黃淑芳，王才益，卞慶松，應(yīng)志豪，于學(xué)偉，龔利洋，陳玎玎

(杭州市虎跑路 杭州動(dòng)物園，浙江杭州 310008)

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BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀應(yīng)用于部分野生動(dòng)物紅白細(xì)胞計(jì)數(shù)的探討

黃淑芳，王才益，卞慶松，應(yīng)志豪，于學(xué)偉，龔利洋，陳玎玎

(杭州市虎跑路 杭州動(dòng)物園，浙江杭州 310008)

野生動(dòng)物血細(xì)胞形態(tài)各異，大小差異較大，其血細(xì)胞計(jì)數(shù)最準(zhǔn)確的方法除傳統(tǒng)的手工計(jì)數(shù)外，市場(chǎng)上出現(xiàn)的獸用血細(xì)胞分析儀對(duì)其適應(yīng)性均在探索中。筆者通過(guò)杭州動(dòng)物園圈養(yǎng)的25種野生動(dòng)物73份血液樣本采用BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行血細(xì)胞分析，探索其合適的檢測(cè)通道。通過(guò)紅細(xì)胞大小、手工計(jì)數(shù)等參數(shù)的比較，初探出黇鹿、羊駝、馬鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用綿羊通道檢測(cè)結(jié)果較可靠，鬣羚、旋角羚羊采用山羊通道檢測(cè)結(jié)果較可靠，大象、黑猩猩、黑白疣猴、金絲猴、狼、赤大袋鼠采用猴通道檢測(cè)結(jié)果較理想，非洲獅、黑豹、金貓、小熊貓、南美海獅則采用貓通道檢測(cè)結(jié)果較好，東南亞虎、白虎、北方貉則采用狗通道檢測(cè)結(jié)果較可靠，白狐則采用豬通道檢測(cè)結(jié)果較理想。

血細(xì)胞計(jì)數(shù)；動(dòng)物檢測(cè)通道；野生動(dòng)物

1947年美國(guó)科學(xué)家?guī)鞝柼?W.H.Coulter)發(fā)明了用電阻法計(jì)數(shù)粒子的專利技術(shù)，1956年又將該技術(shù)應(yīng)用于血細(xì)胞計(jì)數(shù)獲得成功，其原理是根據(jù)血細(xì)胞非傳導(dǎo)性質(zhì)，以電解質(zhì)溶液中懸浮血細(xì)胞在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化進(jìn)行檢測(cè)為基礎(chǔ)，進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定，這種方法稱為電阻法或庫(kù)爾特原理[1]。

1962年，我國(guó)第一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在上海研制成功。在20世紀(jì)60年代未血細(xì)胞分析儀除可進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)外，還可同時(shí)測(cè)定HGB血紅蛋白；70年代，進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)；80年代，研究出白細(xì)胞分類(3分類及5分類)；90年代，則開(kāi)發(fā)出了對(duì)網(wǎng)狀紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的血細(xì)胞分析儀，同時(shí)5分類及幼稚細(xì)胞檢測(cè)也更成熟，并發(fā)展成為血細(xì)胞分析流水線，即計(jì)數(shù)、涂片染色和讀片一體化。

野生動(dòng)物疾病診斷的重要方式之一就是血液細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)。動(dòng)物發(fā)病時(shí)各種病理變化都會(huì)導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，體液，特別是血液，是內(nèi)環(huán)境的重要組成部分。臨床上通過(guò)測(cè)定血常規(guī)生理指標(biāo)可為疾病的診斷、治療和判斷預(yù)后提供參考。其中紅細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞大小、血紅蛋白含量測(cè)定,對(duì)各種貧血的鑒別診斷有著重要意義,是分析貧血性質(zhì)不可缺少的指標(biāo)之一。白細(xì)胞計(jì)數(shù)在指導(dǎo)動(dòng)物疾病診斷和治療中起著非常重要的作用。

野生動(dòng)物血細(xì)胞形態(tài)各異，大小差異較大，目前除了使用傳統(tǒng)的手工方式計(jì)數(shù)外，市面上也開(kāi)發(fā)了很多獸用血細(xì)胞分析儀。筆者通過(guò)杭州動(dòng)物園收集的25種野生動(dòng)物73份血液樣本采用BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行血細(xì)胞分析，探索其合適的檢測(cè)通道，現(xiàn)簡(jiǎn)介如下，供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，應(yīng)用阻抗法進(jìn)行紅白細(xì)胞計(jì)數(shù)，血紅蛋白濃度應(yīng)用比色法測(cè)量，體積計(jì)量由體積計(jì)量單元中的體積計(jì)量管和兩個(gè)光電傳感器測(cè)定。EDTA-K2抗凝管，載玻片，瑞氏-姬姆薩染色液(BaSO)，冰醋酸，10 g/L亞甲藍(lán)，微量管，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。

1.2 血液樣本 采自杭州動(dòng)物園圈養(yǎng)的25種野生動(dòng)物血液樣本共73份，其中黇鹿、羊駝各11份，小熊貓10份，馬鹿6份，梅花鹿4份，黑猩猩、非洲獅各3份，黑白猶猴、金絲猴、黑豹、狼、棕熊、黑熊、南美海獅各2份，毛冠鹿、黑麂、鬣羚、旋角羚羊、大象、金貓、東南亞虎、白虎、赤大袋鼠、北方貉、白狐各1份。

1.3 白細(xì)胞目視計(jì)數(shù) 采用稀醋酸將采集的野生動(dòng)物血液樣品稀釋并破壞紅細(xì)胞，混勻后，滴入計(jì)數(shù)盤(pán)中，顯微鏡下計(jì)數(shù)四個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)N，N/20，單位×109/L[1]。涂片厚度為8 μL血液涂成6 cm×2.5 cm，染色后用低倍鏡觀察血涂片的細(xì)胞分布情況，選擇體尾交界染色良好處，計(jì)數(shù)100～200個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行白細(xì)胞分類。手工計(jì)數(shù)方法每個(gè)血液樣本采血后均在2 h內(nèi)完成檢測(cè)，檢測(cè)環(huán)境溫度為25℃左右。

1.4 選擇檢測(cè)通道方法 根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞大小選擇相應(yīng)的動(dòng)物檢測(cè)通道進(jìn)行檢測(cè)。然后與手工計(jì)數(shù)的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，探索其合適的檢測(cè)通道。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同動(dòng)物細(xì)胞大小與檢測(cè)通道 通過(guò)探索發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞平均直徑在4.0(3～5)μm左右的采用山羊、綿羊通道，紅細(xì)胞平均直徑在5.0(4～7)μm左右的采用貓通道，紅細(xì)胞平均直徑在6.0(5～7)μm左右的采用狗通道，紅細(xì)胞平均直徑7.5(6～9)μm左右的采用猴通道，結(jié)果與手工檢測(cè)比較接近。測(cè)定的細(xì)胞大小與其他動(dòng)物園報(bào)道所測(cè)動(dòng)物血細(xì)胞大小結(jié)果相近[2]。

2.2 試驗(yàn)結(jié)果比較選擇檢測(cè)通道方法 詳見(jiàn)表1。

表1 不同野生動(dòng)物紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果

由表1結(jié)果比較，可初步看出食草動(dòng)物中黇鹿、羊駝、馬鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用綿羊通道檢測(cè)數(shù)值較準(zhǔn)確；鬣羚和旋角羚羊采用山羊通道檢測(cè)較好；大象細(xì)胞較大最好采用手工，采用猴通道檢測(cè)則可作為參考；黑猩猩、黑白疣猴、金絲猴、狼、赤大袋鼠則采用猴通道檢測(cè)數(shù)值比較可靠；非洲獅、黑豹、金貓、小熊貓、南美海獅則采用貓通道檢測(cè)數(shù)值較穩(wěn)定；東南亞虎、白虎則采用狗或貓通道檢測(cè)較好；棕熊、黑熊、北方貉采用狗通道檢測(cè)，白狐采用豬通道檢測(cè)較好。

3 小結(jié)與討論

3.1 BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀共有14個(gè)檢測(cè)通道，通過(guò)對(duì)73份野生動(dòng)物血液樣本分析可以得出其對(duì)部分動(dòng)物可以進(jìn)行準(zhǔn)確的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白測(cè)定。每個(gè)通道檢測(cè)的MCV都有一個(gè)范圍，在選擇不同檢測(cè)通道時(shí)，一般可結(jié)合紅細(xì)胞大小和動(dòng)物屬性確定，但由于形態(tài)上的差異，旋角羚羊采用綿羊通道，東南亞虎、白虎采用貓通道，其檢測(cè)結(jié)果均不理想。

3.2 細(xì)胞形態(tài)判斷，血細(xì)胞分析儀可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，在開(kāi)發(fā)非常完善的人類血細(xì)胞分析中都非常重視復(fù)檢的重要性[3-6]，涂片顯微鏡復(fù)檢不僅能彌補(bǔ)儀器對(duì)形態(tài)鑒別的不足，還能直觀評(píng)估和驗(yàn)證血細(xì)胞分析儀檢測(cè)結(jié)果的可行性。由于動(dòng)物血細(xì)胞形態(tài)各不相同，每個(gè)血液樣本都應(yīng)進(jìn)行血涂片，在顯微鏡下觀察，并進(jìn)行白細(xì)胞分類，觀察40*高倍鏡下白細(xì)胞數(shù)量及紅細(xì)胞形態(tài)。BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，理論上可實(shí)現(xiàn)狗、貓、馬、猴、奶牛等白細(xì)胞3分類，山羊、綿羊、豬、駱駝和水牛通道的白細(xì)胞分類則較為困難，應(yīng)采用手工分類。

3.3 BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀的精密度較好，即重復(fù)性較好，但為使結(jié)果準(zhǔn)確度較高應(yīng)每半年進(jìn)行一次室內(nèi)質(zhì)控。一般結(jié)果除山羊和駱駝通道外,其他結(jié)果均可作為參考。

3.4 采用BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)時(shí)能用全血檢測(cè)的情況下盡量采用全血模式進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)槭止げ裳^(guò)程會(huì)有個(gè)人誤差存在。采用預(yù)稀釋法時(shí)，稀釋液與血液融合的時(shí)間一定要達(dá)5 min，跟人類血細(xì)胞融合時(shí)間相同[7]，這樣結(jié)果比較可靠。注重儀器的保養(yǎng)，操作中應(yīng)按正確步驟進(jìn)行，可延長(zhǎng)儀器的壽命和維護(hù)周期[8-9]。定期對(duì)采樣針應(yīng)用專用浸泡液進(jìn)行浸泡，出現(xiàn)堵孔時(shí)一定要多次清洗通道，本底做出結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)后才可進(jìn)行下一個(gè)樣本的檢測(cè)。

3.5 本次試驗(yàn)25種動(dòng)物中，部分動(dòng)物血液樣本只有1～2份，因同種動(dòng)物血細(xì)胞有時(shí)會(huì)存在差異性，如黑白疣猴這次檢測(cè)用猴通道和狗通道檢測(cè)結(jié)果均差異不大，馬鹿采用馬和綿羊通道檢測(cè)紅細(xì)胞數(shù)量相近，但檢測(cè)的白細(xì)胞數(shù)量差異較大，這些動(dòng)物的檢測(cè)通道尚需進(jìn)一步探討分析，以探索其最適檢測(cè)通道。

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2016-08-16

S864.1

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