組，其Treg細(xì)胞水平低于后者；非活動(dòng)組Th17水平高于對(duì)照組，其Treg細(xì)胞水平低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；顒?dòng)組血清IL-17水平高于非活動(dòng)組、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Pearson相關(guān)性分析示，外周血Th17、血清IL-17水平與Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分呈正相關(guān)，外周血Treg細(xì)胞水平與Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：Th17與SSc患者疾病活動(dòng)度呈正相關(guān)，其可能通過(guò)加重免疫損傷誘發(fā)疾病活動(dòng)。

[關(guān)鍵詞] 系統(tǒng)性硬皮病；輔助型T細(xì)胞17；疾病活動(dòng)度；細(xì)胞因子

中圖分類號(hào)：R593 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2095-5200（2016）05-087-03

DOI：10.11876/mimt201605032

系統(tǒng)性硬皮?。⊿ystemic sclerosis，SSc）是以皮膚硬化、內(nèi)臟器官纖維化為主要特征的系統(tǒng)性自身免疫性結(jié)締組織疾病，致殘率、致死率均較高[1]。目前醫(yī)學(xué)界對(duì)SSc的發(fā)病機(jī)制尚不明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，免疫異常、炎癥反應(yīng)、血管病及膠原合成異常均在 SSc發(fā)生發(fā)展中均發(fā)揮了重要作用[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)，輔助型T細(xì)胞17（T-helper 17，Th17）可分泌大量白細(xì)胞介素-17（IL-17），在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、參與自身免疫性疾病發(fā)病過(guò)程中扮演重要角色[3]。本研究分析SSc患者Th17水平與疾病活動(dòng)相關(guān)性，觀察Th17對(duì)SSc發(fā)展的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2012年2月—2016年2月收治的107例SSc患者，按照其Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分，將>3分患者納入活動(dòng)組（n=32），將≤3分患者納入非活動(dòng)組（n=75），并選取同期50名健康體檢者，納入對(duì)照組。活動(dòng)組男11例，女21例，年齡21～56歲，平均年齡（40.71±4.53）歲；非活動(dòng)組男29例，女46例，年齡20～58歲，平均年齡（39.84±4.33）歲；對(duì)照組男16名，女34名，年齡23～55歲，平均年齡（41.32±4.27）歲。三組受試者性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本臨床研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

SSc患者選取標(biāo)準(zhǔn)：1）參照美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的SSc分類標(biāo)準(zhǔn)確診[4]；2）入組前3個(gè)月內(nèi)無(wú)糖皮質(zhì)激素、抗類風(fēng)濕類藥物使用史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：1）合并接觸性皮炎、銀屑病等其他皮膚疾病；2）合并可能對(duì)Th17、IL-17造成影響的其他自身免疫性疾病或心血管系統(tǒng)疾病。

1.3 檢測(cè)方法

抽取各組受試者入組次日空腹肘靜脈血5mL，置入肝素抗凝管內(nèi)，以PBS等比稀釋后，將細(xì)胞懸液加入淋巴細(xì)胞分離液內(nèi)，室溫，2000 r/min離心20 min，將血漿層、淋巴細(xì)胞分離液交界面單個(gè)核細(xì)胞吸出，PBS洗滌2次。使用BD FACSCalibur 流式細(xì)胞儀（BD Bioscience公司），對(duì)外周血Th17、Treg細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，其水平均以占外周血CD4+T細(xì)胞百分比表示；使用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，對(duì)血清IL-17進(jìn)行檢測(cè)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進(jìn)行分析，性別以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，年齡、Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分等計(jì)量資料以（x±s）表示，滿足方差齊性則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，若方差不齊，則采用校正t檢驗(yàn)，Pearson法分析Th17、Treg細(xì)胞及IL-17與SSc患者Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 各組受試者外周血Th17、Treg細(xì)胞水平

活動(dòng)組Th17水平高于非活動(dòng)組，其Treg細(xì)胞水平低于后者；非活動(dòng)組Th17水平高于對(duì)照組，其Treg細(xì)胞水平低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 各組受試者血清IL-17水平

活動(dòng)組、非活動(dòng)組、對(duì)照組血清IL-17水平分別為（57.26±4.95）pg/mL、（15.53±2.13）pg/mL、（15.24± 1.99）pg/mL，活動(dòng)組血清IL-17水平高于非活動(dòng)組、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.3 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析示，外周血Th17、血清IL-17水平與Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.681、0.677，外周血Treg細(xì)胞水平與Valentini疾病活動(dòng)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.526（P<0.05）。

3 討論

目前SSc的病因尚不明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，由于SSc患者以皮膚內(nèi)臟進(jìn)行性纖維化、微血管系統(tǒng)改變及細(xì)胞、體液免疫異常為主要特征，T細(xì)胞和B細(xì)胞可能在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演了重要角色[6]。T細(xì)胞主要通過(guò)分泌成纖維細(xì)胞及細(xì)胞因子，發(fā)揮促纖維化、促炎作用，其中Th17和Treg細(xì)胞分別具有正向、負(fù)向調(diào)控炎癥反應(yīng)作用[7]。

作為CD4+效應(yīng)T細(xì)胞的新亞型，Th17可特異性分泌促炎癥性細(xì)胞因子IL-17、IL-21、IL-22等，其在細(xì)胞外病原體感染、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等慢性炎癥疾病中發(fā)揮的促進(jìn)作用已得到相關(guān)研究證實(shí)[8-9]。

本研究結(jié)果示，活動(dòng)期SSc患者外周血Th17水平高于非活動(dòng)期患者，而非活動(dòng)期患者外周血Th17水平高于對(duì)照組健康體檢者，說(shuō)明Th17在SSc發(fā)生發(fā)展中亦占據(jù)著重要地位，Brembilla等[10]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)環(huán)磷酰胺治療1個(gè)月后，SSc患者外周血Th17水平明顯下降，其機(jī)制可能為SSc發(fā)病早期，患者體內(nèi)往往已大量富集IL-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）及IL-17，IL-6、TGF-β可刺激成纖維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)，誘導(dǎo)天然T細(xì)胞分化為Th17，IL-17則可促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，上調(diào)IL-6水平，形成惡性循環(huán)[11]。而Th17可直接分泌IL-6、IL-17，并增強(qiáng)成纖維細(xì)胞粘附分子表達(dá)，導(dǎo)致局部膠原合成增加、纖維化加劇[12]。此外，Santiago等[13]發(fā)現(xiàn)，隨著SSc患者病程的延長(zhǎng)，其外周血Th17水平逐漸上升，進(jìn)一步說(shuō)明Th17的持續(xù)擴(kuò)增與積累伴隨著SSc疾病全過(guò)程，而非僅于炎癥反應(yīng)階段發(fā)揮作用。本研究結(jié)果示外周血Th17水平與SSc疾病活動(dòng)評(píng)分呈正相關(guān)，印證了上述結(jié)論。

Treg細(xì)胞具有負(fù)調(diào)控免疫反應(yīng)作用，是介導(dǎo)免疫耐受、降低自體免疫的關(guān)鍵細(xì)胞。本研究結(jié)果示，活動(dòng)期SSc患者外周血Treg細(xì)胞百分比低于非活動(dòng)期患者，而非活動(dòng)期患者外周血Treg細(xì)胞百分比低于對(duì)照組健康體檢者，說(shuō)明SSc患者處于自身免疫抑制狀態(tài)[14-15]。與此同時(shí)，Treg細(xì)胞的缺失可導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞增殖能力上升，進(jìn)一步導(dǎo)致Th17/Treg體系失衡，體內(nèi)膠原合成、促炎因子釋放不斷加劇[16]，故隨著Treg細(xì)胞百分比的下降，患者疾病活動(dòng)評(píng)分逐漸升高。

IL-17是一種強(qiáng)大的促炎因子，主要由Th17分泌，在介導(dǎo)中性粒細(xì)胞招募、活化及遷移等過(guò)程中發(fā)揮一定作用。本研究結(jié)果示，活動(dòng)期SSc患者血清IL-17水平明顯升高，但非活動(dòng)期SSc患者血清IL-17水平與健康體檢者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Gao等[17]研究結(jié)果一致，說(shuō)明自身免疫紊亂、炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致SSc活動(dòng)的主要原因，且上述過(guò)程是相輔相成、相互促進(jìn)的，隨著IL-17水平的上升，血管內(nèi)皮損傷逐漸加劇，而血管內(nèi)皮的損傷可引發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致Th17水平上升，病情不斷進(jìn)展。此外，Truchetet等[18]發(fā)現(xiàn)，IL-17不僅可促進(jìn)成纖維細(xì)胞克隆增殖，還可上調(diào)膠原合成相關(guān)細(xì)胞因子、粘附分子表達(dá)，從而促進(jìn)膠原合成、誘發(fā)病情惡化。本研究結(jié)果可見(jiàn)，IL-17與SSc患者疾病活動(dòng)評(píng)分亦呈正相關(guān)，與上述假設(shè)一致。

綜上所述，SSc患者體內(nèi)Th17/Treg細(xì)胞體系平衡處于明顯失調(diào)狀態(tài)且往往伴隨著IL-17的大量分泌，上述變化均與患者疾病活動(dòng)具有密切關(guān)聯(lián)。針對(duì)這一機(jī)制，尋求一種調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡、抑制IL-17分泌的治療方案，有望為患者預(yù)后質(zhì)量的改善提供新的思路。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Kolb-M?urer A， Goebeler M， M?urer M. Cutaneous Adverse Events Associated with Interferon-β Treatment of Multiple Sclerosis[J]. Int J Mol Sci， 2015， 16（7）： 14951-14960.

[2] 雷玲， 鐘小寧， 何志義， 等. 白細(xì)胞介素-17在系統(tǒng)性硬化病小鼠模型中的表達(dá)及與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的相關(guān)性[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志， 2012， 16（1）： 42-46.

[3] Yang X， Yang J， Xing X， et al. Increased frequency of Th17 cells in systemic sclerosis is related to disease activity and collagen overproduction[J]. Arthritis Res Ther， 2014， 16（1）： 1.

[4] Guenther J， Kill A， Becker M O， et al. AB0143 Angiotensin receptor type 1 and endothelin receptor type a on immune cells mediate migration and the expression of il-8 and ccl18 when stimulated by autoantibodies from systemic sclerosis patients[J]. Ann Rheum Dis， 2013， 72（Suppl 3）： A829-A829.

[5] 劉心娟， 高娜， 李夢(mèng)濤， 等. 系統(tǒng)性硬化病患者外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞17平衡關(guān)系的變化[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志， 2016， 20（3）： 148-153.

[6] Santiago M G， Raposo M， Carvalheiro T， et al. A3. 24 Distinct profile of cytokine production by th17 cells in systemic sclerosis[J]. Ann Rheum Dis 2014， 73（Suppl 1）： A51-A52.

[7] Corrado A， Mele A， Colia R， et al. AB0193 Inhibitory Effect of 1， 25OH Vitamin D on IL-17 Related Pro-Fibrotic Cytokines Expression in Peripheral Blood Mononuclear Cells of Patients with Systemic Sclerosis[J]. Ann Rheum Dis， 2015， 74（Suppl 2）： 955-955.

[8] Weaver C T， Harrington L E， Mangan P R， et al. Th17： An Effector CD4 T Cell Lineage with Regulatory T Cell Ties[J]. Immunity， 2006， 24（6）：677-88.

[9] Martin D A， Towne J E， Kricorian G， et al. The emerging role of IL-17 in the pathogenesis of psoriasis： preclinical and clinical findings[J]. J Invest Dermatol， 2013， 133（1）： 17-26.

[10] Brembilla N C， Montanari E， Truchetet M E， et al. Th17 cells favor inflammatory responses while inhibiting type I collagen deposition by dermal fibroblasts： differential effects in healthy and systemic sclerosis fibroblasts[J]. Arthritis Res Ther， 2013， 15（5）： 1.

[11] Martin J C， Baeten D L， Josien R. Emerging role of IL-17 and Th17 cells in systemic lupus erythematosus[J]. Clin Immunol， 2014， 154（1）： 1-12.

[12] 陳輝， 趙勇. 天然型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育分化的研究進(jìn)展[J]. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展， 2013， 40（12）： 1186-1192.

[13] Santiago M G， Raposo M， Duarte C， et al. AB0144 Increased frequency of interleukin-2 production by th17 and tc17 lymphocytes in peripheral blood of systemic sclerosis patients[J]. Ann Rheum Dis， 2013， 72（Suppl 3）： A829-A829.

[14] 林曉濱， 陳穎， 楊德壕， 等. 脂肪源性干細(xì)胞對(duì)多發(fā)性硬化患者Th17的免疫調(diào)控作用[J]. 中國(guó)病理生理雜志， 2016， 32（1）： 51-57.

[15] Kato H， Perl A. Mechanistic target of rapamycin complex 1 expands Th17 and IL-4+ CD4- CD8- double-negative T cells and contracts regulatory T cells in systemic lupus erythematosus[J]. J Immunol， 2014， 192（9）： 4134-4144.

[16] 王晨宇， 王星， 王琳， 等. Th17細(xì)胞分化調(diào)節(jié)機(jī)制及與自身免疫性疾病關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志， 2014， 30（6）： 660-662.

[17] Gao N， Li M， Wang Q， et al. AB0037 The Characteristic of Cd4+ Cd45Ra-Foxp3Low Cells in Patients with Systemic Sclerosis[J]. Ann Rheum Dis， 2015， 74（Suppl 2）： 902-902.

[18] Truchetet M E， Brembilla N C， Montanari E， et al. Interleukin17A+ Cell Counts Are Increased in Systemic Sclerosis Skin and Their Number Is Inversely Correlated With the Extent of Skin Involvement[J]. Arthritis Rheum， 2013， 65（5）： 1347-1356.