徐建強(qiáng), 楊改鳳, 田 娟, 刁興旺

(河南科技大學(xué)林學(xué)院, 洛陽(yáng) 471003)

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三類殺菌劑對(duì)牡丹腔孢葉斑病菌生長(zhǎng)和發(fā)育的影響

徐建強(qiáng)*, 楊改鳳, 田 娟, 刁興旺

(河南科技大學(xué)林學(xué)院, 洛陽(yáng) 471003)

腔孢葉斑病是牡丹生產(chǎn)上出現(xiàn)的一種新病害,近幾年在洛陽(yáng)及菏澤牡丹種植園危害越來(lái)越重。為了篩選防治該病的化學(xué)藥劑,本文采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了3類8種殺菌劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性,采用涂布平板法測(cè)定了多菌靈、戊唑醇及嘧菌酯對(duì)病菌孢子萌發(fā)和芽管伸長(zhǎng)的影響,并在含藥平板上測(cè)定了3種藥劑對(duì)病菌產(chǎn)孢量的作用。結(jié)果表明:三唑類藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力最強(qiáng),EC50為0.020～0.096 μg/mL,且戊唑醇對(duì)孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢也有很強(qiáng)的抑制活性,在0.1 μg/mL時(shí)孢子即不能萌發(fā);甲氧基丙烯酸酯類藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的毒力較強(qiáng),EC50為0.408～0.939 μg/mL,嘧菌酯對(duì)芽管伸長(zhǎng)和產(chǎn)孢量均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制活性,10 μg/mL時(shí),芽管幾乎不再伸長(zhǎng),對(duì)產(chǎn)孢的抑制率可達(dá)到99%以上;而苯并咪唑類藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的毒力較弱,EC50為12.167～30.104 μg/mL,多菌靈對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用弱,100 μg/mL時(shí)孢子萌發(fā)率仍達(dá)到90%以上,對(duì)產(chǎn)孢的抑制作用也較弱,為63.02%。根據(jù)藥劑對(duì)病菌生長(zhǎng)和發(fā)育各階段的影響,生產(chǎn)中應(yīng)采用適宜的施用方法:戊唑醇和嘧菌酯可作為保護(hù)劑在病害發(fā)生前期噴施,也可作為治療劑在病害發(fā)生流行期應(yīng)用,但為防止抗藥性菌株的出現(xiàn),兩者應(yīng)當(dāng)輪換或復(fù)配使用。

牡丹腔孢葉斑病; 殺菌劑; 菌絲生長(zhǎng); 孢子萌發(fā); 孢子形成

牡丹(PaeoniasuffruticosaAndrews)隸屬于芍藥科芍藥屬牡丹組,素有“花中之王”的美稱,具有很高的觀賞價(jià)值[1]。牡丹還有一定的藥用價(jià)值,其器官提取物對(duì)線蟲、雜草及植物病原菌都有一定的抑制活性,顯示出在植物病害生物防治上的利用價(jià)值[2-4]。近年來(lái),在牡丹栽培管理過(guò)程中,由于對(duì)土壤和苗木消毒不嚴(yán)、栽培方法不當(dāng)、管理不善以及氣候等因素,真菌病害的危害有逐年加重的趨勢(shì),且出現(xiàn)了幾種新病害,腔孢葉斑病則是其中危害最為嚴(yán)重的病害之一[5]。目前,腔孢葉斑病在河南洛陽(yáng)、鄭州,山東菏澤、濟(jì)南、泰安等地的牡丹種植園中發(fā)生普遍,葉片發(fā)病率在20%～48%,危害日益加重[5-6]。腔孢葉斑病田間主要發(fā)生在8-9月份,故對(duì)當(dāng)年牡丹的觀賞價(jià)值影響較小;但感染葉斑病后,牡丹葉片光合作用及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成等生理功能受到破壞,導(dǎo)致根養(yǎng)分貯藏減少,對(duì)當(dāng)年的花芽長(zhǎng)勢(shì)及來(lái)年的開(kāi)花品質(zhì)產(chǎn)生嚴(yán)重影響[7-8]。腔孢葉斑病已成為牡丹生產(chǎn)上的巨大障礙,對(duì)該病害的防治迫在眉睫,急需篩選一批對(duì)該病有較好防效的化學(xué)殺菌劑。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)牡丹的研究主要在栽培繁殖、生物學(xué)特性、生物技術(shù)、應(yīng)用、分類及系統(tǒng)演化方面,對(duì)牡丹病害化學(xué)防治藥劑篩選的研究較少[9]。由于牡丹腔孢葉斑病是一種新病害,對(duì)其研究更少。段亞冰等研究了病菌的生物學(xué)特性,獲得了菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的最適培養(yǎng)條件[10]。張濤等的研究表明,病菌在液體培養(yǎng)時(shí)能產(chǎn)生毒素,且在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中產(chǎn)生的毒素致病力最強(qiáng)[11]。在防治藥劑篩選方面,國(guó)內(nèi)僅權(quán)淑靜等測(cè)定了16種藥劑對(duì)腔孢葉斑病菌的毒力,發(fā)現(xiàn)戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑、嘧霉胺及苯醚甲環(huán)唑5種藥劑抑菌效果較好[12]。但權(quán)淑靜等人用的全部是制劑,無(wú)法排除助劑對(duì)病菌生長(zhǎng)的影響;且僅測(cè)定了5種藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的毒力,未測(cè)定藥劑對(duì)病菌孢子萌發(fā)及產(chǎn)孢量的影響。為了篩選防治牡丹腔孢葉斑病的化學(xué)藥劑,本文測(cè)定了苯并咪唑類(多菌靈、甲基硫菌靈)、三唑類(戊唑醇、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑及苯醚甲環(huán)唑)及甲氧基丙烯酸酯類(嘧菌酯、醚菌酯)3類8種藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力;為進(jìn)一步了解藥劑對(duì)病菌生長(zhǎng)發(fā)育的全面影響,本文選取了多菌靈、戊唑醇及嘧菌酯,研究了其對(duì)孢子萌發(fā)、芽管形態(tài)和產(chǎn)孢量的抑制作用,評(píng)估了藥劑對(duì)病菌生長(zhǎng)發(fā)育的效應(yīng),分析了其應(yīng)用方法。研究結(jié)果為生產(chǎn)中牡丹腔孢葉斑病的化學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2013年8月在洛陽(yáng)市隋唐城遺址植物園千姿牡丹園采集發(fā)病典型、僅有單個(gè)病斑的牡丹葉片,采用組織分離法分離純化后獲得病菌純培養(yǎng);用無(wú)菌水制備孢子懸浮液,調(diào)節(jié)孢子濃度為1×105個(gè)/mL,取0.1 mL 孢懸液涂抹于水瓊脂平板(water agar,WA)上,顯微鏡下挑取單孢,獲得單孢菌株;經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定與ITS序列比對(duì),并回接到牡丹葉片上進(jìn)行柯赫式法則驗(yàn)證,鑒定為牡丹絨邊膠盤孢(Hainesialythri),菌株放入4℃冰箱保存。

1.2 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(potato sugar agar,PSA)用于菌株的分離、純化、孢子萌發(fā)率的測(cè)定和一般培養(yǎng)與保存;磷酸二氫鉀葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(KH2PO4dextrose agar,KDA)用于產(chǎn)孢時(shí)間的測(cè)定,其成分為:KH2PO41.0 g、KNO31.0 g、KCl 0.5 g、MgSO40.5 g、淀粉0.2 g、葡萄糖0.2 g、蔗糖0.2 g、瓊脂18～20 g、H2O 1 000 mL[13]。

1.3 供試藥劑

97%苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)原藥和97.5%嘧菌酯(azoxystrobin)原藥由先正達(dá)(中國(guó))投資有限公司生產(chǎn);98%多菌靈(carbendazim)原藥為山東省雙星農(nóng)藥廠生產(chǎn);98%戊唑醇(tebuconazole)原藥、95%醚菌酯(kresoxim-methyl)原藥為廣西田園生化股份有限公司生產(chǎn);98%丙環(huán)唑(propiconazole)原藥和96.5%氟環(huán)唑(epoxiconazole)原藥由江蘇利民化工有限公司生產(chǎn);97%甲基硫菌靈(thiophanate-methyl)原藥由江蘇新沂農(nóng)藥有限公司生產(chǎn);旁路氧化酶專化性抑制劑99%水楊肟酸由Sigma-Aldrich生產(chǎn)。多菌靈原藥預(yù)溶于0.1 mol/L稀鹽酸中;嘧菌酯、戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑原藥預(yù)溶于甲醇中;甲基硫菌靈、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、醚菌酯、水楊肟酸預(yù)溶于丙酮中。上述藥劑均配制成1.0×104μg/mL的母液備用。

供試生化試劑:蔗糖為分析純,天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;瓊脂粉:生物技術(shù)級(jí),合肥新恩源生物技術(shù)有限公司。

1.4 不同藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定。將分離純化所得菌株在PSA平板上25℃培養(yǎng)7 d后,用打孔器在菌落邊緣制成直徑5 mm的菌餅,接入含系列濃度藥劑的PSA平板上,其中多菌靈、甲基硫菌靈濃度為2.5、5、10、20、40、80 μg/mL;戊唑醇、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑濃度為0.015 6、0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5 μg/mL;對(duì)照培養(yǎng)基不加藥。甲氧基丙烯酸類殺菌劑嘧菌酯、醚菌酯的設(shè)定濃度為0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 μg/mL,另外為了抑制旁路氧化作用對(duì)病菌呼吸的補(bǔ)償作用,培養(yǎng)基中還需加入 100 μg/mL的水楊肟酸。25℃下培養(yǎng)10 d后十字交叉法測(cè)量菌落直徑,每處理重復(fù)3次,計(jì)算各濃度處理下藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率。菌絲生長(zhǎng)抑制率(%)=[(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)-(處理菌落直徑-菌餅直徑)]/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)×100。

1.5 不同藥劑對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)的影響

采用涂布平板法測(cè)定[14]。將菌株在PSA平板上25℃黑暗培養(yǎng)10 d后,用無(wú)菌水洗下分生孢子,4層紗布過(guò)濾除去菌絲,將濾液在5 000 r/min下離心10 min,去除上清液,將分生孢子重懸于無(wú)菌水中,調(diào)節(jié)孢子濃度至105個(gè)/mL,制備孢子懸液。取0.1 mL孢子懸液分別涂布在含0、0.1、1、5、10、50、100 μg/mL藥劑的PSA平板上(直徑9 cm),25℃恒溫培養(yǎng),待對(duì)照平板孢子開(kāi)始萌發(fā)后,每隔4 h每皿隨機(jī)觀察100個(gè)孢子,統(tǒng)計(jì)不同濃度下的孢子萌發(fā)率,以芽管長(zhǎng)度超過(guò)孢子最大直徑長(zhǎng)度的一半作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn),直到對(duì)照的萌發(fā)率達(dá)到95%以上,每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.6 不同藥劑對(duì)病菌芽管伸長(zhǎng)和形態(tài)的影響

參照侯穎等2014年的方法[13]。按照1.5的方法制備孢子懸液。取0.1 mL孢子懸液分別涂布在含0、0.1、1、5、10、50、100 μg/mL藥劑的PSA平板上,25℃黑暗培養(yǎng)24 h后在Olympus CX41光學(xué)顯微鏡下利用MD-50軟件中的標(biāo)尺功能測(cè)量孢子萌發(fā)后從孢子到芽管頂端的直線長(zhǎng)度,每處理隨機(jī)測(cè)50個(gè)芽管,求出芽管長(zhǎng)度的平均值,并進(jìn)行方差分析。采用同樣的步驟,25℃黑暗培養(yǎng)24 h后,切取含有孢子的PSA培養(yǎng)基塊,在XSP-8C型光學(xué)顯微鏡下觀察藥劑處理后分生孢子及芽管形態(tài),同不含藥劑培養(yǎng)基上的做比較,并進(jìn)行觀察拍照。

1.7 不同藥劑對(duì)病菌產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及數(shù)量的影響

參照康業(yè)斌等2007年的方法[15]。按照1.5的方法制備孢子懸液。參照多菌靈、戊唑醇、嘧菌酯抑制病菌菌絲生長(zhǎng)的有效抑制中濃度EC50,制備相應(yīng)濃度的含藥KDA平板,對(duì)照不加藥。取0.1 mL孢子懸液均勻涂布在KDA平板上,置25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),24 h后每天定時(shí)用手術(shù)刀切取正方形的培養(yǎng)基塊置載玻片上,在顯微鏡下觀察病菌分生孢子座的分化形成情況,直至分生孢子出現(xiàn)。以第一次觀察到分生孢子為分生孢子座形成時(shí)間,每處理3個(gè)重復(fù)。

用血球計(jì)數(shù)板測(cè)產(chǎn)孢量。制備3種藥劑EC50濃度的含藥PSA平板,對(duì)照平板不加藥。將病菌在PSA平板上培養(yǎng)7 d后,用直徑0.5 cm的打孔器在菌落邊緣打菌餅,分別接種在含藥平板上,每皿接一個(gè)菌餅,25℃黑暗培養(yǎng)10 d后,用直徑1.0 cm的打孔器在接種點(diǎn)附近打菌餅,無(wú)菌水洗下孢子,用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)孢子數(shù)量,重復(fù)3次,求出藥劑對(duì)產(chǎn)孢量的抑制率。產(chǎn)孢量抑制率(%)=(對(duì)照產(chǎn)孢量-處理產(chǎn)孢量)/對(duì)照產(chǎn)孢量×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

由表1可以看出,4種三唑類殺菌劑,氟環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇和丙環(huán)唑?qū)Σ【z生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng),EC50為0.020～0.097 μg/mL;兩種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,醚菌酯和嘧菌酯的抑制作用較強(qiáng);而兩種苯并咪唑類殺菌劑的抑制作用較弱,EC50均在10 μg/mL以上(表1)。同類殺菌劑不同品種對(duì)病菌的毒力相當(dāng);三唑類藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力最強(qiáng),而甲氧基丙烯酸酯類藥劑次之,兩者均可以作為牡丹腔孢葉斑病化學(xué)防治的備選藥劑。

2.2 不同藥劑對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)速率的影響

在不含藥劑的PSA平板上,28 h后病菌孢子萌發(fā)率接近100%。含多菌靈的平板上,22 h時(shí),各供試濃度下的孢子萌發(fā)率均高于對(duì)照;28 h時(shí),100 μg/mL孢子萌發(fā)率依然能達(dá)到90%以上,說(shuō)明多菌靈對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)無(wú)影響(圖1a)。嘧菌酯在低濃度(1 μg/mL以下)處理時(shí),22 h時(shí)病菌分生孢子的萌發(fā)率高于對(duì)照,但在5 μg/mL及更高濃度平板上,萌發(fā)率顯著下降;28 h時(shí),0.1～1 μg/mL平板上的萌發(fā)率均可達(dá)到90%以上,但在5 μg/mL及更高濃度平板上,萌發(fā)率均不到40%,且在100 μg/mL平板上,孢子均未萌發(fā);說(shuō)明嘧菌酯對(duì)分生孢子萌發(fā)速率的抑制作用較弱(圖1b)。戊唑醇對(duì)分生孢子萌發(fā)有強(qiáng)烈的抑制作用,28 h后,各濃度含藥平板上分生孢子均未能萌發(fā)。戊唑醇能強(qiáng)烈抑制牡丹腔孢葉斑菌分生孢子萌發(fā),嘧菌酯對(duì)孢子萌發(fā)有一定的抑制作用,而多菌靈對(duì)病菌分生孢子萌發(fā)則有促進(jìn)作用。

表1 8種藥劑對(duì)牡丹絨邊膠盤孢菌絲生長(zhǎng)的毒力Table 1 Toxicity of fungicides on mycelial growth of Hainesia lythri

圖1 藥劑對(duì)牡丹絨邊膠盤孢分生孢子萌發(fā)率的抑制Fig.1 Effects of fungicides on conidial germination rate of Hainesia lythri

2.3 不同藥劑對(duì)病菌芽管伸長(zhǎng)和形態(tài)的影響

由表2可以看出,在不含藥劑的PSA平板上,孢子萌發(fā)24 h時(shí)芽管長(zhǎng)度達(dá)到10 μm左右。0.1～5 μg/mL的多菌靈對(duì)芽管伸長(zhǎng)影響不明顯,芽管長(zhǎng)度長(zhǎng)于對(duì)照;但隨著濃度升高(10 μg/mL以上),盡管分生孢子能夠萌發(fā),但芽管伸長(zhǎng)受到強(qiáng)烈抑制,同對(duì)照相比差異顯著,尚不及對(duì)照芽管長(zhǎng)度的二分之一,說(shuō)明多菌靈盡管對(duì)孢子萌發(fā)速率無(wú)影響,但對(duì)芽管的伸長(zhǎng)有一定的抑制作用。嘧菌酯在低濃度時(shí)就對(duì)芽管伸長(zhǎng)有強(qiáng)烈的抑制作用,0.1 μg/mL時(shí)的芽管長(zhǎng)度已同對(duì)照差異顯著;隨著濃度增加,抑制效果越明顯;在濃度為10 μg/mL及以上時(shí),芽管幾乎不再伸長(zhǎng),盡管孢子能夠萌發(fā),但其芽管卻不能生長(zhǎng),已失去正常的生物學(xué)功能;說(shuō)明嘧菌酯不但對(duì)孢子萌發(fā)有影響,對(duì)已萌發(fā)的芽管伸長(zhǎng)也有抑制作用。由于戊唑醇在供試濃度下孢子均未能萌發(fā),故無(wú)法對(duì)芽管長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)量。

表2 不同濃度藥劑處理牡丹絨邊膠盤孢分生孢子 24 h時(shí)的芽管長(zhǎng)度1)Table 2 Germ tube length of Hainesia lythri treated with fungicides at different concentrations for 24 h

1) 表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)LSD方法檢驗(yàn)在P<0.05水平差異顯著。

Data are mean±SD.Different letters in the same column indicate significant difference atP<0.05 level by LSD test.

分生孢子萌發(fā)試驗(yàn)24 h后觀察發(fā)現(xiàn),在不含藥劑的PSA平板上,分生孢子大多從一端萌發(fā)形成菌絲狀芽管,細(xì)胞形態(tài)正常,能正常生長(zhǎng)并分化形成菌絲,但尚未產(chǎn)生分支(圖2a)。在含藥平板上,分生孢子和芽管均出現(xiàn)畸形。在含嘧菌酯的平板上,隨著藥劑濃度升高芽管長(zhǎng)度明顯變短,但芽管和分生孢子形狀變化不明顯(圖2b～g);高濃度下產(chǎn)生的芽管似蝌蚪狀(圖2f～g)。多菌靈在濃度為0.1～5 μg/mL時(shí)對(duì)芽管伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用,分生孢子從兩端萌發(fā)產(chǎn)生芽管的數(shù)量增多,芽管開(kāi)始產(chǎn)生分支,形態(tài)與對(duì)照相同;在10 μg/mL時(shí),芽管伸長(zhǎng)受到抑制,且萌發(fā)的芽管有基部膨大現(xiàn)象(圖2h);隨著濃度升高,生長(zhǎng)的芽管呈不規(guī)則畸形,表現(xiàn)為基部膨大、頂端膨大及中間局部膨大,藥劑濃度越高,膨大越明顯(圖2h～m);高濃度下芽管生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)生過(guò)度分支及不規(guī)則扭曲(圖2i～m)。戊唑醇在各供試濃度下,分生孢子形態(tài)正常,但均未能萌發(fā)。說(shuō)明在供試藥劑濃度下,藥劑對(duì)病菌表現(xiàn)出抑菌作用。

圖2 不同濃度藥劑處理24 h后牡丹絨邊膠盤孢分生孢子及芽管形態(tài)Fig.2 Abnormality of conidia and germ tubes of Hainesia lythri treated with different concentrations of carbendazim and azoxystrobin for 24 h

2.4 不同藥劑對(duì)病菌產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和數(shù)量的影響

將病菌孢子分別涂布于含嘧菌酯、多菌靈和戊唑醇的KDA平板以及不含藥劑的KDA平板上,經(jīng)25℃培養(yǎng)60 h后,含戊唑醇和不含藥劑的平板上出現(xiàn)分生孢子座和分生孢子,而含嘧菌酯和多菌靈的平板上未形成分生孢子座和分生孢子。含嘧菌酯的平板在72 h時(shí)開(kāi)始有分生孢子座出現(xiàn),而含多菌靈的平板觀察至96 h時(shí)仍未形成分生孢子座。說(shuō)明戊唑醇盡管對(duì)分生孢子萌發(fā)有抑制作用,但卻并不影響分生孢子的形成時(shí)間;而嘧菌酯和多菌靈則對(duì)分生孢子形成時(shí)間有延遲作用。

病菌在PSA上培養(yǎng)10 d后,可大量產(chǎn)孢。由圖3可知,嘧菌酯對(duì)病菌產(chǎn)孢數(shù)量抑制作用最為強(qiáng)烈,抑制率達(dá)到99.59%;其次為戊唑醇和多菌靈,抑制率分別為75.02%和63.02%。3種藥劑均對(duì)分生孢子產(chǎn)生有一定抑制作用。

圖3 殺菌劑對(duì)牡丹絨邊膠盤孢產(chǎn)孢量的抑制Fig.3 Inhibition of fungicides on sporulation of Hainesia lythri

3 結(jié)論與討論

本研究中3種藥劑對(duì)牡丹腔孢葉斑病菌菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢量的影響表明,在供試濃度下藥劑主要表現(xiàn)為抑菌作用:抑制菌絲生長(zhǎng),降低分生孢子萌發(fā)速率,并使分生孢子及芽管畸形,進(jìn)而降低病菌侵染寄主及在寄主上產(chǎn)孢的能力,達(dá)到有效防治牡丹腔孢葉斑病的目的。

權(quán)淑靜等人測(cè)定了16種殺菌劑對(duì)腔孢葉斑病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率,并選取了5種抑制率高的殺菌劑進(jìn)行了毒力測(cè)定,結(jié)果顯示:戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑、苯醚甲環(huán)唑?qū)Σ【囊种苹钚暂^高,EC50分別為0.032、0.064、0.139及0.584 μg/mL[11]。本文中4種殺菌劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的EC50分別為0.070、0.096、0.020、0.040 μg/mL,同權(quán)淑靜等人的結(jié)果有所不同,其原因可能是本文所使用的是原藥,而權(quán)淑靜等人用的是制劑;另一方面,菌株采集地的不同也可能是導(dǎo)致此結(jié)果的原因之一。

腔孢葉斑病菌除危害牡丹葉片外,其共無(wú)性型還可在牡丹枝干引起瘤點(diǎn)病[5,16]。本文供試菌株來(lái)自于牡丹葉片,經(jīng)鑒定為牡丹絨邊膠盤孢(H.lythri)。本文中供試藥劑對(duì)引起牡丹瘤點(diǎn)病的凹狀冒孢(Pilidiumconcavum)的毒力如何并未進(jìn)行測(cè)定。有必要測(cè)定藥劑對(duì)分離自牡丹枝條上的P.concavum的毒力,以進(jìn)一步明確兩種病原之間的關(guān)系以及篩選牡丹瘤點(diǎn)病的防治藥劑。

在牡丹種植園中,每年7、8月份后,各種葉斑病陸續(xù)開(kāi)始出現(xiàn),除了常發(fā)性的黑斑病、紅斑病和腔孢葉斑病外,其他葉部病害如柱枝孢葉斑病、灰霉病、黃斑病等也時(shí)有發(fā)生[1,6]。對(duì)牡丹葉部病害可通過(guò)藥劑復(fù)配來(lái)達(dá)到綜合防控的目的。嘧菌酯與戊唑醇復(fù)配后對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌(Alternariamali)的抑菌效果增效顯著[17];嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑復(fù)配不但可以防治西瓜炭疽病、枯萎病,而且對(duì)西瓜品質(zhì)也有一定改善[18]。這為進(jìn)行戊唑醇和嘧菌酯的復(fù)配來(lái)提高對(duì)牡丹腔孢葉斑病的防效及對(duì)牡丹葉部病害進(jìn)行綜合防控提供了參考。此外,甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑不但能防治植物病害,而且還可使植物葉片更加濃綠,延緩葉片衰老,導(dǎo)致葉片營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成及儲(chǔ)存增加,有利于牡丹當(dāng)年的花芽長(zhǎng)勢(shì),增加來(lái)年的觀賞價(jià)值[19],這更有利于牡丹的栽培管理。本研究結(jié)果顯示,三唑類和甲氧基丙烯酸酯類藥劑均可應(yīng)用到牡丹腔孢葉斑病的化學(xué)防治上,但根據(jù)其對(duì)病菌生長(zhǎng)發(fā)育的抑制效應(yīng),宜采用適宜的施用方法:戊唑醇和嘧菌酯作為保護(hù)劑在病害發(fā)生前期噴施,可抑制孢子萌發(fā)及芽管伸長(zhǎng),降低病菌的侵染率,防止病害發(fā)生;作為治療劑在病害發(fā)生期應(yīng)用時(shí),可抑制牡丹葉片內(nèi)的菌絲生長(zhǎng),降低菌絲在葉片上的擴(kuò)展速度;同時(shí),還可以抑制已侵入的病菌產(chǎn)孢,減少再侵染數(shù)量,阻止病害流行;但在病害流行期,為防止抗藥性菌株的出現(xiàn),應(yīng)盡可能將戊唑醇及嘧菌酯輪換或復(fù)配使用。本研究?jī)H進(jìn)行了三類殺菌劑對(duì)病菌生長(zhǎng)發(fā)育的影響,未進(jìn)行病害防治的田間試驗(yàn),相關(guān)工作有待于進(jìn)一步開(kāi)展。

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(責(zé)任編輯：田 喆)

Effects of fungicides on growth and development ofHainesialythricausing coelomycete leaf spot ofPaeoniasuffruticosa

Xu Jianqiang, Yang Gaifeng, Tian Juan, Diao Xingwang

(College of Forestry, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China)

Peony coelomycete leaf spot, a new disease whose causal agent wasHainesialythrion peony leaf, occurred more and more commonly in peony gardens in Luoyang and Heze. In order to screen fungicides for controlling the disease, the inhibitory activity of eight fungicides against mycelial growth was measured and the efficacy of carbendazim, tebuconazole and azoxystrobin on conidial germination and sporulation was determined in this study. The results showed that triazoles fungicides, including tebuconazole, epoxiconazole, propiconazole and difenoconazole, could strongly inhibit the mycelial growth with the EC50value from 0.020 to 0.096 μg/mL.The inhibitory activity of tebuconazole on conidial germination rate was the strongest, which could cause the conidia to stop germination even at the concentration of 0.1 μg/mL.Strobilurins fungicides, including azoxystrobin and kresoxim-methyl, could also inhibit the mycelial growth with the EC50value from 0.408 to 0.939 μg/mL.Azoxystrobin had strong inhibitory activity against germ tube growth and sporulation, indicating that it could cause the cease of germ tube growth at the concentration of 10 μg/mL and the inhibition rate of sporulation could reach beyond 99%. Benzimidazoles fungicides, including carbendazim and thiophanate-methyl, had lower inhibitory activity on mycelial growth rate with the EC50value from 12.167 to 30.104 μg/mL.For carbendazim, the germination rate of conidia could still exceed 90% even at the concentration of 100 μg/mL and the inhibition rate of sporulation was only 63.02%, implying that the inhibitory activity was weaker. Tebuconazole and azoxystrobin could be used as protective fungicides before the appearance of the peony coelomycete leaf spot and also as curative fungicides when the disease becomes more prevalent. To delay the onset of resistance, alternate and mixed use of the two fungicides is recommended.

peony coelomycete leaf spot; fungicide; mycelial growth; conidial germination; sporulation

2015-10-29

2016-01-13

國(guó)家自然科學(xué)基金(31401774)；國(guó)家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303023)；河南科技大學(xué)大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃(2015148)

S 436.8

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.014

* 通信作者 E-mail: xujqhust@126.com