于鴿

摘要：本文從自然環(huán)境中分離，篩選了一株致病溶藻弧菌和它的噬菌體。測定了不同pH值和鹽度對噬菌體的裂解活性的影響，實驗結(jié)果表明：噬菌體的最適pH為8.0，太酸或者太堿的環(huán)境都不適合噬菌體的生存；在鹽度為25%。的情況下，對溶藻弧菌的裂解能力最強，這可能是因為這株噬菌體是在海水環(huán)境下分離出來的有關(guān)，所以對于高鹽度的耐受性比較好。

關(guān)鍵詞：溶藻弧菌；噬菌體；pH；鹽度

近年來，隨著科學技術(shù)和研究方法的不斷發(fā)展，人們對噬菌體在海洋生態(tài)環(huán)境中作用的研究越來越深入，并取得了一系列可喜的進展[1，2，3]。分離和研究海洋環(huán)境中的噬菌體，有助于了解噬菌體在海洋環(huán)境中的生態(tài)學和遺傳學作用，同時可為監(jiān)控海洋環(huán)境中海洋生物病菌快速檢定及防治方法建立提供可靠理論依據(jù)。

噬菌體有其他病毒的一些共同特性，如個體微小、可通過除菌濾器，沒有細胞結(jié)構(gòu)、只有一種核酸等外，每種噬菌體又有其獨特的一些特性，如宿主特異性、核酸性質(zhì)、生長和裂菌特性等。我們研究pH值和鹽度對噬菌體的裂解活性的影響，這些研究數(shù)據(jù)將為進一步將噬菌體裂解技術(shù)用于生產(chǎn)實踐中溶藻弧菌的滅活研究奠定了基礎(chǔ)。

一、材料

1.菌種

溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）：由蝦塘排污渠水體中分離獲得。

2.噬菌體

溶藻弧菌噬菌體。濃度為1010pfu/mL。本文分離于南三島蝦塘排污渠水體中。

3.培養(yǎng)基及藥品、試劑

下層固體瓊脂；上層半固體瓊脂；蛋白胨水等。

4.主要實驗儀器

恒溫培養(yǎng)箱，鹽度計，震蕩器，高速離心機，超凈工作臺，手提式高壓滅菌鍋，數(shù)顯恒溫水浴鍋，ORION710型精密pH計等。

二、方法

1.不同pH值下噬菌體的裂解活性

參照文獻[4，6，5]的方法，將pH值分別為3，4，5，6，7，8，9，10，11，12的蛋白胨水溶液4.5mL加入口徑一致的試管中，放在25℃，當溫度平衡后加入0.5mL效價為104～105pfu/mL的噬菌體液，放在25℃計時處理一小時后，用pH7.0的蛋白胨水稀釋，取0.1mL用雙平板法，做噬菌體記數(shù)，同時做三個平板，以做對照。培養(yǎng)12-18小時后觀察記數(shù)噬菌斑。

2.鹽度對裂解率的影響

凡納濱對蝦可在1‰—36‰的鹽度范圍內(nèi)存活、生長。因此我們配制鹽度分別為0、5、10、15、20、25、30、35‰的蛋白胨上層和下層培養(yǎng)基，然后取103pfu/mL的噬菌體液做雙層平板，然后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～18小時，觀察出斑情況。

三、結(jié)果

1.不同pH值下噬菌體的裂解活性

此實驗結(jié)果表明該噬菌體感染宿主的最適pH為8.0，pH小于4.0或大于11.0則很少吸附。說明太酸或者太堿都不適合噬菌體的生存。

2.鹽度對裂解率的影響

由實驗結(jié)果看出：鹽度對溶藻弧菌噬菌體的裂解率有明顯的影響，在鹽度為25‰的情況下裂解率最高。噬菌體在鹽度為35‰的情況下裂解率依然很高，這可能是因為這株噬菌體是在海水環(huán)境下分離出來的有關(guān)，所以對于高鹽度的耐受性比較好，而對于低鹽度的耐受性比較差。

四、討論

本實驗測得溶藻弧菌噬菌體對pH值的適應范圍較寬。我們知道噬菌體侵染的第一步是吸附，即噬菌體附著在宿主表面.吸附分為兩個階段，第一階段是非特異的靜電吸附，第二階段是受體與配體的特異性結(jié)合階段，酸堿度對噬菌體的存活及吸附效率產(chǎn)生影響的原因在于pH的變化導致細菌與噬菌體表面上吸附位點或受體的電荷發(fā)生變化，從而影響了二者之間的靜電作用效果。靜電吸附在噬菌體吸附的第一階段（即可逆的非特異性吸附階段）起著至關(guān)重要的作用，因此pH的變化必然會影響噬菌體的吸附效率，進而影響了它的侵染活性。在遠離最適pH的條件下，噬菌體的吸附效率愈來愈低。由于酸堿對噬菌體的滅活作用是瞬間的、不可逆的，因此被酸堿處理過的噬菌體，其吸附能力大大降低或消失了，結(jié)果使其感染活性也就大大降低。不同噬菌體吸附不同寄主時，它的最適的吸附pH是不同的。