劉 閆，王康康（黃淮學(xué)院化學(xué)化工系，河南 駐馬店 463000）

氯霉素殘留檢測方法研究進(jìn)展

劉 閆，王康康
（黃淮學(xué)院化學(xué)化工系，河南 駐馬店 463000）

氯霉素殘留對(duì)人體的危害極大，因此在國際上有關(guān)氯霉素的檢測方法備受關(guān)注和研究。起初是利用微生物進(jìn)行定性檢測，目前應(yīng)用較多的是先進(jìn)檢測技術(shù)的聯(lián)用，例如：UPLC-MS/MS，LC-MS等技術(shù)使氯霉素的檢測限、精密度和回收率等方面都得到了極大提高。

氯霉素；檢測方法；研究進(jìn)展

目前有關(guān)氯霉素的檢測方法有十幾種，在這些現(xiàn)有檢測方法中，公認(rèn)的方法是色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，但此技術(shù)仍需不斷地改進(jìn)。在國內(nèi)外對(duì)氯霉素殘留量的檢測方法仍在不斷的研究中。

1　色譜法

1.1薄層色譜法

莫金娜［1］等利用薄層色譜方法（TLC）檢測化妝品中的氯霉素殘留量。該方法是先用乙醇溶劑提取，以硅膠制板為載體、在展開劑為三氯甲烷-甲烷（85∶15）的薄層條件下鑒別化妝品中的氯霉素殘留量。從此實(shí)驗(yàn)得知，所檢驗(yàn)的樣品最小的檢限度為1.0mg/g。

1.2高效液相色譜-熒光檢測法

潘瑩宇等［2］高效液相色譜-熒光檢測方法（HPLC-FL）檢測牛奶中氯霉素殘留量。氯霉素易與鋅粉發(fā)生還原反應(yīng)，將氯霉素與鋅粉反應(yīng)后的溶液在緩沖溶液（醋酸鈉-醋酸）條件下可發(fā)生熒光衍生化反應(yīng)，之后加入熒光胺丙酮溶液。將待測品逐漸稀釋后在一定的色譜條件下進(jìn)行檢測。上述實(shí)驗(yàn)得出，氯霉素檢測檢出限為0.2μg/L。運(yùn)用此方法檢測牛奶中氯霉素的殘留量準(zhǔn)確度高，靈敏度好，操作較簡便等優(yōu)點(diǎn)。

1.3超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

彭麟等［3］利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）方法檢測黃鱔肌肉中氯霉素殘留量。此實(shí)驗(yàn)首先在黃鱔肌肉樣品中加入無水硫酸鈉和氯化鈉溶液，用堿性乙酸乙酯提取兩次。合并兩次提取液，在45℃水浴中氮吹至干。之后用5%甲醇溶液復(fù)溶，再加正己烷除脂，將下層水相過0.22μm濾膜，進(jìn)樣檢測。上述實(shí)驗(yàn)得出氯霉素檢測限為0.1μg/kg。本實(shí)驗(yàn)使用的UPLC-MS/MS方法具有精密度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)可以在保證回收率的基礎(chǔ)上有效地提高了檢測效率。

1.4氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜檢測法

潘玉香等［4］利用氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜（GC-MS/NCI）檢測方法對(duì)各種動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量進(jìn)行檢測。此實(shí)驗(yàn)方法以氘代氯霉素（D5-CAP）為內(nèi)標(biāo)物，用乙酸乙酯對(duì)各類樣品中的氯霉素進(jìn)行提取，用正己烷和40g/LNaCl溶液液液分配除脂肪，經(jīng)硅烷化衍生后由GC-MS/NCI在選擇離子監(jiān)測模式下進(jìn)行測定。此實(shí)驗(yàn)得出動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量的檢出限為0.5μg/kg。GC-MS/NCI檢測方法具有分析快速，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。

2　免疫分析法

免疫分析法在食品分析中正得到越來越廣泛的運(yùn)用，免疫分析法具有特異性、靈敏度高、快速和低成本等優(yōu)點(diǎn)，能夠用于樣品的定性篩選，也能夠?qū)悠愤M(jìn)行定量測定以確定樣品中氯霉素的含量，常用的有下面三種。

2.1免疫膠體金法

用于快速檢測樣品中氯霉素殘留含量的膠體金免疫層析試紙條，采用免疫競爭法，將抗氯霉素單克隆抗體-膠體金復(fù)合物包被在膠體金結(jié)合墊上，并將人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纖維素薄膜表面作為檢測線，其與待測樣品中氯霉素競爭結(jié)合膠體金標(biāo)記的氯霉素單克隆抗體。李余動(dòng)等［5］利用免疫膠體金法檢測蝦肉等組織試樣時(shí)，靈敏度最低值可達(dá)到1ng/ml，試紙條具有較高的靈敏度及特異性，操作便捷，穩(wěn)定可靠，可作為氯霉素殘留現(xiàn)場監(jiān)控的有效篩檢手段。

2.2酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法（ELISA）又稱酶標(biāo)法，是測定水產(chǎn)品中氯霉素含量的一種好方法。張勝幫等［6］利用酶聯(lián)免疫檢測方法測定水產(chǎn)品中殘留氯霉素殘留量。實(shí)驗(yàn)得出∶樣品在0.025～2.00ng/mL測定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢出限為0.009ng/mL。ELISA法具有檢測快速快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、適用范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。

2.3化學(xué)發(fā)光酶免疫法

張啟模等［7］以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)獲得了一株分泌抗氯霉素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞5D7，并對(duì)其進(jìn)行效價(jià)、親和力和特異性測定。應(yīng)用上述單抗建立的檢測氯霉素的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法，檢出限達(dá)0.0025μg/L可滿足我國對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測的要求。

3　其他新型的檢測技術(shù)

3.1分子印跡膜技術(shù)

李歡歡等［8］合成了對(duì)氯霉素具有快速響應(yīng)能力的聚苯胺分子印跡膜，實(shí)驗(yàn)結(jié)合差示脈沖伏安法建立了對(duì)氯霉素殘留量的檢測方法，同時(shí)將聚苯胺分子印跡膜用作電化學(xué)傳感器可以用以測定氯霉素眼藥水中的氯霉素。這種分子印跡膜制備方法具有操作簡單，耗時(shí)短，分子印跡膜均勻穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

3.2比色適配體傳感器

高慧菊等［9］提出了一種新穎的比色適配體傳感器用于快速檢測魚肉和鵝肉中氯霉素。本方法的建立是基于核酸適配體特異性結(jié)合目標(biāo)物的高選擇性能和氧化鈀納米顆粒標(biāo)記聚合酶螯合物的雙重信號(hào)放大效應(yīng)，它能特異性、靈敏性地快速檢測樣品中痕量氯霉素。該方法已經(jīng)成功地應(yīng)用于分析魚肉和鵝肉樣品中的氯霉素，其結(jié)果與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附測定方法相一致。

4　結(jié)語

氯霉素殘留問題已引起國際組織和許多國家和地區(qū)的高度重視，氯霉素殘留快速檢測方法的研究備受關(guān)注。氯霉素殘留量的檢測還有其他方法，如毛細(xì)管電泳法、生物傳感器法、超臨界流體色譜等。同時(shí)各種技術(shù)的聯(lián)用具有很重要的研究意義。

［1］潘瑩宇，許茜，康學(xué)軍等.高效液相色譜-熒光檢測法測定牛奶中氯霉素的殘留量［J］.色譜，2013（23）:577-580

［2］彭麟，郭大偉，張偉等.UPLC-MS/MS法檢測黃鱔中氯霉素類藥物殘留［J］.畜牧與獸醫(yī)，2016，48（04）:30-35

［3］潘玉香，董靜，呂建霞等.GC-MS/NCI穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)檢測動(dòng)物源性食品中氯霉素的含量［J］.分析試驗(yàn)室，2010，29（02）:720-1000.

［4］李余動(dòng)，張少恩，吳志剛等.膠體金免疫層析法快速檢測氯霉素殘留［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2005（05）:416-419.

［5］張勝幫，董士華.中國食品學(xué)報(bào).酶聯(lián)免疫檢測法測定水產(chǎn)品中殘留氯霉素的研究［J］.2006（06）:1009-7848.

［6］張啟模，楊姝，馬玲.氯霉素及其在畜水產(chǎn)品中殘留檢測技術(shù)研究進(jìn)展動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展［J］.2011，32（8）:12-16.

［7］李歡歡，常志顯等.聚苯胺分子印跡膜電化學(xué)傳感器檢測氯霉素［J］.化學(xué)研究，2013（06）:11-1008.

［8］高慧菊，潘道東，孫楊贏等.魚肉和鵝肉中氯霉素的比色適配體傳感器快速檢測［J］.現(xiàn)代食品科技，2016，32，5.

10.16640/j.cnki.37-1222/t.2016.18.005