劉保光　王國強　宋博利

隨著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展，獸醫(yī)臨床大量使用抗菌藥物，使得細菌耐藥和獸藥殘留問題日趨嚴重。鑒于此，筆者主要對動物源革蘭陰性細菌耐藥性的產(chǎn)生、耐藥表型、基因檢測及藥敏試驗應用要求進行了探討，以供參考。

一、革蘭陰性細菌耐藥性的產(chǎn)生

細菌耐藥性是指病原微生物對抗菌藥物的抗性，大多是由質(zhì)粒及其它遺傳物質(zhì)攜帶外來DNA或基因突變導致的。隨著抗菌藥物在獸醫(yī)臨床的應用，革蘭陰性細菌耐藥問題日趨嚴重，其中以大腸桿菌、沙門菌、綠膿桿菌及肺炎克雷伯菌最易產(chǎn)生耐藥性。

二、革蘭陰性細菌耐藥表型檢測

判斷細菌對抗菌藥物的耐藥性可根據(jù)臨床實驗室標準協(xié)會（CLSI）標準，通過藥物紙片法測量抑菌圈直徑、微量肉湯稀釋法計算MIC值大小來判斷。

1.藥物紙片法

在普通瓊脂平板表面均勻涂抹待檢細菌，用鑷子將藥敏紙片貼于平板表面，37℃過夜培養(yǎng)，用游標卡尺測量藥敏紙片的抑菌圈直徑，并記錄結(jié)果。

2.微量肉湯稀釋法

按劉保光等報道的微量肉湯稀釋法，進行操作。

三、革蘭陰性細菌主要耐藥基因檢測

1.β-內(nèi)酰胺酶及AmpC酶耐藥基因

隨著β-內(nèi)酰胺類藥物在獸醫(yī)臨床的大量使用，產(chǎn)生了β-內(nèi)酰胺酶，其基因有blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaOXA和AmpC酶blaACC、blaCIT、blaDHA、blaEBC、blaFOX、blaMOX等。據(jù)有關(guān)報道[6-7]，在動物源多種細菌檢出過該類基因。

2.質(zhì)粒介導氟喹諾酮類耐藥基因

隨著氟喹諾酮類藥物在獸醫(yī)臨床的大量使用，產(chǎn)生了質(zhì)粒介導的氟喹諾酮類耐藥基因，包含有oqxAB、qm-A、qm-B、qnrC、qmD、qmS、ace（6）-lb-cr、qepA等。

3.氨基糖苷類（16S甲基化酶）耐藥基因

隨著氨基糖苷類藥物在獸醫(yī)臨床的大量使用，對氨基糖苷類藥物耐藥的基因包含有arrnA、npmA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE等。

4.西環(huán)素類耐藥基因

隨著四環(huán)素類藥物在獸醫(yī)臨床的大量使用，對四環(huán)素類藥物耐藥的基因包含tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、terM。

5.磺胺類耐藥基因

隨著磺胺類藥物在獸醫(yī)臨床的大量使用，對磺胺類藥物耐藥的基因包含sul1、sul2、sul3、dfrA1、dfrA5、dfrA12、dfrA17。

6.多重耐藥基因cfr

隨著獸用藥物的廣泛應用，多重耐藥基因cfr被報道。

四、藥敏應用體會

作為獸醫(yī)工作者，能結(jié)合本地區(qū)進行藥敏試驗的操作，現(xiàn)總結(jié)幾點要求，以供參考。

1.要按要求及標準操作

紙片擴散法、微量肉湯稀釋法必須按標準要求操作，如培養(yǎng)基選擇、藥物濃度、培養(yǎng)時間、菌液接種量、結(jié)果判定標準等，應該按照CLSI頒布標準執(zhí)行。此外，嚴格無菌操作。

2.要合理選擇藥物

首先，按照CLSI要求選擇藥物種類、代表藥物，如氨基糖苷類應選新霉素及慶大霉素，頭孢菌素類應選動物專用三代頭孢。其次，要選擇提示藥物，如大腸桿菌對頭孢曲松、頭孢他啶耐藥提示會產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。

五、結(jié)語

總之，針對目前動物源革蘭陰性細菌耐藥嚴重問題，加強對獸醫(yī)臨床細菌耐藥表型、耐藥基因檢測及藥敏試驗應用要求顯得至關(guān)重要。本文對之進行探討，旨在對獸醫(yī)工作者合理選用藥物及應用藥敏試驗具有重要意義。