陳玉濤，王五俊，張 鵬

上皮型鈣黏蛋白1及MutL同源基因1在甲狀腺癌中的表達及意義

陳玉濤1，王五俊1，張 鵬2

目的：探討上皮型鈣黏蛋白1(CDH1)及MutL同源基因1(MLH1)在甲狀腺癌中的表達及與臨床病理特征的關系。方法：分析手術治療且資料完整的61例甲狀腺癌患者的臨床資料，采用免疫組化法檢測甲狀腺癌組織及癌旁組織中CDH1及MLH1蛋白的表達情況，并與其臨床病理學資料進行比較。結果：CDH1和MLH1在甲狀腺癌組織、癌旁組織中的陽性率分別為40.98%(25/61)，81.97(50/61)和54.10(33/61)，86.89%(53/61)，CDH1及MLH1在癌組織中的表達率均顯著低于癌旁組織(P＜0.05)；甲狀腺癌組織中CDH1的陽性表達與淋巴結轉移及腫瘤分期有關(P＜0.05)，而MLH1的表達與淋巴結轉移有關(P＜0.05)。結論：CDH1和MLH1蛋白可能與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展有關，并可作為甲狀腺癌淋巴結轉移的標志物。

甲狀腺癌；上皮型鈣黏著蛋白1；MutL同源基因1；表達水平；臨床病理特征

臨床研究顯示，上皮型鈣黏著蛋白1(cadherin-1，CDH1)及MutL同源基因1(mutL homolog 1，MLH1)在多種人體實體腫瘤組織與正常組織中存在差異性表達，并與臨床病理特征和預后相關[1-2]。但關于CDH1及MLH1在人甲狀腺癌中的表達及其與臨床病理特征關系的研究報道較少。本研究采用免疫組織化學方法，對我院2010年1月—2015年9月手術切除的61例甲狀腺癌組織及癌旁組織中的CDH1及MLH1表達水平進行檢測，探討其與臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 病例來源 本組共61例，男21例，女40例；平均年齡（40±15）歲。組織病理明確診斷為甲狀腺癌，術前均未接受放化療及生物治療。臨床病理資料完整。

1.2 試劑與儀器 鼠抗人CDH1和MLH1單克隆抗體(購自美國Santcruz公司)。抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒(ChemMate EnVisionrM+/HRP/DAB Rb&Mo)購自基因科技(上海)有限公司，丹麥Dako公司分裝產(chǎn)品。石蠟切片機（德國徠卡公司），顯微鏡（日本奧利巴斯公司），電熱恒溫箱（上海榮珂檢測儀器有限公司），微波爐WHIRL POOL VIP202S (850W)。

1.3 免疫組化檢測 免疫組化染色步驟：（1）65℃溫度下烤片。（2）石蠟切片脫蠟。（3）抗原修復。（4）去除過氧化物酶。（5）滴加一定比例經(jīng)稀釋過的一抗，37℃條件下孵育1 h。（6）再使用蒸餾水沖洗2 min。（7）滴入試劑（Poly peroxidase anti-mouse/rabbit IgG），于37℃條件下孵育0.5 h。(8)DAB顯色。（9）脫水、封片鏡檢。

1.4 結果判斷 根據(jù)文獻[3]方法，分別計數(shù)10個高倍鏡視野下的陽性細胞(無0分；弱1分：中2分；強3分)和表達陽性率評分(＜5%0分；5%～l0%1分；10%～20%2分；20%～50%3分；＞50%4分)之和為該病例表達評分。將評分0～2分定為陰性病例，＞3分定為陽性病例。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗或者Fisher精確檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CDH1及MLH1在甲狀腺癌中的表達 CDH1主要定位于細胞膜，呈棕黃色顆粒(圖1A)。MLH1蛋白主要表達于細胞核，少量表達與細胞質(圖1C)。CDH1和MLH1在甲狀腺癌組織、癌旁組織中的陽性率分別為40.98%(25/61)，81.97(50/61)和54.10(33/61)，86.89%(53/61)，CDH1及MLH1在癌組織中的陽性表達率均顯著低于癌旁組織(P＜0.05)，見表1。

圖1 CDH1及MLH1在甲狀腺癌中的表達

表1 CDH1及MLH1在甲狀腺癌中的表達（n，%）

2.2 CDH1及MLH1表達與臨床病理特征之間的關系 甲狀腺癌組織中CDH1的陽性表達與淋巴結轉移及腫瘤分期有關(P＜0.05)，而MLH1的表達與患者的淋巴結轉移有關(P＜0.05)。見表2。

3 討論

甲狀腺癌是臨床上常見的頭頸部惡性腫瘤之一，發(fā)病雖只占甲狀腺結節(jié)的5%、全身腫瘤的1%，卻是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤[4]。近年來,其發(fā)病率有逐年上升趨勢。目前關于甲狀腺癌的發(fā)生機制并不十分清楚，大多數(shù)研究認為與患者的遺傳背景和后天環(huán)境因素有關。遺傳背景包括惡性腫瘤家族史、某些代謝酶基因多態(tài)性等[5]，后天因素主要與電離輻射[6]、碘的異常攝取等因素有關。甲狀腺癌早期患者可行手術治療，預后較好，術后5年生存率可達到90%以上，但晚期已發(fā)生淋巴結轉移患者預后較差。因此，探討甲狀腺癌的預后因素顯得尤為重要。

CDH1及MLH1在多種人實體腫瘤組織與正常組織中存在差異性表達，并與患者的臨床病理特征和預后相關。但關CDH1及MLH1在人甲狀腺癌中的表達及其與患者臨床病理特征關系的研究報道較少。上皮型鈣黏蛋白1(CDH1)在人類定位于16號染色體22帶1區(qū)，其編碼產(chǎn)物為一個分子量為124 000的跨膜糖蛋白，該蛋白是一種同親型結合、Ca依賴的細胞粘著糖蛋白，對胚胎發(fā)育的細胞識別、遷移和組織分化以及成體組織器官構成具有重要作用[7]。不同細胞及其發(fā)育不同的階段其表面的鈣黏蛋白的種類與數(shù)量均有所不同。同時上皮型鈣黏蛋白1還具有細胞黏附功能，能夠使細胞黏附并抑制腫瘤細胞脫落和轉移。臨床研究顯示[2,8]，在多種實體腫瘤組織中，上皮型鈣黏蛋白1的表達水平下調(diào)，并與患者的腫瘤惡性行為增強有關。Dass等[9]采用免疫組織化學方法檢測了腸癌組織中CDH1表達產(chǎn)物的水平，并與患者臨床病理特征進行比較，結果顯示，其低表達與腸癌的高轉移和預后較差有關。哈力木拉提·木爾扎提等[1]比較分析，CDH1陽性表達與陰性表達甲狀腺癌患者的臨床特征，發(fā)現(xiàn)陽性表達患者腫瘤分期較早。我們研究發(fā)現(xiàn)，CDH1的陽性表達與患者淋巴結轉移及腫瘤分期有關(P＜0.05)。CHD1早期(Ⅰ/Ⅱ)患者中，CDH1陽性比例為44.6%，而晚期(Ⅲ/Ⅳ)患者中CDH1陽性比例0。說明甲狀腺癌組織中CDH1的表達與患者腫瘤分期存在明顯的相關性。腫瘤分期越晚，其陽性表達率越低，因而提示CDH1可能在甲狀腺癌的進展中發(fā)揮重要作用，但其確切的調(diào)控甲狀腺癌細胞發(fā)生、發(fā)展等分子機制并不清楚。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，CDH1陽性表達與患者的淋巴結轉移存在相關性，陽性患者淋巴結轉移率低，而陰性患者淋巴結轉移率明顯升高。因此，提示CDH1可作為甲狀腺癌淋巴結轉移的生物學標志物，同時也提示CDH1可能參與了甲狀腺癌侵襲轉移的生物學過程，并有可能成為抑制甲狀腺癌轉移的分子靶點。

表2 CDH1及MLH1表達與臨床病理特征之間的關系比較

MLH1基因是錯配修復系統(tǒng)中的重要成員，位于3號染色體短臂21-23區(qū)，全長為58 kb[10-11]。目前大多數(shù)研究認為，MLH1基因與染色體錯配修復有關，當細胞分裂并開始進行DNA復制過程時，由于其堿基的錯配，可造成子代細胞基因的突變，從而可能導致抑癌基因的失活和癌基因的激活，從而引發(fā)腫瘤[12-13]。MLH1能夠對錯配的堿基進行切除并修復，及時校對錯誤復制的DNA，子代基因組的穩(wěn)定。因而，其表達確實可能與細胞的惡性轉化有關[14]。Rosty等[15]研究認為，MLH1在腸癌中的缺失表達與患者腫瘤的惡性行為增強有關。同時，Bianchi等[16]報道，采用小干擾RNA下調(diào)乳腺癌細胞中MLH1基因表達后，腫瘤細胞的增殖能力明顯增強，而凋亡明顯降低。但關于MLH1與甲狀腺癌相關性的研究報道較少。我們研究發(fā)現(xiàn)，MLH1的表達與患者的淋巴結轉移有關(P＜0.05)，陽性表達者淋巴結轉移率明顯低于陰性表達者。提示MLH1可能參與了甲狀腺癌細胞的侵襲與轉移過程，但具體分子機制目前并不十分清楚，同時也缺乏客觀的細胞實驗進行正式。因此，MLH1與甲狀腺癌淋巴結轉移的相關性有待進一步證實。

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（收稿：2016-03-26 修回：2016-07-20）

（責任編輯 張靜喆）

The Clinical Significance of CDH1 and MLH1 Expression in Thyroid Carcinomas

CHEN Yu-tao，WANG Wu-jun，ZHANG Peng Department of General Surgery,Tianjin Beichen Hospital,Tianjin(300400),Chi?na

Objective To investigate the CDH1 and MLH1 expression in thyroid carcinoma and their asso?ciation with the clincial pathological characteristics. Methods Sixty-one thyroid carcinomas that received sur?ger with complete clinical data were included in this study.The cancer tissue(n=61)and para-cancer tissue were examined for CDH1 and MLH1 expression by immunohistochemical method.The correlation between CDH1 and MLH1 expression in thyroid carcinomas and clincial pathology characteristics were evaluated. Results The positive rate of CDH1 in cancer tissue and para-cancer tissue were 40.98%(25/61)and 81.97% (50/61).But for MLH1,54.10%(33/61)in cancer tissues and 86.89%(53/61)in para-cancer tissues.CDH1 posi?tive expression in cancer tissue was correlated with lymph node metastasis(P＜0.05),clinical stage(P＜0.05), but MLH1 was not correlated with lymph node metastasis(P＞0.05). Conclusion CDH1 and MLH1 protein may be related to the occurrence and development of thyroid carcinoma,which can be used as a marker of lymph node metastasis of thyroid carcinoma.

Thyroid carcinoma;E-cadherin 1;mutL homolog 1;expression;clinical pathological character?istics

R736.1

A

1007-6948(2016)04-0328-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2016.04.005

1.天津市北辰醫(yī)院外科（天津 300400）

2.天津醫(yī)科大學總醫(yī)院普外科（天津 300070）

陳玉濤，E-mail:qwzui8051sie6@126.com