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(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東 廣州511447;2.南華大學(xué)護(hù)理學(xué)院)

·婦產(chǎn)科疾病專題·

妊娠期糖尿病產(chǎn)婦胎盤(pán)與血清脂聯(lián)素水平的相關(guān)性

李華珍1,袁俏奇1,羅利1,黃薇1,許金華2*

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科,廣東 廣州511447;2.南華大學(xué)護(hù)理學(xué)院)

目的探討妊娠期糖尿病(GDM)產(chǎn)婦胎盤(pán)脂聯(lián)素(APN)表達(dá)水平與血清脂聯(lián)素、胰島素抵抗的關(guān)系。方法選擇2014年10月至2015年9月在本院分娩的30例GDM產(chǎn)婦作為研究組，隨機(jī)抽取同時(shí)段分娩的正常產(chǎn)婦30例作為對(duì)照組。免疫組化法檢測(cè)胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞APN表達(dá)水平，分析胎盤(pán)APN水平與胰島素抵抗、血清APN水平、產(chǎn)前體重指數(shù)(BMI)、新生兒體重和身長(zhǎng)的相關(guān)性。結(jié)果對(duì)照組胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)、胞核或胞膜被染成棕黃色的陽(yáng)性反應(yīng)物，研究組陽(yáng)性反應(yīng)物的表達(dá)弱于對(duì)照組。定量分析顯示，對(duì)照組APN的表達(dá)量為62.54±3.36，研究組APN的表達(dá)量為37.12±2.79，兩組比較，差異有顯著性(t=8.496,P=0.000)。胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN水平與產(chǎn)前BMI、產(chǎn)前HOMA-IR、新生兒出生體重呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN水平與產(chǎn)前血APN水平呈正相關(guān)(P<0.01)，而與新生兒出生身長(zhǎng)無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論胎盤(pán)APN表達(dá)水平降低和孕婦血清APN水平、胰島素抵抗與胎兒生長(zhǎng)發(fā)育均有顯著相關(guān)，對(duì)胎盤(pán)APN表達(dá)及作用機(jī)制的進(jìn)一步研究可為GDM的防治提供新的思路。

妊娠期糖尿?。?脂聯(lián)素； 胎盤(pán)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GMD)指孕前無(wú)糖尿病，妊娠期首次識(shí)別或發(fā)生的糖尿病或糖耐量異常[1]，妊娠期糖尿病可能導(dǎo)致羊水過(guò)多、早產(chǎn)、死胎等多種并發(fā)癥，對(duì)圍產(chǎn)期母嬰安全危害較大。脂聯(lián)素(adiponectin，APN)是由脂肪細(xì)胞分泌的多肽類激素，與胰島素抵抗和2型糖尿病的發(fā)生有著明顯的相關(guān)[2]。研究顯示，GDM和糖耐量受損孕婦血清APN水平明顯低于正常孕婦[3]。目前對(duì)胎盤(pán)脂聯(lián)素表達(dá)與GDM關(guān)系報(bào)道較少，本文對(duì)GDM和正常孕婦胎盤(pán)脂聯(lián)素蛋白水平的表達(dá)進(jìn)行研究，探討胎盤(pán)脂聯(lián)素水平與血清脂聯(lián)素水平的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2014年10月～2015年9月在本院分娩的30例GDM產(chǎn)婦作為研究組，妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照(IAPNSG2010)婦產(chǎn)科第八版教材標(biāo)準(zhǔn)[1]，75 g葡萄糖行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)：空腹血糖≥5.1 mmol/L，1 h≥10.0 mmol/L，2 h≥8.5 mmol/L，任意一點(diǎn)血糖值異常即可診斷為妊娠期糖尿病。隨機(jī)抽取同時(shí)段分娩的正常產(chǎn)婦30例作為對(duì)照組。兩組患者均排除孕前糖尿病、高血壓、甲功異常、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、肝腎功能障礙等內(nèi)外科病史，排除前置胎盤(pán)、胎盤(pán)早剝、羊水過(guò)少或過(guò)多等妊娠期并發(fā)癥。研究組和對(duì)照組的一般情況：觀察組(GDM組)產(chǎn)婦年齡20～42歲，平均28.87±2.21歲，孕周37～41周，平均38.14±1.73周，BMI 19.31～39.48，平均31.02±2.21，孕次1～5次，平均2.81±0.21次，產(chǎn)次1～5次，平均1.82±0.31次，對(duì)照組(正常組)產(chǎn)婦年齡20～41歲，平均27.76±3.21歲，孕周37～41周，平均39.14±1.53周，BMI 19.01～36.08，平均26.14±1.21，孕次1～5次，平均2.73±0.32次，產(chǎn)次1～5次，平均1.72±0.23次，對(duì)兩組年齡、孕周、孕次及產(chǎn)次進(jìn)行比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，BMI差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。

1.2主要試劑多聚賴氨酸，購(gòu)自北京北方同正生物發(fā)展有限公司；SABC染色試劑盒，購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；DAB顯色試劑盒，購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；羊抗人脂聯(lián)素單克隆抗體，購(gòu)北京西美杰科技有限公司。

1.3研究方法

1.3.1 產(chǎn)前抽取產(chǎn)婦空腹靜脈血，采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血漿葡萄糖(FPG)，采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清空腹胰島素水平(Fins)，采用ELISA法測(cè)血清APN水平。胰島素抵抗計(jì)算公式(HOMA-IR)為FBG×(Fins×22.5)-1。

1.3.2 免疫組化法測(cè)定胎盤(pán)APN蛋白 所有產(chǎn)婦胎盤(pán)娩出后，用手術(shù)刀自胎盤(pán)母體面取0.5 cm×1.0 cm×1.0 cm的胎盤(pán)組織，采用0.9%氯化鈉溶液沖洗后，置入10%中性福爾馬林溶液中固定24 h，脫水、透明、浸蠟包埋、切片，恒溫箱60 ℃烤片1 h，脫蠟并采用梯度酒精水化，0.3%過(guò)氧化氫室溫孵育30 min，0.01 mol/L磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌5 min×3次，微波修復(fù)抗原，復(fù)溫，0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次，滴加正常山羊血清封閉液，室溫下20 min，1∶100稀釋羊抗人脂聯(lián)素抗體，PBS代替羊抗人脂聯(lián)素抗體作為對(duì)照組，4 ℃溫度過(guò)夜，0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次，加生物素化兔抗山羊IgG，孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗滌5 min，重復(fù)3次，滴加SABC(Strept Avidin-Biotin Complex,鏈霉親和素-生物素-酶復(fù)合物)，孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗滌5 min×4次，DAB(3,3-二氨基苯聯(lián)胺),顯色、蘇木素復(fù)染，鹽酸分色，自來(lái)水沖洗，梯度脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。采用顯微圖像自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)進(jìn)行半定量分析，隨機(jī)選取5個(gè)視野/張切片，測(cè)定陽(yáng)性反應(yīng)部位的平均吸光度。

2 結(jié) 果

2.1胎盤(pán)APN表達(dá)對(duì)照組胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞中可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)、胞核或胞膜被染成棕黃色的陽(yáng)性反應(yīng)物，研究組陽(yáng)性反應(yīng)物的表達(dá)弱于對(duì)照組，見(jiàn)圖1。定量分析顯示，對(duì)照組APN的表達(dá)量為62.54±3.36，研究組APN的表達(dá)量為37.12±2.79，兩組比較，差異有顯著性(t=8.496,P=0.000)。

2.2胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN表達(dá)水平與產(chǎn)婦臨床資料相關(guān)性胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN水平與產(chǎn)前BMI、產(chǎn)前HOMA-IR、新生兒出生體重呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN水平與產(chǎn)前血APN水平呈正相關(guān)(P<0.01)，胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN水平與新生兒出生身長(zhǎng)無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 兩組胎盤(pán)滋養(yǎng)層中APN的表達(dá)對(duì)比(400×)

表1胎盤(pán)滋養(yǎng)層APN表達(dá)水平與產(chǎn)婦臨床資料相關(guān)性

妊娠結(jié)局各指標(biāo)脂聯(lián)素rP產(chǎn)前BMI-0.840.000產(chǎn)前HOMA-IR-0.920.000產(chǎn)前血脂聯(lián)素水平0.940.000新生兒出生體重-0.610.000新生兒出生身長(zhǎng)-0.150.414

3 討 論

APN是由脂肪組織細(xì)胞分泌的特異性激素，可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、增強(qiáng)胰島素敏感性，APN水平下降或功能不全將會(huì)增加胰島素抵抗，增加妊娠期糖尿病的發(fā)生幾率[4]。研究顯示，胰島素抵抗的糖尿病患者中血清APN水平明顯低于正常對(duì)照組，提高APN水平可減輕糖尿病患者的胰島素抵抗[5-6]。胎盤(pán)的主要細(xì)胞類型為滋養(yǎng)層細(xì)胞，除了參與母胎之間的物質(zhì)交換外，還可分泌多種因子，調(diào)節(jié)母體的能量代謝，調(diào)控胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育[7]。目前有研究顯示，胎盤(pán)分泌的瘦素、TNF-α等與GDM患者胰島素抵抗有關(guān)[8-9]。但脂聯(lián)素在胎盤(pán)組織中的表達(dá)及表達(dá)水平與GDM是否有關(guān)目前研究較少。

本文采用免疫組化對(duì)胎盤(pán)組織脂聯(lián)素表達(dá)進(jìn)行定位和定量研究，結(jié)果顯示，滋養(yǎng)層細(xì)胞漿內(nèi)有APN蛋白的明顯表達(dá)，定量研究顯示，GDM產(chǎn)婦滋養(yǎng)層APN的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，該結(jié)果提示胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞可能是孕期APN的來(lái)源之一。直線相關(guān)顯示，滋養(yǎng)層APN表達(dá)水平與產(chǎn)婦產(chǎn)前BMI、HOMA-IR均呈明顯負(fù)相關(guān)，與產(chǎn)婦血清脂聯(lián)素水平呈明顯正相關(guān)，結(jié)果提示GDM發(fā)病過(guò)程中，除脂肪細(xì)胞分泌APN減少外，胎盤(pán)分泌水平下降也是孕婦血清APN水平下降的重要原因，在孕婦體脂增加和高血糖、高胰島素血癥等因素的共同作用下，脂肪組織和胎盤(pán)的APN分泌均被抑制，導(dǎo)致血清APN水平下降，胰島素抵抗增加。本研究結(jié)果還顯示，滋養(yǎng)層APN表達(dá)水平與新生兒體重呈負(fù)相關(guān)，但和新生兒身長(zhǎng)無(wú)明顯相關(guān)，說(shuō)明GDM孕婦胎盤(pán)APN水平表達(dá)降低可影響胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育，增加巨大兒的發(fā)生率，其詳細(xì)作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，胎盤(pán)是孕婦APN的來(lái)源，胎盤(pán)APN表達(dá)水平降低和孕婦血清APN水平、胰島素抵抗與胎兒生長(zhǎng)發(fā)育均有顯著相關(guān)，對(duì)胎盤(pán)APN表達(dá)及作用機(jī)制的進(jìn)一步研究可為GDM的防治提供新的思路。

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TheRelationshipBetweenthePlacentaandSerumAdiponectinLevelinPatientswithGestationalDiabetesMellitus

LI Huazhen，YUAN Qiaoqi，LUO Li，et al

(TheFourthAffiliatedHospitalofObstetricsandGynecology，GuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou，Guangdong511447，China)

ObjectiveTo study the relationship of placenta adiponectin level with insulin resistance and serum adiponectin level in patients with gestational diabetes mellitus.Methods30 patients in our hospital from October 2014 to September 2015 were selected as study group,and pregnant woman in childbirth at the same time were selected as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression level of APN in trophoblast cells.The relationship of placenta adiponectin level with insulin resistance,serum adiponectin level,prenatal body mass index,weight and length of newborn was analyzed.ResultsPositive reaction in placental trophoblast cells could be observed in the control group,and the expression of the positive reaction in the study group was weaker than that in the control group.The expression amount of APN in control group and study group were (62.54±3.36) and (37.12±2.79) respectively (t=8.496,P=0.000).The trophoblast APN level was negatively correlated with BMI in placenta,prenatal HOMA-IR and neonatal birth weight.The trophoblast APN level was positively correlated with prenatal blood APN level (P<0.01).The trophoblast APN level was not correlated with neonatal birth length (P>0.05).ConclusionThe trophoblast APN level was correlated with prenatal blood APN leve,insulin resistance and fetal growth and development,further studies on expression and mechanism of APN in placenta can provide a new way of thinking for the prevention and treatment of GDM.

adiponectin; placenta; gestational diabetes mellitus

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.004

2016-03-07；

2016-05-05

*通訊作者，E-mail：1738143212@qq.com.

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