岳鼎鼎 宛曉春，周裔彬 楊嚴(yán)鷗，張建立 桑八一，張堯北平

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230036 (安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230036

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茶葉種類及添加量對斑點(diǎn)叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指標(biāo)的影響

岳鼎鼎 宛曉春，周裔彬 楊嚴(yán)鷗，張建立 桑八一，張堯北平

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230036 (安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230036

選擇屏山炒青、霍山黃芽、黃山毛峰、龍井4種非發(fā)酵茶和祁門紅茶、普洱茶2種發(fā)酵茶，分別按1%和2%添加量加入斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)基礎(chǔ)飼料中，進(jìn)行為期8周的養(yǎng)殖試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)束后，每箱隨機(jī)撈取7尾試驗(yàn)魚，測定各組魚體肝臟組織的谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)活性；然后降低水位，對每箱剩余的23尾試驗(yàn)魚進(jìn)行3d的擁擠脅迫，再每箱隨機(jī)撈取7尾測定肝臟組織的3項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果顯示：龍井(1%、2%組)在脅迫前可顯著提高GSH含量，霍山黃芽(1%、2%組)和祁門紅茶(1%組)在脅迫后提高GSH含量的作用更為顯著；脅迫前，所有茶葉都不能提高GSH-Px活力；脅迫后，1%屏山炒青、霍山黃芽、祁門紅茶組和2%霍山黃芽、龍井組可使GSH-Px活力顯著高于對照組；龍井(1%組)在脅迫前能夠顯著提高GR活力；脅迫后，多數(shù)1%組能顯著提高GR活力，2%組中，霍山黃芽和龍井組顯著高于對照組。結(jié)果表明：茶葉可提高GSH含量以及GSH-Px與GR活性，這種提高主要是在脅迫后體現(xiàn)出來，其中霍山黃芽、龍井和祁門紅茶的效果更為明顯；2種添加量中，1%添加量效果更為明顯。

斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)；茶葉；谷胱甘肽抗氧化

谷胱甘肽抗氧化體系是生物體抗氧化體系的重要組成部分，其主要指標(biāo)包括還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)等[1,2]。GSH是生物體內(nèi)重要的抗氧化劑，能夠清除活性氧自由基[3]。GSH-Px是清除過氧化氫和氫過氧化物的重要過氧化物酶，并且是肝胰腺中最敏感的抗氧化酶[4]。GR能將GSSG催化反應(yīng)成GSH[5]，GR通過保持較高的GSH/GSSG比率在維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的氧化還原水平中具有重要作用[6]。茶葉具有抗氧化的功能[7,8]，并且可作為添加劑應(yīng)用于飼料中[9]。但關(guān)于茶葉對魚類的谷胱甘肽抗氧化體系影響的研究目前還很缺乏。本研究以斑點(diǎn)叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)為對象，通過在日糧中按不同添加量分別添加6種不同品種的茶末，測定斑點(diǎn)叉尾鮰肝臟的GSH含量和GSH-Px、GR活性的變化，探討茶葉對斑點(diǎn)叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化體系指標(biāo)的影響，以期為茶葉在斑點(diǎn)叉尾鮰飼料中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚與飼料

試驗(yàn)魚購自安徽合肥市巢湖三珍養(yǎng)殖場，運(yùn)回后用2%食鹽水消毒。試驗(yàn)開始前，將試驗(yàn)魚在循環(huán)水水族箱內(nèi)暫養(yǎng)2周，以適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境和試驗(yàn)飼料。

暫養(yǎng)期間投喂基礎(chǔ)飼料，基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)需求參考NRC(2011)，其干物質(zhì)含量92.20%，粗蛋白含量35.20%，粗脂肪5.56%，灰分10.51%，能值17.52kJ/g；基礎(chǔ)配方為：白魚粉含量18.50%，豆粕40.00%，面粉28.50%，維生素C 0.11%，色拉油2.50%，維生素預(yù)混料0.39%，礦物鹽預(yù)混料1.50%，磷酸二氫鈣2.00%，氯化膽堿0.10%，α-淀粉4.00%，纖維素2.00%，甜菜堿0.40%。

試驗(yàn)設(shè)置1對照組，投喂基礎(chǔ)飼料；設(shè)置12個(gè)試驗(yàn)組，各試驗(yàn)組分別投喂由6種茶葉(祁門紅茶、黃山毛峰、屏山炒青、普洱、霍山黃芽和龍井茶)的加工下腳料碾磨成粉后分別按1%、2%的添加量加入基礎(chǔ)飼料中配制而得的飼料。試驗(yàn)所用飼料通過顆粒機(jī)制成直徑2mm顆粒，60℃烘干，過篩，4℃保存使用。

1.2 試驗(yàn)方法

養(yǎng)殖試驗(yàn)在循環(huán)水養(yǎng)魚系統(tǒng)中進(jìn)行。每種飼料設(shè)置3個(gè)重復(fù)，共使用39個(gè)水族箱，箱體尺寸為60cm×60cm×65cm(有效水體180L)，為灰色塑料制成。水源為曝氣自來水，使用沸石、活性炭凈化水體；真空泵提水，單個(gè)箱體循環(huán)水量為2.5L/min；羅茨鼓風(fēng)機(jī)間斷性充氧；自然水溫，變化范圍25.2～28.5℃；節(jié)能日光燈提供照明，光照時(shí)間8:30～20:00。選取體質(zhì)健康、規(guī)格一致的個(gè)體進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)開始前，將試驗(yàn)魚饑餓24h，然后隨機(jī)撈取稱重，每箱放入試驗(yàn)魚30尾，每尾平均初始體重為1.80～1.90g。試驗(yàn)持續(xù)8周，每天9:00和15:00各投適量飼料1次，1h后回收殘餌，70℃烘干。

1.3 指標(biāo)測定方法

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將魚饑餓24h，再從每箱中隨機(jī)撈取7尾，取內(nèi)臟團(tuán)，冰浴條件下分離肝胰臟，每條魚切取部分肝臟，等量混合，-70℃冰箱保存。取樣后將養(yǎng)殖箱水體高度從60cm降至10cm，充氧，擁擠脅迫3d，再從每箱隨機(jī)撈取7尾，并按上述操作進(jìn)行取樣。肝臟樣品谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)的測定參考南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒方法進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得描述性統(tǒng)計(jì)值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(Mean±SD)。采用單因素方差分析(ANOVA)后進(jìn)行組間差異的多重比較(Duncan’s procedure)，顯著性水平設(shè)置為α=0.05。脅迫前后比較用t檢驗(yàn)表示，顯著性水平設(shè)置為α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 對還原型谷胱甘肽(GSH)含量的影響

由表1可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，2種添加量的龍井組可顯著提高斑點(diǎn)叉尾鮰肝臟的GSH含量(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異或顯著低于對照組。脅迫后，除個(gè)別組外，2種添加量的各茶葉組GSH含量均高于對照組，其中一些組的差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。脅迫前，茶葉組的GSH略低于對照組但無顯著差異(P>0.05)；脅迫后，茶葉組GSH含量有明顯提高，其中1%組提高了21.33%，2%組提高了15.70%。

表1 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟GSH 含量的影響

注：*表示1%組與對照組差異顯著(P<0.05)，#表示2%組與對照組差異顯著(P<0.05)；XY不同表示同種茶葉的不同添加量之間有顯著差異。表2、表3同。

2.2 對谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性影響

由表2可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，除了2%黃山毛峰組，其余各茶葉組的GSH-Px活性均顯著低于對照組(P<0.05)。脅迫后，1%屏山炒青、霍山黃芽和祁門紅茶組與2%霍山黃芽和龍井組可使GSH-Px活性顯著高于對照組(P<0.05)。脅迫前，1%組的GSH-Px活性高于2%組，脅迫后與之相反，但均無顯著差異。

表2 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟GSH-Px活性的影響

2.3 對谷胱甘肽還原酶(GR)活性的影響

由表3可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí),1%龍井組GR活性顯著高于對照組(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異或顯著低于對照組。脅迫后，1%茶葉組多數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，2%組中，霍山黃芽和龍井組顯著高于對照組(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異。脅迫前，茶葉組的GR活性與對照組無顯著差異；脅迫后，茶葉組比對照組有所提高，1%組提高18.11%，2%組提高12.70%。

表3 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟GR活性的影響

3 討論

在生理?xiàng)l件下，谷胱甘肽主要以還原型(GSH)和氧化型(GSSG)2種形式存在,其中有活性的GSH約占90%[10]。本研究結(jié)果顯示，6種茶葉對GSH含量的提升作用主要表現(xiàn)在脅迫后，這可能是因?yàn)槊{迫導(dǎo)致活性氧自由基增加[11]，機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，GSH含量升高以清除大量產(chǎn)生的活性氧自由基。從添加量來看，1%添加量效果更好。類似的研究表明，羅非魚(Oreochromisniloticus)飼料添加 333mg/kg茶多酚比666mg/kg對提升魚體抗氧化能力更有幫助[12]；飼料中添加50～100mg/kg茶多酚可提高虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[13]抗氧化能力，但超過500mg/kg時(shí)未產(chǎn)生有益作用。這說明添加有一個(gè)適宜的量。

本研究結(jié)果顯示，茶葉導(dǎo)致魚體肝臟的GSH-Px活性顯著降低，在青魚(Mylopharyngodonpiceus)[14]和異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)[15]飼料中添加茶多酚，魚體血清與肝臟GSH-Px活性也分別有顯著下降。但本研究中，在脅迫后，部分茶葉組的GSH-Px活性獲得提高，而且這種變化趨勢與脅迫后GSH含量升高趨勢一致，由于GSH-Px能催化 GSH 變?yōu)?GSSG[16]，這種一致性的變化可能與脅迫造成的應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。本研究中，從添加量來看，1%組效果更為明顯。

GR能將GSSG催化反應(yīng)成GSH[5,6]。本研究中，茶葉對GR活力的提高也主要是表現(xiàn)在脅迫后，與GSH含量的變化趨勢基本一致，其中屏山炒青(1%組)、黃山毛峰(1%組)、普洱(1%組)和祁門紅茶(1%組)以及霍山黃芽(2%組)和龍井(2%組)等有顯著提高?？梢钥闯觯枞~種類對作用效果有顯著影響，這應(yīng)該與不同茶葉中有效成分不同有關(guān)[17,18]。

本研究結(jié)果表明，茶葉可提高GSH含量、GSH-Px活性和GR活性，這種提高主要是在脅迫后體現(xiàn)出來，其中霍山黃芽、龍井和祁門紅茶的效果更為明顯；2種添加量中，1%添加量效果更為明顯。

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2016-10-05

國際交流合作項(xiàng)目(2011DFG33280)。

岳鼎鼎(1993-)，男，碩士生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料。通信作者:楊嚴(yán)鷗，cdyyo@126.com。

S963;S965.128

A

1673-1409(2016)33-0032-05

[引著格式]岳鼎鼎，宛曉春，周裔彬，等.茶葉種類及添加量對斑點(diǎn)叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指標(biāo)的影響[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2016，13(33)：32～36.