聞公靈 溫昌明 張保朝

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 南陽(yáng) 473009)

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辛伐他汀對(duì)2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血漿CTRP3、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及血脂的影響

聞公靈 溫昌明 張保朝

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 南陽(yáng) 473009)

目的 探討辛伐他汀對(duì)2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血漿脂肪因子CTRP3、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及血脂的調(diào)控作用。方法 采用鏈脲佐菌素+維生素D3+高脂飲食建立糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型。將Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=10)、正常干預(yù)組(n=10)、模型對(duì)照組(n=22)以及模型干預(yù)組(n=22)。采用濃度為20 mg·kg-1·d-1的辛伐他汀對(duì)正常干預(yù)組和模型干預(yù)組大鼠進(jìn)行灌胃處理，采用20 ml·kg-1·d-1的蒸餾水灌胃于正常對(duì)照組和模型對(duì)照組作為陰性對(duì)照。比較各組大鼠辛伐他汀干預(yù)前后血漿中血脂、VEGF和CTRP3含量變化。結(jié)果 模型對(duì)照組動(dòng)脈病理可見(jiàn)顯著粥樣斑塊，模型干預(yù)組病變較模型對(duì)照組明顯減輕；模型干預(yù)組血脂和VEGF水平明顯高于正常對(duì)照組和正常干預(yù)組、低于模型對(duì)照組，而CTRP3水平顯著高于正常對(duì)照組和模型對(duì)照組而低于正常干預(yù)組(P<0.05)。結(jié)論 VEGF、CTRP3 可能參與糖尿病性動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，辛伐他汀除具有降血脂和下調(diào)VEGF等作用外，還能上調(diào)CTRP3的表達(dá)，對(duì)糖尿病性動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)揮保護(hù)作用。

辛伐他汀；2型糖尿病性動(dòng)脈粥樣硬化；CTRP3；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；血脂

2型糖尿病(T2DM)并發(fā)心血管疾病已成為糖尿病患者致殘致死的主因，而動(dòng)脈粥樣硬化(AS)和血管內(nèi)血栓形成會(huì)增加患者的危險(xiǎn)性〔1〕。最新研究發(fā)現(xiàn)，T2DM是一種由炎性病變導(dǎo)致的慢性疾病，炎癥因子和脂肪細(xì)胞因子等參與了T2DM相關(guān)性病變的發(fā)生發(fā)展〔2〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在促進(jìn)血管新生中發(fā)揮重要作用，在AS斑塊形成過(guò)程中的作用同樣不容忽視〔3〕。脂肪因子C1q/TNF相關(guān)蛋白(CTRP)3因具有抗炎、抗AS的突出作用而引起醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注〔4〕。有文獻(xiàn)報(bào)道，糖尿病作為一組由多病因引起的以慢性高血糖為特征的終身代謝性疾病常伴隨脂質(zhì)代謝紊亂〔5〕。辛伐他汀作為常用的他汀類(lèi)調(diào)血脂藥物具有降脂、促成骨細(xì)胞分化、抗炎及抗平滑肌細(xì)胞增殖、改善內(nèi)皮細(xì)胞活性與功能修復(fù)、抗血栓與血液流變學(xué)改善等作用〔6〕。本研究通過(guò)分析辛伐他汀對(duì)T2DM性AS大鼠血漿CTRP3、VEGF及血脂的影響，探討辛伐他汀對(duì)T2DM性AS發(fā)揮的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)動(dòng)物：3周齡Wistar雄性大鼠(體質(zhì)量140～180 g)，河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)MCXK(冀)2015-6-014。(2)主要試劑：鼠VEGF ELISA試劑盒、鼠CTRP3 ELISA試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物制品公司；鏈脲佐菌素(STZ，美國(guó)Sigma公司)；維生素D3(陜西森朗生物化工有限公司)；辛伐他汀購(gòu)于杭州默沙東制藥有限公司(20 mg/片)。(3)儀器與設(shè)備：Infinite F50 酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司)；奧林巴斯IX83倒置熒光顯微鏡(日本OLYMPUS公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組、處理及模型建立 90只清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 w后稱(chēng)重，隨機(jī)抽取30只大鼠，將其再隨機(jī)分成正常對(duì)照組(n=10)、正常干預(yù)組(n=10)。余下的70只大鼠禁食12 h，STZ溶液(50 mg/kg)腹腔注射72 h后采用尾靜脈抽血的方式檢測(cè)大鼠血糖，造模大鼠進(jìn)食前后血糖值分別>7.0 mmol/L和11.1 mmol/L時(shí)認(rèn)為糖尿病模型誘導(dǎo)成功。維生素D3溶液(按總劑量50萬(wàn)U/kg)向初步成模大鼠灌胃3 d，進(jìn)一步篩選出糖尿病合并AS大鼠。因造模過(guò)程中死亡19只，27只不符合模型要求而篩掉，最終共有 44只大鼠造模成功。將成模大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(n=22)以及模型干預(yù)組(n=22)。在隨后的8 w實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，正常干預(yù)組和模型干預(yù)組每天灌胃20 mg/kg辛伐他汀溶液，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每天同等劑量蒸餾水灌胃。各組大鼠均采用富含高糖飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。

1.2.2 生化檢測(cè) 第8周將各組大鼠禁食12 h后眼眶取血，3 000 r/min離心15 min，取上清液-80℃低溫保存?zhèn)溆?。室溫下將血清靜置30 min后，采用生化分析儀檢測(cè)各組血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作要求，采用相應(yīng)ELISA試劑盒檢測(cè)各組大鼠血清中VEGF以及CTRP3的表達(dá)情況。

1.2.3 動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)觀察 各組大鼠處死之前迅速取約1 cm的胸主動(dòng)脈上段部分，生理鹽水沖洗后迅速置于體積分?jǐn)?shù)為4%的中性甲醛緩沖液中浸泡固定，石蠟包埋，常規(guī)切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察各組大鼠組織形態(tài)變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)觀察 正常干預(yù)組的動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，分層清楚完整；正常對(duì)照組動(dòng)脈發(fā)現(xiàn)少許泡沫細(xì)胞；相對(duì)于模型對(duì)照組動(dòng)脈明顯的粥樣斑塊、表層纖維帽化現(xiàn)象，模型干預(yù)組辛伐他汀干預(yù)后粥樣斑塊明顯減少，表層纖維帽病變程度顯著減輕。見(jiàn)圖1。

2.2 各組血脂水平比較 模型對(duì)照組TC、TG、LDL-C、HDL-C均高于正常對(duì)照組、正常干預(yù)組，而當(dāng)辛伐他汀干預(yù)后的模型干預(yù)組中TC、TG、LDL-L及HDL-C均低于模型對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

圖1 四組大鼠動(dòng)脈病理觀察(HE，×200)

組別nTCTGLDL-CHDL-C正常對(duì)照組103.99±0.430.37±0.090.44±0.070.48±0.32正常干預(yù)組102.24±0.410.39±0.110.88±0.080.71±0.18模型對(duì)照組2213.70±11.021)2)1.78±1.061)2)5.62±4.631)2)3.37±2.641)2)模型干預(yù)組225.23±2.553)0.67±0.533)2.37±0.413)0.96±0.253)F值9.5329.1546.3813.976P值<0.01<0.01<0.051<0.05

1)與正常對(duì)照組比較，2)與正常干預(yù)組比較，3)與模型對(duì)照組比較：P<0.05

2.3 各組大鼠血漿VEGF、CTRP3 水平比較 干預(yù)組VEGF的表達(dá)均低于相應(yīng)的對(duì)照組，CTRP3均高于相應(yīng)的對(duì)照組；模型對(duì)照組VEGF高于模型干預(yù)組，而CTRP3卻低于模型干預(yù)組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血漿VEGF、CTRP3水平比較

3 討 論

包括AS、高血壓和冠心病在內(nèi)的心血管疾病是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量〔7〕。血管病變和受累器官的缺血程度以及脂質(zhì)的聚集是目前較為認(rèn)可的AS誘發(fā)因素。當(dāng)受到高血壓、高脂血癥等心血管方面的病變刺激后，血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生功能性和滲透性的改變，致使脂質(zhì)在血管內(nèi)皮下集聚形成脂肪斑塊。此外，血小板能夠激活血液中的纖維蛋白，參與內(nèi)脂調(diào)節(jié)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，其聚集狀態(tài)顯著促進(jìn)AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程。隨著脂質(zhì)的不斷聚集和多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管內(nèi)壁纖維帽逐漸變薄演變成不穩(wěn)定斑塊，最終形成粥樣硬化〔7〕。

作為羥甲戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoA)抑制劑的他汀類(lèi)藥物，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶HMG-CoA，阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸的代謝途徑，致使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而達(dá)到利用降低血脂來(lái)防治AS的目的。臨床證實(shí)20～40 mg/d辛伐他汀有助于冠心病的早期預(yù)防，能夠減少例如心梗、猝死等急性冠狀動(dòng)脈事件的發(fā)生率〔7〕。另有文獻(xiàn)報(bào)道他汀類(lèi)藥物還有抗炎抗血栓、抑制血小板聚集等作用〔8〕。本研究提示辛伐他汀在降脂、抑制AS斑塊上的作用極為顯著。最新的研究認(rèn)為他汀類(lèi)藥物不僅能夠有效遏制并逆轉(zhuǎn)斑塊發(fā)生發(fā)展，同時(shí)通過(guò)下調(diào)VEGF和上調(diào)CTRP3降低血脂、抑制血小板聚集與抗血栓，從而改善血管內(nèi)皮的功能而發(fā)揮臨床效益〔9〕。

VEGF具有特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖分裂、促進(jìn)血管新生的顯著作用，其活性增強(qiáng)可能直接促進(jìn)粥樣斑塊的發(fā)生與發(fā)展〔10〕。有研究認(rèn)為，在單核細(xì)胞中VEGF可以充當(dāng)趨化因子，誘發(fā)單核細(xì)胞聚集于斑塊內(nèi)部，從而促進(jìn)斑塊的進(jìn)展〔11〕。CTRP3可以通過(guò)直接或間接激活肝臟絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(Akt)，對(duì)糖異生途徑中的核心酶葡萄糖-6磷酸酶(G6Pase)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表達(dá)進(jìn)行抑制，從而有效降低血脂〔12，13〕。本研究發(fā)現(xiàn)，辛伐他汀可能通過(guò)下調(diào)VEGF、上調(diào)CTRP3表達(dá)，減輕炎癥和血小板黏附，抑制斑塊發(fā)生發(fā)展，多因素綜合使之對(duì)T2DM大血管病變發(fā)揮保護(hù)作用。

綜上所述，辛伐他汀不僅可以降低血脂水平，還可以通過(guò)降低VEGF和上調(diào)CTRP3的表達(dá)使之發(fā)揮保護(hù)T2DM性AS的作用，為臨床合理使用他汀類(lèi)藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

張保朝(1963-)，男，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)內(nèi)科方面的研究。

聞公靈(1974-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事腦血管病方面的研究。

R587

A

1005-9202(2016)21-5255-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.018