姬妍茹，楊慶麗，董艷，張正海，劉宇峰

（黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶 163319）

復(fù)配植物源殺菌劑對7種植物病原真菌離體抑制效果研究

姬妍茹，楊慶麗，董艷，張正海，劉宇峰

（黑龍江省科學(xué)院大慶分院，黑龍江大慶 163319）

試驗本著盡量擴大抑菌譜且成本低廉的原則，將初篩得到的離體抑菌效果顯著的植物提取物進行不同組合，設(shè)計出3種復(fù)配植物源殺菌劑配方。利用配方對小麥赤霉病菌等7種主要植物病原真菌進行離體抑菌效果測試，結(jié)果表明，配方1和2均表現(xiàn)出較好的抑制效果，尤其以配方1效果更佳，除對茄腐病菌的離體抑制率略低（53.96%）外，對水稻紋枯病菌等6種參試病原真菌的體外生長抑菌率均高于65%，與對照化學(xué)殺菌劑福美雙相比差異極其顯著。

植物源提取物；復(fù)配；植物病原真菌；離體抑制活性

近年來，隨著人們環(huán)保意識的增強，對食品安全性的要求越來越高，化學(xué)殺菌劑的使用逐漸被禁止和限制，植物源殺菌劑因為具有材料取自天然，能夠較好地降解，無殘留、無公害、不易產(chǎn)生抗藥性的特點［1］，越來越受到科研人員和農(nóng)戶的重視，因此有關(guān)植物源殺菌劑的研究已成為殺菌農(nóng)藥領(lǐng)域的研究熱點之一。

與植物源殺蟲劑相比，植物源殺菌劑的研究相對薄弱，在中國登記的品種較少。2003——2009年國內(nèi)只有14個單劑和9個混配制劑獲得登記［2］。目前市場上推廣的植物源殺菌劑多為仿生合成，主要代表有中國自產(chǎn)的以乙蒜素為主要成分的殺菌劑402［1］，孟昭禮等［3］研發(fā)的農(nóng)用殺菌劑“綠帝”和“銀泰”，德國巴斯夫公司研制的烯酰嗎啉和劉長令［4］在此基礎(chǔ)上研制的氟嗎啉等。盡管國內(nèi)已有自主研制的植物源殺菌劑得到推廣使用，但商品化的品種仍然很少，與發(fā)達國家相比，這方面的研究仍然很弱，急需加大研究和開發(fā)力度，研制出高效、有市場競爭力的新品種，以滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需求。

本試驗在以往試驗［5］基礎(chǔ)上，將篩選得到的高效抑菌植物的提取物進行復(fù)配組合成不同的配方，并且采用小麥赤霉病菌等常見植物病原真菌進行抑菌效果比較，確定最佳抑菌配方，為進一步開發(fā)新型植物源殺菌劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試真菌

a.水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani kuhn)，b.小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)，c.腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)，d.馬鈴薯早疫病菌(Alternaria solani sorauer)，e.茄腐病菌（Fusarium solani），f.玉米圓斑病菌(Bipolaris carbonum wilson)，g.小麥根腐病菌（Bipolaris sorokiniana(sacc.)shoem）以上病原真菌由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命院提供。

1.1.2 供試植物及試劑

野生植物從大慶市郊采集，中草藥購于大慶市新村福瑞邦藥房。經(jīng)40℃干燥箱烘干，高速粉碎機粉碎，然后過20目篩，常溫備用。

試驗過程中所使用的化學(xué)試劑均采用分析純。

1.2 配方設(shè)計

復(fù)配配方設(shè)計首選初篩試驗［5］中抑菌效果顯著而且提取率相對較高的植物，同時將原材料容易獲得且盡量降低成本作為選擇原則。

配方1：扁蓄、黃芩、龍葵莖葉（帶青果）、龍膽、蒼術(shù)、白鮮皮、菊芋莖葉、甘草、反枝莧、蒼耳全株（帶果實）（2.4∶1.0∶2.3∶1.0∶1.5∶3.8∶4.5∶0.5∶4.3∶5.0）。

配方2：龍葵、龍膽、菊芋、甘草、黃芩、蒼術(shù)、扁蓄（2.3∶1.0∶4.5∶0.5∶1.0∶1.5∶2.4）。

配方3：蒼耳、龍膽、菊芋、龍葵、黃芩、白鮮皮（5.0∶1.0∶4.5∶2.3∶1.0∶3.8）。

1.3 試驗方法

1.3.1 植物樣品的提取

將植物材料晾曬干制后分別用高速粉碎機粉碎，過40目篩得各成分粉末，然后分別按上述配方比例充分混勻，加入5倍的80%乙醇水溶液冷浸8h，然后在55℃左右、功率150W條件下，超聲30min，過濾獲得濾液。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在40℃，130r/min條件下蒸發(fā)至膏狀物占乙醇溶液體積約為5%～10%時，常溫條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 抑菌活性的離體測定

采用生長速率法測定野生植物提取物對供試病原菌菌絲生長的抑制作用［6］。試驗采用PDA培養(yǎng)基，按粗提混合物170～175g/L的量加入滅菌后的培養(yǎng)基中，每個處理配方設(shè)3次重復(fù)。在培養(yǎng)基中央接種病原菌菌疊，菌疊直徑0.6cm，置于28℃恒溫培養(yǎng)，經(jīng)常觀察菌絲生長情況，待對照長滿平皿后測量菌落直徑，計算不同配方殺菌劑對病原菌的生長抑制率。

計算公式如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 三種配方對水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、腐霉枯萎病菌和茄腐病菌離體抑制效果比較

表不同配方植物源殺菌劑對7種病原真菌離體抑制結(jié)果Tab Inhibition effects of different formula botanical fungicides on 7 pathogenic fungus in vitro

從表1可以看出，3個配方對水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、腐霉枯萎病菌的體外生長抑菌率均為100%，分別高出化學(xué)殺菌劑福美雙66.04%、71.08%和66.52%，差異極顯著（p＜0.01）。配方3對小麥赤霉病菌的體外生長抑菌率為96.81%，高出化學(xué)殺菌劑福美雙67.89%，差異極顯著（p＜0.01）。對于茄腐病菌而言，這3種配方的抑制效果雖然均沒有達到60%，但是與化學(xué)藥劑福美雙相比，抑制效果差異仍在25%以上，差異極顯著（p＜0.01），其中配方1對茄腐病菌的抑制率最高，僅為53.96%。

2.2 三種配方對茄腐病菌和小麥根腐病菌離體抑制效果比較分析

從表1可以看出，3種配方對茄腐病菌的體外生長抑菌率均低于55%，但是與化學(xué)殺菌劑福美雙的抑菌率相比（分別高出50.65%、39.97%和24.87%），差異極顯著（p＜0.01）。配方1的抑菌效果最高，為53.96%；配方2次之，為43.28%；配方3最差，僅為28.18%。3種配方對小麥根腐病菌均有不同程度的抑菌作用，配方1和配方2對小麥根腐病菌的抑菌率均在75%以上，配方1的抑菌率最高為80.0%；配方2次之，為76.38%（較高）；配方3的抑制率在30%以下（較差）而福美雙對小麥根腐病菌沒有抑制作用。

3 結(jié)論

本試驗共設(shè)計3個復(fù)配植物源殺菌劑配方，并對茄腐病菌、水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌、玉米圓斑病菌、馬鈴薯早疫病菌、腐霉枯萎病菌7種致病植物病原真菌的離體抑制活性進行了研究，結(jié)果顯示3種配方對水稻紋枯病菌、小麥赤霉病菌和腐霉枯萎病菌均有極其顯著的抑菌活性。配方1和配方2對這7種病原菌均有很好的抑制作用，尤其是配方1效果更好，下一步擬以配方1為基礎(chǔ)進行劑型研究試驗，并通過盆栽和田間試驗來驗證新型植物源殺菌劑的抑菌效果。

圖不同配方植物源殺菌劑對7種植物病原真菌離體抑制效果比較Fig Inhibition effects of different formula botanical fungicides on 7 pathogenic fungus in vitro

［1］趙善歡.植物化學(xué)保護［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：317-320.

［2］袁高慶，黎起秦，王靜，等.植物源殺菌劑研究進展Ⅱ：活性測定、活性物質(zhì)及其應(yīng)用［J］.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（2）：136-140.

［3］孟昭禮，袁忠林，曲寶涵.人工模擬殺菌劑綠帝對4種植物病害的藥效試驗［J］.農(nóng)藥，1999，38（5）：24-26.

［4］劉長令.源于天然產(chǎn)物的農(nóng)藥品種［J］.精細與專用化學(xué)品，2004，12（6）：1-5.

［5］姬妍茹，楊慶麗，王瑩瑩，等.龍葵等19種植物提取物的離體抑菌活性研究［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2014，30（25）：303-307.

［6］劉國坤，陳啟建，吳祖建，等.幾種植物提取物對4種植物病原真菌的抑制作用［J］.福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，33（3）：295-299.

Inhibitory Effect of Botanical Multi-formula Fungicides to 7 Plant Pathogenic Fungus

JI Yan-ru,YANG Qing-li,DONG Yan,ZHANG Zhen-hai,LIU Yu-Feng
（Daqing Branch of Heilongjiang Academy of Science,Daqing Heilongjiang 163319)

According to the principle of cost effective and broaden antifungal spectrum,plant extracts with high antibacterial effect were combined to 3 type of botanical fungicide in the study.Fusarium graminearum and other 7plant pathogenic fungus were treated by botanical fungicides. Result shows that formula 1 and 2 have higher inhibitory effect than other formulas.Inhibition rate of formula 1 to all plant pathogenic fungus was over 65%but to Fusarium solani(53.96%),and obviously higher than control of chemical fungicide thiram.

000

S435

A

1674-8646（2016）01-0008-02

2015-09-27

大慶市指導(dǎo)性科技計劃（sdz-2011-45）

姬妍茹（1971-），女，黑龍江大慶人，碩士，副研究員，從事生物技術(shù)研究。