孫朋輝，呂利群

( 上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306 )

硫酸新霉素控制腸型嗜水氣單胞菌性草魚腸炎病的給藥方案

孫朋輝，呂利群

( 上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306 )

水溫(25 ± 2) ℃時，給體質(zhì)量150～200 g的草魚分別口灌4種劑量(10、20、30、40 mg/kg)的硫酸新霉素，采用柱前衍生化高效液相色譜法測定血液、腸道和肌肉內(nèi)的實時藥物質(zhì)量濃度，結(jié)合硫酸新霉素對腸型嗜水氣單胞菌的體外藥效學(xué)和草魚單次口灌不同劑量的硫酸新霉素的體內(nèi)藥代動力學(xué)以及硫酸新霉素在腸道內(nèi)的代謝規(guī)律進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，硫酸新霉素對腸型嗜水氣單胞菌的最小抑菌質(zhì)量濃度為6 μg/mL，抗菌后效應(yīng)為1 h；按不同劑量口灌草魚后，草魚腸道內(nèi)0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度分別為52.467、72.963、109.907、136.489；腸道內(nèi)藥物的最大質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度分別為10.93、15.24、23.20、28.98；口灌劑量為40 mg/kg的硫酸新霉素時，血藥質(zhì)量濃度達(dá)峰時間為2 h，達(dá)峰質(zhì)量濃度為3.833 μg/mL。綜合腸道0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度和腸道達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度2個指標(biāo)，確定硫酸新霉素對由腸型嗜水氣單胞菌引起的草魚腸炎病的給藥方案為：每日給藥1次，每次40 mg/kg，連續(xù)給藥3～5 d，休藥期為8 d。

硫酸新霉素；草魚；嗜水氣單胞菌；藥代動力學(xué)；藥效學(xué)

嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)為革蘭氏陰性菌，是水產(chǎn)動物的常見致病菌之一，能夠產(chǎn)生很強的外毒素，通過感染水產(chǎn)動物腸道致病，如草魚(Ctenopharyngodonidellus)的腸炎病[1]；感染鯉科魚類腸道并在腸道內(nèi)大量增殖引起出血病，導(dǎo)致大批死亡[2-3]。

目前國內(nèi)對于水產(chǎn)動物細(xì)菌性疾病主要以抗生素及中草藥對其進(jìn)行治療。硫酸新霉素是一種廣泛使用的氨基糖苷類抗生素，對革蘭氏陰性菌有良好的抑制作用，主要用于治療細(xì)菌性腸炎[4-5]。有研究表明，嗜水氣單胞菌對硫酸新霉素具有高度敏感性[1]，因此本試驗采用硫酸新霉素對由腸型嗜水氣單胞菌引起的草魚腸炎病進(jìn)行用藥方案研究。該藥在水產(chǎn)動物上的應(yīng)用有少量報道，其中大部分都是關(guān)于硫酸新霉素在水產(chǎn)動物體內(nèi)藥代動力學(xué)研究[6-7]，關(guān)于硫酸新霉素對水產(chǎn)疾病的用藥方案尚未見報道。

水產(chǎn)藥物的使用方面大部分是參考藥物在機體藥代動學(xué)，依據(jù)藥物質(zhì)量濃度高于最小抑菌質(zhì)量濃度的時間給出用藥方案[8-9]，未參考藥代藥效聯(lián)合參數(shù)，缺乏科學(xué)性。藥代學(xué)參數(shù)24 h用藥曲線面積(與細(xì)菌清除率有良好相關(guān)性)、最大藥物質(zhì)量濃度(與細(xì)菌清除率和預(yù)防耐藥性的產(chǎn)生成相關(guān)性)?？股赜址譃槿箢悾嘿|(zhì)量濃度依賴性、時間依賴性、質(zhì)量濃度—時間依賴性。質(zhì)量濃度依賴性藥物用于評價其殺菌作用的藥代藥效參數(shù)主要有最大藥質(zhì)量物濃度與最小抑菌質(zhì)量濃度的比值；藥—時曲線下面積與最小抑菌質(zhì)量濃度的比值，例如，氨基糖苷類藥物0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度>125、達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度>8時不僅起效快，且能有效地殺滅細(xì)菌和抑制耐藥菌株產(chǎn)生，臨床有效率可大于90%；時間依賴性藥，評價該類藥物殺菌作用的藥代藥效參數(shù)主要有血藥質(zhì)量濃度大于最小抑菌質(zhì)量濃度的時間和最小抑菌質(zhì)量濃度值以上的用藥曲線面積部分[10]。因此僅參考藥物在機體藥代動學(xué)的藥物質(zhì)量濃度高于最小抑菌質(zhì)量濃度的時間給出用藥方案不夠準(zhǔn)確。

硫酸新霉素屬于濃度依賴性抗生素，評價其殺菌作用的藥代藥效參數(shù)主要是達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度、0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度；本文結(jié)合這兩個指標(biāo)進(jìn)行了硫酸新霉素對嗜水氣單胞菌相關(guān)體外藥效學(xué)及硫酸新霉素在草魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)和腸道藥物代謝規(guī)律研究，為治療草魚腸炎病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗魚

健康草魚200尾，體質(zhì)量(150～200) g，購于上海浦東新區(qū)果園養(yǎng)殖場，暫養(yǎng)于水族箱內(nèi)，水溫(25 ± 2) ℃，停食兩周。

腸型嗜水氣單胞菌，來源于國家水生動物病原庫(上海)，自患病草魚體內(nèi)分離純化。

1.1.2 藥品和試劑

硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98.0%)，購于生工生物工程(上海)股份有限公司；硫酸新霉素原料藥(純度≥95.5%)，購于生工生物工程(上海)股份有限公司；肉湯培養(yǎng)基，購于上海杉君醫(yī)藥科技有限公司；甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、氯甲酸芴甲酯(分析純)、甘氨酸(分析純)、三氟乙酸(分析純)、磷酸二氫鈉(分析純)均購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.1.3 試驗儀器

LC-100高效液相色譜儀(上海伍豐科學(xué)儀器有限公司)；高壓滅菌鍋(杭州艾普儀器設(shè)備有限公司)；漩渦震蕩器(無錫安耐斯電子科技有限公司)；高速離心機；超純水儀等。

1.2 方法

1.2.1 最小抑菌質(zhì)量濃度的測定

采用試管兩倍稀釋法[11]，嗜水氣單胞菌懸液密度為106cfu/mL，混合后放置30 ℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)24 h，目測將未發(fā)生渾濁的試管的最低藥物質(zhì)量濃度作為最小抑菌質(zhì)量濃度。重復(fù)5次，取平均值為最小抑菌質(zhì)量濃度。

1.2.2 抗菌后效應(yīng)的測定

[12]的方法，配制質(zhì)量濃度為60、120、240 μg/mL的硫酸新霉素溶液，吸取不同質(zhì)量濃度的藥液200 μL分別加入到3支含有1.8 mL、密度為106～108cfu/mL嗜水氣單胞菌懸液的15 mL的塑料離心管中，作為試驗組T1、T2、T3；分別吸取無菌生理鹽水200 μL加入2支含有1.8 mL、密度為106～108cfu/mL嗜水氣單胞菌懸液15 mL的塑料離心管中，作為對照組C1、C2；將T1、T2、T3、C1、C2放置于30 ℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)1～2 h。采用400倍除藥法，自T1、T2、T3、C1、C2中吸取菌液100 μL，分別加入5支含1.9 mL液體培養(yǎng)基的15 mL塑料離心管中，渦旋30 s，同樣方法再稀釋一次。在C2中加入一定量的硫酸新霉素，使其質(zhì)量濃度為0.06 μg/mL，作為藥殘產(chǎn)生的抗菌后效應(yīng)。將T1、T2、T3、C1、C2置于30 ℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)，此時為測定抗菌后效應(yīng)的零時。于0、1、2、3、4、5、6 h進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)，繪制出細(xì)菌的恢復(fù)生長曲線，按公式抗菌后效應(yīng)/h=T-C1計算(T和C1分別表示試驗組與對照組單位體積中的活菌個數(shù)增長1 lg的時間)。

1.2.3 給藥及樣品采集

將44尾體質(zhì)量相同的草魚分成4組；配制10、20、30、40 mg/kg劑量的試驗藥物分別口灌入4組草魚前腸。灌后將魚身體朝上直立片刻，無回吐藥物的魚用于試驗。在給藥0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24 h時自尾靜脈取血1.5 mL，加入100 μL 2%的草酸鉀溶液(抗凝劑)混勻[13]；分別取少量背部肌肉、整條腸道置于不同的15 mL塑料離心管中，置于-20 ℃冰箱中。各個時間點取5個平行樣品，同時取對照組組織、血液作為對照。

1.2.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取勻漿肌肉、腸道各1.0 g、血漿1 mL，移至不同的50 mL離心管，分別加入20 mL提取液 (pH 6.5的磷酸鹽緩沖液+ 5%三氟乙酸；體積比1∶1)， 水平搖床室溫振蕩12 h ，8500 r/min離心10 min，取上清液，上清液中加入2 mL (0.2 mol/L)三氟乙酸水溶液，渦旋5 min，過0.22 μm有機濾膜，待衍生化[7]。

1.2.5 色譜條件

LC-100高效液相色譜儀，C18色譜柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(95∶5，體積比)，流速0.8 mL/min，柱溫25 ℃，紫外檢測波長265 nm，進(jìn)樣量20 μL[14]。

1.2.6 柱前衍生

取硫酸新霉素溶液1 mL，加入乙腈1 mL，加入硼砂溶液(pH=8.0，0.2 mol/L)1 mL，加氯甲酸芴甲酯溶液(8 mmol/L乙腈溶液)1 mL，旋渦混勻30 s，置于暗處反應(yīng)20 min，加甘氨酸(0.1 mol/L)200 μL，終止反應(yīng)，旋渦30 s，10 000 r/min離心3 min，取上清液，0.22 μm有機濾膜過濾，進(jìn)樣20 μL[14]。

1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

配制10 mg/mL的硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，臨用時將標(biāo)準(zhǔn)液用超純水分別稀釋成質(zhì)量濃度為200、100、50、10、5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，經(jīng)0.22 μm有機濾膜過濾后，進(jìn)行柱前衍生，然后通過高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。以色譜面積為縱坐標(biāo)(y)，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)做回歸方程[15]。

1.2.8 回收率

分別取硫酸新霉素質(zhì)量濃度為200、100、50 μg/mL溶液各1 mL，分別加入到1 g空白草魚腸道、肌肉勻漿、1 mL血漿中，渦旋5 min靜置6 h；使混合物的理論質(zhì)量濃度分別為100、50、25 μg /mL，按照1.2.4處理，然后進(jìn)行柱前衍生，高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，重復(fù)3次，以平均值為實際質(zhì)量濃度。求得實際質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度之比即為回收率。將同一樣品在不同時間點進(jìn)樣檢測，計算腸道、肌肉、血漿內(nèi)藥物的日內(nèi)、日間的變異系數(shù)[16]。

1.2.9 數(shù)據(jù)處理

將LC-100高效液相色譜儀測出的數(shù)據(jù)用Excel 繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線及實時藥物—質(zhì)量濃度曲線，應(yīng)用 Kinetic 4.4 藥代動力學(xué)軟件，計算藥代動力參數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 硫酸新霉素對嗜水氣單胞菌體外藥效學(xué)研究

經(jīng)測定硫酸新霉素對嗜水氣單胞菌的最小抑菌質(zhì)量濃度為6 μg/mL。

2.2 硫酸新霉素對嗜水氣單胞菌的抗菌后效應(yīng)

以1倍最小抑菌質(zhì)量濃度、2倍最小抑菌質(zhì)量濃度、4倍最小抑菌質(zhì)量濃度的硫酸新霉素溶液與嗜水氣單胞菌接觸1 h后，去除藥物后細(xì)菌的生長曲線見圖1。對照組C1與藥殘組C2中的細(xì)菌生長基本一致，表明400倍稀釋可以去除藥物，試驗各管中的細(xì)菌生長抑制因抗菌后效應(yīng)所致，非殘留藥物的作用。抗菌后效應(yīng)分別為0.284 ± 0.169、0.44 ± 0.25、1.15 ± 0.55。試驗表明硫酸新霉素質(zhì)量濃度對抗菌后效應(yīng)有一定的影響，在一定范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的升高，抗菌后效應(yīng)逐漸升高，在制定給藥間隔時抗菌后效應(yīng)可以延長約1 h。

圖1 嗜水氣單胞菌與硫酸新霉素接觸1 h后，去除藥物后細(xì)菌的生長曲線

2.3 硫酸新霉素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

以硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，以硫酸新霉素的色譜面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(圖2)。線性回歸方程為y=6.043x+0.321(r=0.999) 。在5～200 μg/mL 的范圍內(nèi)，硫酸新霉素的色譜面積與質(zhì)量濃度呈線性相關(guān)，檢測限為0.02 μg/mL。

圖2 硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液工作曲線

2.4 回收率和精密度

草魚的肌肉、腸道及血漿中硫酸新霉素的回收率及變異系數(shù)見表1。由表1可知，硫酸新霉素在肌肉中的回收率約為75.3%，日內(nèi)變異系數(shù)為1.61%，日間變異系數(shù)1.89%；在腸道內(nèi)的回收率約為87.4%，日內(nèi)變異系數(shù)為2.62%，日間變異系數(shù)2.91%；血漿的回收率約為89.9%，日內(nèi)變異系數(shù)為1.93%，日間變異系數(shù)2.32% 。

表1 草魚肌肉、腸道和血漿中硫酸新霉素的回收率和變異系數(shù)

2.5 硫酸新霉素在草魚血漿中的代謝規(guī)律及其相關(guān)藥代參數(shù)

本試驗以40 mg/kg體質(zhì)量劑量的硫酸新霉素溶液口灌草魚后，對草魚各個時間點的血液藥物質(zhì)量濃度通過LC-100高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，繪制出血液中硫酸新霉素的實時質(zhì)量濃度曲線(圖3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血藥質(zhì)量濃度在2 h后達(dá)到最大值，為3.833 μg/mL；24 h后血藥質(zhì)量濃度為1.167 μg/mL。血液中實時藥質(zhì)量濃度經(jīng)Kinetica 4.4軟件房室模型擬合，發(fā)現(xiàn)血藥質(zhì)量濃度時間數(shù)據(jù)符合一級吸收二室模型，硫酸新霉素在草魚血液中的藥動學(xué)參數(shù)見表2。

圖3 草魚血漿中的時時藥物質(zhì)量濃度曲線

參數(shù)單位數(shù)值參數(shù)單位數(shù)值A(chǔ)μg·mL7.11749Kαh0.815841Bh1.44947達(dá)峰質(zhì)量濃度μg/mL3.8333aμg·mL0.763991血藥濃度達(dá)峰時間h2βh0.008922370～24h用藥曲線面積μg/mL·h38.9534T1/2βh77.6864消除率L/kg·h0.23287

2.6 硫酸新霉素在草魚腸道內(nèi)的代謝規(guī)律

以10、20、30、40 mg/kg體質(zhì)量劑量的硫酸新霉素溶液分別口灌草魚，對口灌不同劑量硫酸新霉素的草魚各個時間點的腸道藥物質(zhì)量濃度通過LC-100高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，最大質(zhì)量濃度分別為65.89、91.45、139.22、173.90 μg/g；24 h后的藥物濃度分別為4.96、8.78、16.32、20.27 μg/g(圖4)。

圖4 草魚腸道內(nèi)時間—藥物質(zhì)量濃度曲線

劑量/mg·kg-110203040最小抑菌質(zhì)量濃度/μg·mL-166660～24h用藥曲線面積/μg·(mL·h)-1314.804437.617659.4818.9390～24h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度52.46772.936109.907136.489最大藥物質(zhì)量濃度/μg·mL-165.88591.448139.222173.901達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度10.9315.2423.2028.98

2.7 休藥期

在口灌40 mg/kg體質(zhì)量劑量下草魚肌肉中硫酸新霉素的達(dá)峰時間為3 h，最高質(zhì)量濃度為24.89 μg/g(圖5)；在給藥24 h時藥物質(zhì)量濃度為8.97 μg/g。歐盟對硫酸新霉素在食用動物肌肉中的藥物殘留量最大限度為500 μg/kg。硫酸新霉素是按照一級動力學(xué)從體內(nèi)消除的，消除后期符合指數(shù)消除：C=C0e-kelt；通過計算得出藥物殘留理論休藥期為8 d。

圖5 草魚肌肉中硫酸新霉素的實時質(zhì)量濃度曲線

3 結(jié) 論

3.1 硫酸新霉素在草魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征

水溫(25 ± 2) ℃時，以40 mg/kg體質(zhì)量的硫酸新霉素單次口灌于草魚前腸，血藥質(zhì)量濃度2 h達(dá)到最大值，最大藥物質(zhì)量濃度為3.833 μg/mL，24 h藥—時曲線下面積為38.9534 μg/(mL·h)；而腸道內(nèi)的藥物質(zhì)量濃度在灌藥后立刻達(dá)到最大值，最低藥物質(zhì)量濃度為20.27 μg/mL，24 h藥時曲線下面積為818.939 μg/(mL·h)；結(jié)果表明硫酸新霉素口服時吸收很少，血藥質(zhì)量濃度較低，腸道內(nèi)藥物質(zhì)量濃度較高。廖碧釵等[6]在水溫(25 ± 2) ℃時，以150 mg/kg的劑量給奧尼羅非魚(O.niloticus♀×O.aureus♂)單次口灌硫酸新霉素，血藥質(zhì)量濃度2.856 h達(dá)到最大值，最大血藥質(zhì)量濃度為7.013 μg/mL，24 h藥—時曲線下面積為101.22 μg/(mL·h)；宋潔等[7]在水溫(28±2) ℃條件下，按25 mg/kg的劑量對吉富羅非魚(GIFT，O.niloticus)單次口灌硫酸新霉素，血藥質(zhì)量濃度1.299 h達(dá)到最大值，最大血藥質(zhì)量濃度為16.138 μg/mL，24 h藥—時曲線下面積為456.225 μg/(mL·h)?？梢姴煌臏囟?、給藥劑量和受試動物對藥物的吸收量有明顯差異。

由此比較看出，硫酸新霉素在不同溫度、給藥劑量、水產(chǎn)動物體內(nèi)藥動學(xué)特征存在顯著差異，因此在制定給藥方案時需慎重分析其差異。由于硫酸新霉素口灌于草魚前腸后吸收量很少，腸道內(nèi)的藥物質(zhì)量濃度很高，血漿中藥物質(zhì)量濃度較低，通過血液的藥代動力學(xué)研究不能真實的反映腸道內(nèi)的藥物質(zhì)量濃度及其變化規(guī)律，所以本次對于草魚腸炎病的用藥方案并未采用通過草魚血液的藥代動力學(xué)給出用藥方案，采用崔俊昌等[17]對組織內(nèi)藥物質(zhì)量濃度變化的研究方法，從而得到最大藥物質(zhì)量濃度及藥時曲線下面積。

3.2 給藥方案的制定

本試驗結(jié)合硫酸新霉素對嗜水氣單胞菌的體外藥效學(xué)和草魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)及腸道內(nèi)藥物代謝規(guī)律研究，發(fā)現(xiàn)口灌劑量10、20、30、40 mg/kg體質(zhì)量的硫酸新霉素時，腸道內(nèi)達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度分別為10.93、15.24、23.20、28.98；腸道內(nèi)0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度分別為52.467、72.936、109.907、136.489。當(dāng)氨基糖苷類藥物0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度>125、達(dá)峰質(zhì)量濃度/最小抑菌質(zhì)量濃度>8時不但起效快，且能有效地殺滅細(xì)菌和抑制耐藥菌株產(chǎn)生，臨床有效率可大于90%；0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度>100時，細(xì)菌不能完全被清除，但能殺死90%以上的敏感菌；0～24 h用藥曲線面積/最小抑菌質(zhì)量濃度<100時，耐藥菌會逐日增加，最終細(xì)菌幾乎全部耐藥，導(dǎo)致治療失敗[18]。

氨基糖苷類藥物作為濃度依賴性藥物，單次大劑量用藥，不僅可以減少耐藥，而且能產(chǎn)生較大的抗菌后效應(yīng)，增加用藥間隔，降低因多次用藥產(chǎn)生的耳腎毒性，宜每日給藥一次[19]。參照文獻(xiàn)[20]的方法對于濃度依賴性抗生素藥給藥次數(shù)為3～5次。因此硫酸新霉素在治療由腸型嗜水氣單胞菌引起的草魚腸炎病時應(yīng)連續(xù)給藥3～5 d，每日給藥一次，每次劑量40 mg/kg。

參考文獻(xiàn)：

[1]張曉君，陳翠珍，房海．草魚腸炎嗜水氣單胞菌分離株的主要特性及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析[J]．中國人獸共患病學(xué)報，2006，22(4)：334-337．

[2]張翠娟，于宙亮，趙寶華，等．嗜水氣單胞菌研究進(jìn)展[J]．中國獸藥雜志，2008，42(7):46-50．

[3]楊本升，劉玉斌，茍仕金，等．動物微生物學(xué)[M]．長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1995：677-684．

[4]陳玉樓．硫酸新霉素治療雞大腸桿菌病的療效觀察[J]．山東家禽，1993(3)：22-23．

[5]路景明，閻繼業(yè)，李有長，等．硫酸新霉素治療犬、豬腸炎和仔豬白痢的臨床觀察[J]．獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1993，13(1)：19-20．

[6]廖碧釵，樊海平，林麗聰,等.硫酸新霉素在奧尼羅非魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)及殘留研究[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報，2011，40(1)：64-68．

[7]宋潔，王賢玉，王偉利，等．硫酸新霉素在吉富羅非魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)及休藥期[J]．中國水產(chǎn)科學(xué)，2010，17(6)：1358-1363．

[8]張雅斌，張祚新，鄭偉，等．諾氟沙星在魚類細(xì)菌性疾病中的應(yīng)用研究[J]．大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2000，15(2)：79-85．

[9]劉玉林，王翔凌，楊先樂，等．諾氟沙星在大黃魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)及殘留研究[J]．水產(chǎn)學(xué)報，2007，31(5)：655-660．

[10]楊亞軍，李劍勇，李冰．藥動學(xué)-藥效學(xué)結(jié)合模型及其在獸用抗菌藥物中的應(yīng)用[J]．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(1)：114-117．

[11]戴自英.臨床抗菌藥物學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1985:6-8．

[12]劉遠(yuǎn)飛.氟喹諾酮類抗菌藥后效應(yīng)及其機制的研究[D]．哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2002．

[13]鐘明康，Xuan D，Nicolau D P，等．感染模型家兔體內(nèi)莫西沙星的藥動力學(xué)[J].中國醫(yī)藥學(xué)雜志，2001，21(1)：15-17．

[14]楊美成，劉振，嚴(yán)小蕾，等．柱前衍生化I-IPLC法測定硫酸慶大霉素和硫酸新霉素的含量[J]．中國臨床藥雜志，2004，13(5)：288-291．

[15]丁俊仁，艾曉輝，汪開毓.強力霉素在斑點叉尾鮰體內(nèi)藥物動力學(xué)及殘留消除規(guī)律研究[J].水生生物學(xué)報，2012，36(1)：126-132．

[16]艾曉輝，陳正望，張春光．喹乙醇在鯉體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)及組織濃度[J]．水生生物學(xué)報，2012，27(3)：273-277．

[17]崔俊昌，劉又寧，王睿，等.左氧氟沙星藥代動力學(xué)/藥效學(xué)研究參數(shù)與金黃色葡萄球菌耐藥的相關(guān)性研究[J]．中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2007，12(9)：989-992．

[18]石煥階．根據(jù)濃度依賴型與時間依賴型抗菌藥物的特點制定給藥方案[J]．醫(yī)學(xué)導(dǎo)報，2009，28(9)：1222-1223．

[19]李運景，邢潔，陳文娟．時間依賴性抗菌藥物與濃度依賴性藥物給藥方案的優(yōu)化[J]．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008，24(2)：72-73．

[20]徐叔云，卞如廉，陳修．藥理實驗方法學(xué)[M]．3版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2002:699-759．

MedicationRegimeofNeomycinSulphateagainstEsoenteritisCausedbyAeromonashydrophilainGrassCarp

SUN Penghui, Lü Liqun

( College of Life and Fishery Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China )

In vivo pharmacokinetics of neomycin sulphate againstAeromonashydrophilawere studied in grass carp (Ctenopharyngodonidellus) with body weight of 150—200 g with esoenteritis caused byA.hydrophilaand with single oral administration of neomycin sulphate at a dose of 10, 20, 30, and 40 mg per kg body weight at water temperature of (25±2) ℃. The residues of neomycin sulphate were detected in blood, intestine and muscle of grass carp at different time points by high performance liquid chromatography (HPLC). It was found that neomycin sulphate againstA.hydropliahad minimal inhibitory concentration (MIC) of 6 μg/mL, and post antibiotic effect (AUC24)of 1 h. There was AUC24/MIC of 52.467 at a dose of 10 mg per kg body weight, 72.963 at a dose of 20 mg per kg body weight, 109.907 at a dose of 30 mg per kg body weight and 136.489 at a dose of 40 mg per kg body weight in the intestine. Cmax /MIC was 10.93, 15.24, 23.20 and 28.98 in the intestine at various doses, respectively. The maximal drug residue concentration of 3.833 μg/mL was observed in the blood of the grass carp orally administrated at a neomycin sulphate dose of 40 mg per kg body weight. Considering AUC24/MIC and Cmax/MIC, the medication regime of neomycin sulphate is recommended as the following: 40 mg/kg body weight, once a day, continuous administration for 3 to 5 days, and drug holiday of 8 days.

neomycin sulphate; grass carp;Aeromonashydrophila; pharmacokinetics; pharmacodynamics

S965.112

A

1003-1111(2016)01-0054-06

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.01.010

2015-07-15；

2015-09-15.

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-46-12).

孫朋輝(1990-)，男，碩士研究生;研究方向：水產(chǎn)疾病防控.E-mail:13052398178@163.com.通訊作者：呂利群(1971-)，男，教授，博士生導(dǎo)師；研究方向：動物病毒學(xué).E-mail:IqIv@shou.edu.cn.