麗 麗 李 明 鄭 楠 任 輝 文 芳*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京100193；2.吉林大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，長春130022；3.農(nóng)業(yè)部奶及奶產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心，北京100193)

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動物源食品中重組牛生長激素的作用及其檢測方法的研究進展

麗 麗1,2李 明1,3鄭 楠1,3任 輝2文 芳1,3*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動物營養(yǎng)學(xué)國家重點實驗室，北京100193；2.吉林大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，長春130022；3.農(nóng)業(yè)部奶及奶產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心，北京100193)

牛生長激素(bST)是由牛腦垂體分泌的一種蛋白質(zhì)類激素，有調(diào)節(jié)代謝和促進生長的功能，并可增加產(chǎn)奶量。隨著基因重組技術(shù)的發(fā)展，人們制造出大量重組牛生長激素(rbST)，將其用于奶牛飼養(yǎng)，以期提高奶牛產(chǎn)奶量。1994年，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)正式批準重組牛生長激素的使用。然而，隨后的研究表明重組牛生長激素的使用對動物健康和人類健康都有潛在的危害。因此，歐盟以及日本、加拿大、中國等國家將重組牛生長激素列為違禁品，嚴禁使用。本文綜述了動物源食品中重組牛生長激素的功能和檢測方法的研究進展，旨在為研究開發(fā)重組牛生長激素的快速、靈敏的檢測方法提供借鑒和參考。

重組牛生長激素；作用；食品安全；檢測方法

牛生長激素(bovine somatotropin,bST)是由牛腦垂體前葉分泌的一種蛋白質(zhì)類激素，有調(diào)節(jié)動物生長和促進奶牛催乳的功能[1]。早在20世紀30年代，俄國科學(xué)家就發(fā)現(xiàn)將腦垂體的粗提物注射到奶牛體內(nèi)能夠增加奶牛產(chǎn)奶量。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，增加奶牛產(chǎn)奶量的是腦垂體粗提物中的牛生長激素。20世紀80年代，隨著基因重組技術(shù)的重大突破，人們研制出基因合成的重組牛生長激素(recombinant bovine somatotropin,rbST)，將其用于奶牛飼養(yǎng)中。重組牛生長激素的使用使奶牛的產(chǎn)奶量增加了10%～15%。南非是第1個允許使用重組牛生長激素的國家，1994年美國食品和藥品管理局(FDA)正式批準了重組牛生長激素的使用[2]。隨后的研究發(fā)現(xiàn)重組牛生長激素的使用對動物健康存在潛在危害[3]。此外，重組牛生長激素的使用會使牛奶中可疑致癌物質(zhì)——類胰島素生長因子1號(IGF-1)含量顯著增加，這表明重組牛生長激素的使用對人類健康也有潛在威脅。因此，歐盟以及日本、加拿大等國家都禁止了重組牛生長激素的使用，我國也明令禁止重組牛生長激素的使用[4]。

1 牛生長激素的理化性質(zhì)及其功能

1.1 牛生長激素結(jié)構(gòu)與功能

牛生長激素是由牛腦垂體分泌的一種蛋白質(zhì)類激素，一般由190或191個氨基酸組成[5]，內(nèi)源性牛生長激素主要有4種，它們與重組牛生長激素的主要區(qū)別在于1/2和126/127位點的氨基酸，具體見表1。牛生長激素影響牛體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的組織代謝，腦垂體中生長激素的分泌受生長激素釋放因子的刺激，受生長抑素的抑制。牛生長激素的作用主要有提高牛奶合成所需營養(yǎng)素的吸收量、提高分泌細胞活性和提高乳汁合成量。

1.2 重組牛生長激素的合成及其使用

20世紀70年代，Genentech生物科技公司發(fā)現(xiàn)牛生長激素基因并申請了專利，隨后利用基因重組技術(shù)合成了重組牛生長激素，其結(jié)構(gòu)跟內(nèi)源性牛生長激素非常接近。重組牛生長激素跟內(nèi)源性牛生長激素的區(qū)別在于牛內(nèi)源性生長激素的N端位置的丙氨酸(A)被蛋氨酸(M)取代，其分子式為C978H1537N265O286S9，如圖1所示。

圖1 內(nèi)源性牛生長激素與重組牛生長激素的區(qū)別

重組牛生長激素的使用能使處于泌乳期的哺乳動物的產(chǎn)奶量增加。在產(chǎn)犢后的第8周，奶牛每日產(chǎn)奶量達到最高，余下的泌乳期每日產(chǎn)奶量逐漸下降，而重組牛生長激素的使用會使奶牛產(chǎn)奶量在本應(yīng)逐漸下降的時期仍保持在較高水平。產(chǎn)奶量的增加取決于重組牛生長激素的使用量、動物繁殖情況、營養(yǎng)情況、實際擠奶操作、畜群健康管理和環(huán)境條件等因素。

目前重組牛生長激素的應(yīng)用并沒有局限于奶牛中，重組牛生長激素也被用于山羊、綿羊和魚等其他物種當(dāng)中。對泌乳期的山羊使用重組牛生長激素可以增加山羊產(chǎn)奶量，雖然山羊?qū)ν庥眉に氐拿谌榉磻?yīng)個體差異較大，但是重組牛生長激素的使用會使山羊產(chǎn)奶量明顯增加(增量高達27%)[7]。有研究表明重組牛生長激素的使用會使大部分魚類的生長速度增加40%～60%[8-10]。

1.3 關(guān)于重組牛生長激素的爭議

1.3.1 動物健康

盡管美國食品藥品監(jiān)督管理局在1994年批準了重組牛生長激素的使用，但重組牛生長激素的使用還是頗具爭議。有研究表明重組牛生長激素對動物健康有潛在危害，并指出重組牛生長激素的使用會使奶牛患乳房炎的概率增加近25%，生育率降低約40%，患跛足的概率增加55%；該研究同時表明盡管重組牛生長激素的使用會使奶牛干物質(zhì)進食量增加，但卻會使奶牛的健康狀況下降[11]。

1.3.2 人類健康

牛奶中的重組牛生長激素的殘留對人類健康并無直接影響，因為重組牛生長激素的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)會在人類消化系統(tǒng)中被分解。重組牛生長激素對人類主要潛在危害是因為它會使牛奶中的可疑致癌物質(zhì)——IGF-1的含量顯著增加。IGF-1的熱穩(wěn)定性較好，乳制品加工工藝中常用的巴氏殺菌并不能使其變性。

1.3.3 風(fēng)險評估與監(jiān)管

食品法典委員會第7屆會議報告中討論了重組牛生長激素在食品中殘留問題，對于其最大殘留限量(MRL)和每日允許攝入量(ADI)的說明是“未指定”。這意味著當(dāng)時未能確定最大殘留限量。隨后，聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織專家委員會對重組牛生長激素進行了風(fēng)險評估，其商定結(jié)果也默認了“未指定”最大殘限量和每日允許攝入量。2013年11月，在日內(nèi)瓦舉行的第78屆聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專家委員會(JECFA)會議上對重組牛生長激素相關(guān)數(shù)據(jù)制訂了新的要求，即要求搜集所有必要的數(shù)據(jù)來更新毒理學(xué)評估數(shù)據(jù)，基于食品中新出現(xiàn)的所有數(shù)據(jù)更新暴露評估數(shù)據(jù)，評估對人類健康的潛在危害，考慮是否有必要修改關(guān)于重組牛生長激素的每日允許攝入量值和最大殘留限量值的規(guī)定。會議中規(guī)定的新數(shù)據(jù)和涉及人類健康的其他信息包括：因治療奶牛乳腺炎可能會增加的抗生素的使用量；因?qū)δ膛Ｊ褂弥亟M牛生長激素導(dǎo)致的牛奶中IGF-1含量的增加；重組牛生長激素對奶牛體內(nèi)某些病毒表達的潛在影響等。

重組牛生長激素的監(jiān)管制度主要是由各個國家獨立制定。目前為止允許和禁止使用重組牛生長激素的國家見表2。

表2 允許使用重組牛生長激素和禁止使用重組牛生長激素的國家

迫于輿論壓力，一些制造商和零售商只銷售未使用過重組牛生長激素的奶牛生產(chǎn)的牛奶及其制品。2000年，雀巢公司聲明雀巢公司不支持使用重組牛生長激素，主要是因為重組牛生長激素的使用在一些國家被認為是不良好的農(nóng)業(yè)規(guī)范，且很多消費者也不認可重組牛生長激素的使用。除此之外，目前很多農(nóng)場管理條件往往不能達到使用重組牛生長激素所要求的條件。

2 重組牛生長激素檢測方法

目前已報道的重組牛生長激素的檢測方法可以分為兩大類：直接檢測法和間接檢測法。直接檢測法是直接檢測樣品中重組牛生長激素殘留物，而間接檢測法是通過檢測樣品中特定生物標志物來測定是否使用過重組牛生長激素，這些生物標志物在樣品中的濃度與重組牛生長激素的使用量直接相關(guān)。

2.1 重組牛生長激素間接檢測法

2.1.1 檢測IGF-1

重組牛生長激素的使用會使IGF-1的含量顯著增加，因此IGF-1可作為生物標志物。目前已有研究者開發(fā)出用免疫學(xué)方法和質(zhì)譜法來檢測不同樣品中IGF-1含量的方法。IGF-1能和類胰島素生長因子結(jié)合蛋白(IGFBP)緊密結(jié)合形成IGF-1/IGFBP。IGF-1/IGFBP的形成可防止IGF-1在牛奶樣品中的降解，IGF-1的精確測定需要先將化合物徹底降解，這是IGF-1檢測中的關(guān)鍵點，這一步驟通過酸化來完成。Daxenberger等[14]通過加入類胰島素生長因子2號(IGF-2)來提高此步驟效率。最初，IGF-1的檢測局限于放射免疫檢測(RIA)法，近年來有學(xué)者提出采用生物傳感器、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和電化學(xué)發(fā)光免疫測定(ECLIA)等技術(shù)[15-16]。有研究者利用流式細胞免疫測定(FCIA)法測定了血液中的IGF-1含量，該方法檢測限為216 ng/mL，顯著改善了重組牛生長激素檢測的特異性和靈敏度[17]。IGF-1也可以通過質(zhì)譜檢測，目前有2種檢測方法，一種是直接檢測完整的IGF-1，另一種是用胰蛋白酶酶解IGF-1之后測定其特異性肽段[18]，質(zhì)譜檢測之前的前處理部分的關(guān)鍵點仍是IGF-1/IGFBP的解離。

2.1.2 檢測重組牛生長激素的抗體

重組生長激素的另一種生物標志物類型是重組牛生長激素的抗體，重組牛生長激素抗體是牛體內(nèi)因連續(xù)重組牛生長激素治療應(yīng)激產(chǎn)生的。這種方法首次被Scippo等[19]開發(fā)，他們采用ELISA法測定牛血液中的重組牛生長激素抗體濃度，在注射重組牛生長激素后的第28周便能在公牛體內(nèi)檢測到重組牛生長激素抗體，奶牛體內(nèi)的重組牛生長激素抗體則是在注射后的第66周便可被檢測到?？贵w濃度在注射重組牛生長激素后的第3或第4個月開始逐漸上升，在后來的6個月中逐漸趨于穩(wěn)定。在這段時間內(nèi)，可通過上述方法檢測牛血液中生物標記物或抗體濃度來測定是否使用過重組牛生長激素。由于牛對重組牛生長激素免疫應(yīng)答的個體差異較大，具有較低免疫應(yīng)答的牛不產(chǎn)生抗體，導(dǎo)致部分檢測結(jié)果呈現(xiàn)假陰性[20-21]。

2.1.3 檢測其他生物標志物

除了IGF-1和重組牛生長激素的抗體之外，還有其他生物標志物可以間接檢測是否使用過重組牛生長激素。Scippo等[22]研究表明，牛血液中類胰島素結(jié)合蛋白-2(IGFBP-2)的含量跟生長激素的使用有一定關(guān)系。他們開發(fā)了一種利用IGFBP-2特異性抗體的免疫學(xué)方法來檢測IGFBP-2。該方法對檢測注射過重組牛生長激素的牛效果顯著，并在奶牛接受重組牛生長激素治療之后60周便能檢測出是否使用過重組牛生長激素。

有研究采用流式細胞儀同時測定了血清中的4種生物標志物：IGF-1、重組牛生長激素抗體、骨鈣素和IGFBP-2。IGF-1和IGFBP-2對重組牛生長激素治療的響應(yīng)較迅速，而骨鈣素和重組牛生長激素抗體的響應(yīng)比IGF-1和IGFBP-2的響應(yīng)更持久?；趯?0多個對照樣品的分析，得出以IGF-1和骨鈣素作為生物標志物的方法的檢測限分別為216和160 ng/mL[19,22]。

2.2 重組牛生長激素直接檢測法

重組牛生長激素是一種蛋白質(zhì)類激素，它的檢測一直較有難度。一是因為重組牛生長激素跟內(nèi)源性牛生長激素結(jié)構(gòu)極其相似，且血液和牛奶中重組牛生長激素的濃度很低；二是動物血液中重組牛生長激素濃度波動較大。目前直接檢測重組牛生長激素的方法主要有基于免疫學(xué)的檢測方法和基于質(zhì)譜的檢測方法。

2.2.1 免疫學(xué)法

基于免疫學(xué)的檢測方法無法區(qū)分重組牛生長激素和內(nèi)源性牛生長激素，只能檢測到這2種形式的生長激素的總和。由于腎臟排泄和生長激素受介導(dǎo)的消除作用，血清中生長激素的半衰期非常短(15～20 min)[23]。1971年，Trenkle[24]首次評估了生長激素的動力學(xué)參數(shù)，研究表明重組牛生長激素的半衰期約為22 min。該作者還研究了牛犢和綿羊體內(nèi)生長激素代謝機制，試驗結(jié)果表明生長激素在牛犢和綿羊中的半衰期分別為13和30 min，此研究以免疫學(xué)方法為基礎(chǔ)，檢測到血漿中生長激素的濃度在施藥后的7 d內(nèi)顯著上升，在14 d之后逐漸下降[25]。該作者另有研究表明，未使用重組牛生長激素的奶牛血清中生長激素濃度在0～10 ng/mL，每日接受重組牛生長激素注射的奶牛血清中生長激素濃度約為40 ng/mL[26]。盡管免疫學(xué)法在定量測定中精確有效，且檢測限較低，可達pg/mL級別，但該方法無法區(qū)分重組牛生長激素和內(nèi)源性牛生長激素，檢測到的是2種生長激素的總和[27]。

2.2.2 質(zhì)譜法

有研究采用電噴霧(ESI)和基質(zhì)輔助激光解析(MALDI)的質(zhì)譜法成功檢測到重組牛生長激素[28-30]，其中部分研究檢測的是完整的重組牛生長激素，還有一部分是檢測的重組牛生長激素的特異性肽段。直接檢測完整重組牛生長激素的方法能夠鑒別內(nèi)源性牛生長激素和重組牛生長激素，但其靈敏度低，對分子質(zhì)量有限制，因此，研究者們?yōu)榱藢⒎治鱿薅ㄔ谔禺愋噪亩危瑢χ亟M牛生長激素的酶解效果進行了研究。Rochut等[31]研究并對比了胰蛋白酶、糜蛋白酶和胃蛋白酶的酶解效果，結(jié)果表明胰蛋白酶的酶解效果最佳。上述研究表明，以胰蛋白酶酶解為基礎(chǔ)的方法顯著提高了檢測方法的靈敏度，這種基于特異性肽段的檢測方法能夠區(qū)分內(nèi)源性牛生長激素和重組牛生長激素。

從直接檢測法和間接檢測法的應(yīng)用中可以看出，間接檢測法不能直接地反映血液和牛奶等樣品中的重組牛生長激素的濃度，因為動物個體差異，可能出現(xiàn)假陰性和假陽性的結(jié)果，其檢測結(jié)果需要進一步地驗證。直接檢測法主要有免疫學(xué)法和質(zhì)譜法。免疫學(xué)法能直接反映出樣品中生長激素的濃度，但是檢測到的是內(nèi)源性生長激素和重組生長激素的總和?；谫|(zhì)譜檢測的方法有2種，一種是直接檢測完整的重組生長激素，這種方法靈敏度較低，另一種是通過測定特異性肽段測定重組牛生長激素的濃度，該方法靈敏度高，但是因樣品中重組生長激素濃度較低，對樣品前處理要求較高，前處理步驟繁瑣。因此，重組牛生長激素檢測方法的開發(fā)需要進一步研究前處理的簡化及檢測方法靈敏度的提高。

3 不同樣品中生長激素的檢測

3.1 血液

在血液中，重組生長激素濃度極低(μg/L級別)，故生長激素的提取和檢測分析較困難。Bailly-Chouriberry等[32]采用硫酸銨沉淀和固相萃取等方法對馬血樣進行前處理，利用胰蛋白酶酶解，采用質(zhì)譜檢測重組馬生長激素(reST)的N端特異性肽段。該試驗表明，注射完重組馬生長激素后的8 min就可在血漿中檢測到重組馬生長激素，4 h之后觀察到重組馬生長激素濃度達到最大值。該研究開辟了在動物基質(zhì)中檢測生長激素的先河。隨后有研究報道了關(guān)于接受催乳素治療的奶牛血液中重組牛生長激素的特異性檢測，還描述了生物體中的消除動力學(xué)，但該檢測方法靈敏度未達到預(yù)期效果。研究表明，在接受重組牛生長激素注射4 h 30 min之后便可檢測到重組牛生長激素，在24 h之后可檢測到重組牛生長激素最大濃度，約為10 ng/mL；隨后血液中重組牛生長激素含量逐漸下降，但是在注射后4 d之內(nèi)仍可以進行定量檢測[6]。隨后在不同動物中的研究表明，雖然動物體內(nèi)重組牛生長激素濃度的個體差異較大，但是經(jīng)過2個周期的催乳素注射之后其濃度均高于100 ng/mL，可檢測到重組牛生長激素的時間長達2周[33]。同樣的方法也成功應(yīng)用于注射過重組牛生長激素的其他動物血液中重組牛生長激素濃度的檢測。在1只注射了1劑量(250 mg)催乳素的羊的血漿中檢測發(fā)現(xiàn)其重組牛生長激素的最大濃度約為40 ng/mL[34]。Rochereau-Roulet等[35]用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法檢測了彩虹鱒魚血清中的重組牛生長激素濃度，該方法的檢測限為0.5 μg/mL，使用了重組牛生長激素的魚類的血清中重組牛生長激素濃度為5～10 μg/mL，Rochereau-Roulet等[35]建立的方法的檢出限遠低于魚類血清中重組牛生長激素濃度，故可證明該方法是檢測魚類血清中重組牛生長激素濃度有效的方法。

3.2 牛奶

牛奶是目前為止檢測重組牛生長激素最具挑戰(zhàn)性的樣品，主要是因為以下2個原因：一是牛奶中重組牛生長激素濃度很低(

目前為止，檢測血清和血漿中重組牛生長激素的方法一般是通過固相萃取、甲醇沉淀和酶解等前處理過程之后用高效液相色-譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-ESI-MS/MS)法檢測其特異性肽段，該方法檢測限可達7 ng/mL，但是這個水平還不足以檢測牛奶中重組牛生長激素的濃度，因此需要更高精確度和靈敏度的檢測方法來解決這個問題[33]。研究表明應(yīng)用多反映監(jiān)測模式能提高檢測方法的靈敏度[34]。然而，因為牛奶中重組牛生長激素濃度極低，仍需要進一步研究開發(fā)高靈敏度的檢測方法和提取率高的前處理方法。

研究表明重組牛生長激素是熱敏感物質(zhì)[36]，巴氏殺菌、噴霧干燥等跟熱處理相關(guān)的加工工藝會破壞牛奶中的重組牛生長激素，導(dǎo)致重組牛生長激素回收率降低。食品中殘留的重組牛生長激素被破壞，從食品安全角度考慮對消費者有利，然而同時也意味著目前多數(shù)方法并不適用于食品中殘留的重組牛生長激素的檢測，熱處理導(dǎo)致的重組牛生長激素濃度的降低使檢測難度更大。

4 小結(jié)及展望

本文系統(tǒng)介紹了重組牛生長激素檢測方法的研究進展。隨著有效的提取技術(shù)和檢測技術(shù)的迅速發(fā)展，重組牛生長激素檢測方法在近幾年有較大突破。但是因血液和牛奶樣品中重組牛生長激素濃度極低，為了精確測定血液和牛奶樣品中重組牛生長激素的濃度，仍需將研究重點放在提高檢測方法的靈敏度上。對比不同的檢測方法可知，由于動物個體差異，間接檢測法會出現(xiàn)假陰性等問題，其檢測結(jié)果需要進一步驗證；直接檢測法中的免疫學(xué)方法雖然精確，但是不能區(qū)分內(nèi)源性牛生長激素和重組牛生長激素。目前，基于質(zhì)譜通過檢測特異性肽段測定重組牛生長激素濃度的方法比較精確可靠，它能精確分辨內(nèi)源性牛生長激素和重組牛生長激素的，其方法有以下2種：一種是從基質(zhì)中將重組牛生長激素提取出來，胰蛋白酶酶解，檢測特異性N端肽段；另一種是先用胰蛋白酶酶解樣品，隨后采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行提取和檢測。

關(guān)于重組牛生長激素的檢測，目前存在的主要問題有2個：一是檢測方法的靈敏度和特異性需提高；二是重組牛生長激素檢測標準的缺乏。JECFA在其第78次會議中決定重新評估重組牛生長激素，目的是更新重組牛生長激素的風(fēng)險評估數(shù)據(jù)，從中我們可以獲得數(shù)據(jù)的全面信息，這將有利于重組牛生長激素檢測方法研究的進一步發(fā)展。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: jiaqiwang@vip.163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Recombinant Bovine Somatotropin: Function and Research Progress of Detection Methods in Animal-Source Food

LI Li1,2LI Ming1,3ZHENG Nan1,3REN Hui2WEN Fang1,3*

(1. State Key Laboratory of Animal Nutrition, Institute of Animal Science, Chinese Academy of AgricultureSciences, Beijing 100193, China; 2. College of Food Science and Engineering, Jilin University,Changchun 130022, China; 3. Ministry of Agricultural Milk and Dairy Inspection and Supervision Center,Beijing 100193, China)

Bovine somatotropin (bST), also called growth hormone (GH) is a kind of protein hormone, which is produced from anterior pituitary gland of mammals. bST could regulate metobolic process, promote animal growth and increase milk yield. With the breakthrough of genetic recombination technology, a large amount of recombinant bovine somatotropin (rbST) was produced and applied to dairy farming to increase milk yield. USA approved the use of rbST in 1994 (FDA). While further studies have showed that the use of rbST might have potential threat to both human and animal health. Thus, many countries including European Union, Canada, Japan and China have prohibited the use of rbST, which was classified as contraband. The function and research progress of detection methods of rbST in animal-source food were summarized in this review, aiming to provide reference to the research development for rapid and sensative detection methods of rbST.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(11)：3414-3421]

recombinant bovine somatotropin; function; food safety; detection method

2016-04-20

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS12)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項資金(nycytx-04-01)；生鮮乳質(zhì)量安全風(fēng)險評估專項(GJFP2015009)

麗 麗(1992—)，女，內(nèi)蒙古興安盟人，碩士研究生，研究方向為牛奶質(zhì)量與安全。E-mail： 1158050764@qq.com

*通信作者：文 芳，副研究員，E-mail： jiaqiwang@vip.163.com

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.11.007

S859.84

A

1006-267X(2016)11-3414-08