張偉，楊佳敏，張梅，劉珍珍，齊丹丹，章慶慶，羅麗，解秸萍，任曉暄，郭孟瑋，趙雅芳

北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029

寒凝證類痛經(jīng)大鼠經(jīng)穴左右紅外溫度及艾灸作用的研究

張偉，楊佳敏，張梅，劉珍珍，齊丹丹，章慶慶，羅麗，解秸萍，任曉暄，郭孟瑋，趙雅芳

北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029

目的 觀察寒凝證類痛經(jīng)大鼠左右穴區(qū)及經(jīng)穴連線艾灸前后紅外溫度，比較灸三陰交與關(guān)元效應(yīng)差異。方法 陰道涂片法篩選動(dòng)情間期大鼠48只，隨機(jī)分為正常組、模型組、三陰交組和關(guān)元組，每組12只。全身冷凍結(jié)合苯甲酸雌二醇注射法造模，治療組分別灸雙側(cè)三陰交和關(guān)元，3壯/穴。紅外熱成像儀動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)相關(guān)穴區(qū)及經(jīng)絡(luò)連線左右艾灸前后紅外溫度。結(jié)果 與正常組比較，灸后5～30 min，模型組三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右溫差顯著增加（P＜0.05）；灸后30 min，其他3組三陰交右側(cè)穴區(qū)溫度顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，灸后5～30 min，三陰交組三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右溫差顯著降低（P＜0.05），關(guān)元組10～30 min連線左右溫差顯著降低（P＜0.05）；兩艾灸組比較，三陰交組對(duì)連線左右溫差影響早于關(guān)元組。結(jié)論 艾灸可顯著減小經(jīng)絡(luò)連線左右溫差，緩解失衡狀態(tài)，且灸三陰交恢復(fù)失衡作用早于灸關(guān)元。

艾灸；紅外熱成像；寒凝證類痛經(jīng)大鼠；三陰交；關(guān)元；大鼠

原發(fā)性痛經(jīng)是婦科常見疾病，而寒凝證是原發(fā)性痛經(jīng)中最常見證型之一[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，“血得熱則行，得寒則凝”“不通則痛”是寒凝證痛經(jīng)主要發(fā)病機(jī)制。研究顯示，健康人體表溫度處于左右平衡狀態(tài)，疾病時(shí)體表溫度左右失去平衡，主要表現(xiàn)在與疾病相關(guān)的經(jīng)絡(luò)與腧穴上，針刺可調(diào)節(jié)該失衡狀態(tài)[2]。本課題組前期已成功制備寒凝證類痛經(jīng)大鼠模型，發(fā)現(xiàn)針刺可以調(diào)節(jié)其三陰交穴區(qū)左右溫度失衡狀態(tài)，引起相關(guān)經(jīng)脈穴區(qū)溫度循經(jīng)性動(dòng)態(tài)變化[3-4]。為進(jìn)一步觀察寒凝證痛經(jīng)大鼠體表溫度經(jīng)穴特性，探討艾灸對(duì)穴區(qū)及經(jīng)脈溫度的影響，本研究采用紅外熱成像技術(shù)觀察大鼠雙側(cè)三陰交和血海穴區(qū)及脾經(jīng)三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線段體表溫度及艾灸后變化，比較灸本部三陰交和標(biāo)部關(guān)元的效應(yīng)差異。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

健康清潔級(jí)雌性SD大鼠，3月齡，性成熟未交配，體質(zhì)量（230±20）g，中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，合格證號(hào)SCXK（京）2004-007。大鼠置于清潔柜中，實(shí)驗(yàn)室溫度（23±1）℃、濕度（45±5）%。

1.2 艾灸材料

艾炷直徑7.5 mm、高8.0 mm，底盤直徑12.0 mm、高3.0 mm，北京中研太和有限公司。

1.3 主要藥物、試劑與儀器

苯甲酸雌二醇注射液（寧波市三生藥業(yè)有限公司，批號(hào)120207），縮宮素注射液（上海禾豐制藥廠，批號(hào)120302）；自制美蘭染色溶液、20%烏拉坦。P640型紅外熱像儀（美國FLIR公司），BT223S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），TX51顯微鏡（日本OLYMPUS公司），BC/BD-379HB臥式冰柜（青島海爾集團(tuán)）。

1.4 動(dòng)物篩選及分組

每日定時(shí)細(xì)棉簽蘸生理鹽水，濕潤后輕輕插入大鼠陰道約0.5 cm，轉(zhuǎn)動(dòng)后取出，將細(xì)棉簽上陰道內(nèi)容物均勻涂于載玻片。待在空氣中干燥后，染色10 min，然后鏡下觀察涂片組織學(xué)變化，篩選出有大量白細(xì)胞及少量上皮細(xì)胞和黏液的動(dòng)情間期者。按隨機(jī)數(shù)字表法將動(dòng)情間期48只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、三陰交組、關(guān)元組，每組12只。

1.5 造模

參照文獻(xiàn)[5-6]苯甲酸雌二醇注射結(jié)合冷凍法造模。皮下注射苯甲酸雌二醇（第1、10日每只0.5 mg/d，第2～9日每只0.2 mg/d），連續(xù)10 d。第6日給藥后將大鼠放入-25 ℃低溫冷柜，間隔2 h后開蓋通氣5 s，持續(xù)受凍4 h左右；待出現(xiàn)寒顫畏寒喜暖、蜷縮少動(dòng)、朦朧欲睡、反應(yīng)遲鈍、呼吸微弱等癥狀和體征時(shí)取出，給藥后冷凍重復(fù)至第10日。

1.6 艾灸方法

除正常組外，其余各組第10日給藥1 h后腹腔注射縮宮素2 U/只，隨后關(guān)元組和三陰交組分別艾灸“關(guān)元”和雙側(cè)“三陰交”（固定大鼠后肢，止血鉗夾住艾炷底座使其恰好接觸穴區(qū)皮膚而不過于貼近，待灸炷燃剩1/4時(shí)，換取下一壯，連續(xù)3壯/穴）。模型組和正常組同時(shí)抓取，不予艾灸。

1.7 紅外溫度監(jiān)測(cè)

第10日注射苯甲酸雌二醇后，肌內(nèi)注射烏拉坦0.7 mL/100 g麻醉大鼠，剃毛器備皮暴露雙側(cè)三陰交、血海穴區(qū)。再將大鼠固定于透明鼠板，被攝對(duì)象置于紅外攝像機(jī)鏡頭視野內(nèi)，標(biāo)記監(jiān)測(cè)穴區(qū)。先記錄各組大鼠灸前溫度，然后正常組腹腔注射等滲鹽水，其他組腹腔注射縮宮素后，對(duì)三陰交組、關(guān)元組施行艾灸，再記錄灸后5、10、20、30 min紅外溫度。實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)室溫度保持在（23±1）℃、濕度（60±5）%。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 艾灸對(duì)三陰交穴區(qū)紅外溫度的影響

重復(fù)測(cè)量分析顯示，各組間雙側(cè)穴區(qū)溫度變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組于監(jiān)測(cè)時(shí)間均對(duì)溫度有顯著影響（P＜0.05）。各組不同時(shí)點(diǎn)紅外溫度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。灸后與灸前比較，除正常組外，其余3組灸后30 min三陰交右側(cè)穴區(qū)均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；各時(shí)點(diǎn)組間左右溫差比較未見顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

2.2 艾灸對(duì)血海穴區(qū)紅外溫度的影響

重復(fù)測(cè)量分析結(jié)果同“2.1”項(xiàng)。各組雙側(cè)血海穴區(qū)灸后30 min均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；各時(shí)點(diǎn)組間左右溫差比較均未見顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

2.3 艾灸對(duì)三陰交-血海連線紅外溫度的影響

重復(fù)測(cè)量分析結(jié)果同“2.1”項(xiàng)。灸后30 min各組雙側(cè)三陰交-血海連線均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；左右溫差比較，灸前與正常組比較，模型組未見顯著差異，三陰交組三陰交-血海連線左右溫差顯著增加（P＜0.05）；灸后5～30 min，模型組連線左右溫差顯著大于正常組（P＜0.05）；灸后5 min時(shí)，三陰交組連線左右溫差顯著小于模型組（P＜0.05），但大于正常組（P＜0.05）；灸后10～30 min，三陰交組、關(guān)元組連線左右溫差均顯著小于模型組（P＜0.05），與正常組未見顯著差異。治療組間比較，三陰交組對(duì)連線左右溫差影響早于關(guān)元組。結(jié)果見表3。

表1 艾灸前后雙側(cè)三陰交穴區(qū)各組紅外溫度比較（s，℃，每組12只）

表1 艾灸前后雙側(cè)三陰交穴區(qū)各組紅外溫度比較（s，℃，每組12只）

注：與同組同側(cè)灸前比較，##P＜0.01

10 min 右 28.75±0.25 28.33±0.39 29.05±0.28 28.57±0.42左 28.27±0.35 27.22±0.33 28.92±0.28 28.35±0.34差 0.47±0.23 0.61±0.20 0.13±0.20 0.22±0.46 20 min 右 28.68±0.28 28.11±0.38 28.60±0.30 28.12±0.42左 28.08±0.40 27.51±0.33 28.53±0.20 28.04±0.34差 0.59±0.27 0.61±0.22 0.07±0.22 0.08±0.45 30 min 右 28.64±0.30 27.98±0.40##28.67±0.31##27.93±0.42##左 28.06±0.41 27.35±0.33 28.16±0.24 27.87±0.36差 0.58±0.29 0.64±0.20 0.11±0.20 0.06±0.43

表2 艾灸前后雙側(cè)血海穴區(qū)各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

表2 艾灸前后雙側(cè)血海穴區(qū)各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

注：與同組同側(cè)灸前比較，##P＜0.01

時(shí)點(diǎn) 部位 正常組 模型組 三陰交組 關(guān)元組灸前 右 31.13±0.35 31.15±0.36 31.21±0.49 31.71±0.27左 31.19±0.35 31.07±0.32 32.12±0.22 31.90±0.78差 -0.06±0.15 -0.02±0.17 -0.91±0.55 -0.19±0.18 5 min 右 30.67±0.01 30.59±0.36 30.57±0.35 30.78±0.29左 30.28±0.45 28.97±0.33 30.40±0.19 30.05±0.30差 -0.01±0.14 0.15±0.20 -0.88±0.42 -0.22±0.18 10 min 右 30.54±0.41 30.41±0.38 30.33±0.34 30.16±0.29左 30.55±0.42 30.22±0.33 31.13±0.22 30.65±0.28差 -0.01±0.15 0.20±0.22 -0.81±0.40 -0.10±0.22 20 min 右 30.36±0.44 30.18±0.40 29.93±0.33 30.16±0.30左 30.35±0.45 30.04±0.35 30.67±0.21 30.37±0.28差 0.01±0.15 0.14±0.17 -0.75±0.38 -0.21±0.18 30 min 右 30.28±0.46##29.94±0.45##29.62±0.30##29.90±0.32##左 30.28±0.45##29.87±0.33##30.40±0.19##30.05±0.34##差 0.00±0.18 0.07±0.23 -0.77±0.34 -0.14±0.17

表3 艾灸前后雙側(cè)三陰交-血海連線各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

表3 艾灸前后雙側(cè)三陰交-血海連線各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

注：與同組同側(cè)灸前比較，##P＜0.01；與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；與三陰交組比較，▲P＜0.05

時(shí)點(diǎn)部位正常組 模型組 三陰交組 關(guān)元組灸前右30.74±026 30.57±0.29 31.35±0.24 31.37±0.34左30.60±0.26 30.41±0.28 31.71±0.16 31.46±0.24差 0.15±0.11 0.16±0.08 -0.37±0.20△*-0.09±0.18 5 min右30.26±0.29 30.06±0.30 31.00±0.20 30.34±0.34左30.10±0.29 29.74±0.30 31.29±0.16 30.42±0.28差 0.16±0.12 0.32±0.11△-0.28±0.17△*-0.09±0.18▲10 min右30.17±0.30 29.90±0.32 30.54±0.22 30.12±0.35左29.98±0.29 29.51±0.30 30.74±0.28 30.20±0.29差 0.19±0.13 0.39±0.10△-0.21±0.18*-0.08±0.19*20 min右30.03±0.33 29.64±0.35 30.04±0.24 29.79±0.35左29.76±0.33 29.20±0.32 30.21±0.20 29.88±0.31差 0.27±0.15 0.44±0.13△-0.17±0.19*-0.09±0.20*30 min右27.91±0.35##29.43±0.35##29.69±0.24##29.52±0.35##左29.68±0.34##29.02±0.30##29.81±0.22##29.62±0.33##差 0.24±0.18 0.41±0.14△-0.12±0.17*-0.10±0.20*

3 討論

熱學(xué)理論認(rèn)為，動(dòng)物和人都是熱輻射體，體表不同部位輻射出不同強(qiáng)度紅外線。當(dāng)某一區(qū)域發(fā)生生理或病理改變時(shí)，該區(qū)域新陳代謝發(fā)生變化，其分子熱運(yùn)動(dòng)及紅外輻射也將發(fā)生相應(yīng)變化。紅外熱像技術(shù)可利用光學(xué)掃描會(huì)聚、光電轉(zhuǎn)換及信號(hào)放大等系統(tǒng),接收、處理體表紅外信號(hào)，以圖像形式顯示體表溫度場(chǎng)分布。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)穴與體表其他部位表現(xiàn)為不同紅外輻射特性，皮膚經(jīng)絡(luò)冷負(fù)荷處理后，經(jīng)絡(luò)帶皮膚溫度變化較非經(jīng)絡(luò)帶迅速；某些內(nèi)臟疾病時(shí)體表相關(guān)穴位紅外溫度會(huì)上升或下降[5-6]。

有學(xué)者利用紅外技術(shù)觀察到體表存在基本符合十四經(jīng)循行軌跡（包括高溫帶和低溫帶）的等強(qiáng)度紅外輻射分布圖，并處于動(dòng)態(tài)變化中；正常狀態(tài)紅外熱成像圖呈左右基本對(duì)稱規(guī)律；并將兩側(cè)對(duì)應(yīng)的同名穴位溫度差值過大作為經(jīng)絡(luò)失衡的依據(jù)[7-9]。

本課題組前期發(fā)現(xiàn)，寒凝痛經(jīng)大鼠疼痛狀態(tài)時(shí)，三陰交左右紅外溫度失衡，針刺三陰交、關(guān)元可緩解左右失衡[3-4]。但疾病狀態(tài)下2個(gè)穴位經(jīng)絡(luò)連線左右溫差有何變化，目前未見相關(guān)報(bào)道。艾灸是靠藥物及溫?zé)嶙饔梅乐渭膊〉耐庵畏椒ǎ瑢?duì)于痛經(jīng)鎮(zhèn)痛作用效果顯著。本研究再次采用紅外熱成像技術(shù)監(jiān)測(cè)相關(guān)穴區(qū)及經(jīng)線左右的紅外溫度，觀察艾灸影響效應(yīng)。結(jié)果顯示，灸前，三陰交組三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右溫差顯著大于正常組和模型組；灸后5 min，三陰交組開始小于模型組，但仍大于正常組；灸后10～30 min，三陰交組、關(guān)元組均小于模型組，與正常組未見差異。而連續(xù)監(jiān)測(cè)30 min，三陰交和血海穴區(qū)左右溫差各組間均未見顯著差異?？梢姡幗?、血海單個(gè)穴區(qū)左右溫差未見顯著變化時(shí)，三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右溫差出現(xiàn)灸前大于正常大鼠，而灸后10～30 min顯著減小的變化。分析認(rèn)為，三陰交-血海連線為足太陰脾經(jīng)下肢循行的一部分，痛經(jīng)時(shí)單個(gè)穴區(qū)未出現(xiàn)失衡表現(xiàn)時(shí)，經(jīng)脈上的穴位間連線左右溫差變化可反映脾經(jīng)的失衡狀態(tài)。并且，三陰交為本經(jīng)穴位，關(guān)元為任脈和足三陰經(jīng)的交匯穴位，二穴均可對(duì)脾經(jīng)經(jīng)氣盛衰發(fā)揮調(diào)節(jié)作用；分別艾灸后連線左右溫差顯著減小，可以認(rèn)為二穴均可緩解脾經(jīng)左右失衡。兩治療組比較，三陰交組自5 min開始左右溫差減小，而關(guān)元組自10 min開始減小，可見三陰交穴對(duì)經(jīng)線失衡恢復(fù)作用早于關(guān)元穴。從標(biāo)本理論分析，三陰交屬本部穴，為經(jīng)氣匯聚區(qū)域；關(guān)元屬標(biāo)部穴，為經(jīng)氣彌散區(qū)域；說明經(jīng)氣匯聚處對(duì)經(jīng)絡(luò)左右失衡調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于經(jīng)氣彌散處。從物理熱傳導(dǎo)看，灸局部三陰交溫?zé)醾鲗?dǎo)距離小于灸遠(yuǎn)端關(guān)元，故三陰交恢復(fù)失衡作用要早于關(guān)元。灸后30 min，各組雙側(cè)血海穴區(qū)、三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線、左側(cè)三陰交穴區(qū)紅外溫度均比灸前顯著下降，考慮由于大鼠麻醉及四肢展開的固定體位，影響其正常產(chǎn)熱散熱平衡，故溫度均下降。

綜上，寒凝證類痛經(jīng)大鼠三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右紅外溫差顯著增大，三陰交右側(cè)穴區(qū)溫度顯著降低。灸三陰交、關(guān)元可減小三陰交-血海經(jīng)絡(luò)連線左右溫差，緩解經(jīng)絡(luò)左右失衡狀態(tài)，且灸三陰交恢復(fù)失衡作用早于灸關(guān)元。

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Research on Temperature of Left and Right Points of Dysmenorrhea Rats with Cold

Stagnation Syndrome and Effects of Moxibustion Intervention

ZHANG Wei, YANG Jia-min,

ZHANG Mei, LIU Zhen-zhen, QI Dan-dan, ZHANG Qing-qing, LUO Li, XIE Jie-ping, REN Xiao-xuan, GUO Meng-wei, ZHAO Ya-fang (School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

Objective To observe the surface area temperature of dysmenorrhea rats with cold stagnation syndrome; To compare the different effects of Sanyinjiao (SP6) and Guanyuan (RN4). Methods Forty female SD rats were randomized into control group, model group, Sanyinjiao (SP6) group, and Guanyuan (RN4) group, 12 rats in each group. Whole body freezing method combined with estradiol benzoate injection was used to establish models. Sanyinjiao (SP6) group and Guanyuan (RN4) group received moxibustion at corresponding points for 3 times after modeling. Infrared thermal imaging was used to measure the skin temperature at the surface projection area of Sanyinjiao (SP6) and Xuehai (SP10) and Sanyinjiao-Xuehai lines before and after moxibustion. Results Compared with control group, the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines significantly increased in model group 5-30 min after moxibustion (P<0.05). 30 min after moxibustion, the temperature of right Sanyinjiao significantly decreased in other three groups (P<0.01). Compared with model group, the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines significantly decreased after 5-30 min in Sanyinjiao group (P<0.05), while Sanyinjiao-Xuehai lines significantly decreased after 10-30 min in Guanyuan group (P<0.05). Comparison between two moxibustion groups, the influence of Sanyinjiao group to temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines was earlier than Guanyuan group (P<0.05). Conclusion Moxbustion can decrease the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines and ease the imbalance. And the influence of moxbustion SP6 to temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines is earlier than moxibustion RN4.

moxibustion therapy; infrared thermal imaging; dysmenorrhea rats with cold stagnation syndrome; Sanyinjiao; Guanyuan; rats

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.018

R245

A

1005-5304(2016)04-0068-04

2015-07-23）

（

2015-08-12；編輯：華強(qiáng)）

國家中醫(yī)藥管理局第一批重點(diǎn)研究室建設(shè)項(xiàng)目（2009年）；北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項(xiàng)目（2015-jxs-351）

解秸萍，E-mail：xiejieping@sina.com