黃晶晶 謝寧寧 李 博 程江華 王灼琛 殷俊峰 閆曉明

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所1，合肥 230031)(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院2，北京 100083)

菜籽源鋅螯合肽的制備、純化和結(jié)構(gòu)解析

黃晶晶1謝寧寧1李 博2程江華1王灼琛1殷俊峰1閆曉明1

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所1，合肥 230031)(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院2，北京 100083)

采用堿性蛋白酶水解菜籽蛋白制備水解物，運用固定金屬親和層析(IMAC-Zn2+)和葡聚糖凝膠G25(Sephadex G25)層析分離純化；利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)和電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)鑒定序列；采用EDTA絡(luò)合滴定法(ECT)、雙硫腙比色法(DCM)、原子吸收光譜(AAS)和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)檢測鋅螯合率。試驗表明：菜籽蛋白的4 h水解物鋅螯合潛力最佳；分離該水解物獲得3個肽組分(I，Ⅱ和Ⅲ)，其中Ⅱ和Ⅲ具有鋅螯合能力；進一步分離后分別獲得3個(Ⅱ-1，Ⅱ-2，Ⅱ-3)和2個肽組分(Ⅲ-1和Ⅲ-2)，組分Ⅱ-3的鋅螯合率最高，高于同濃度的谷胱甘肽(GSH)(P<0.05)；鑒定Ⅱ-3序列獲得4條肽，即Ala-Arg(AR)，Asn-Ser-Met (NSM)，Gly-Lys-Arg(GKR)和Glu-Pro-Ser-His(EPSH)。其中NSM的鋅螯合率最高，來源于菜籽蛋白NADH-enoyl-ACP reductase Chain A 序列中的296-298氨基酸殘基。因此，菜籽蛋白可以作為微量元素螯合肽的優(yōu)良來源。

鋅 菜籽蛋白水解物 螯合肽 固定金屬親和層析 堿性蛋白酶

鋅(Zn)是人體必需的微量元素，影響300余種代謝酶的活性，可以作為慢性血管疾病、癌癥、免疫紊亂等病理狀態(tài)下的抗氧化因子和抗炎癥因子[1-2]。金屬螯合肽(Metal chelating peptide, MCP)通常以蛋白質(zhì)為底物經(jīng)過蛋白酶水解制備，多種食源蛋白質(zhì)(魚皮[3]、大豆[4]、芝麻[5]、向日葵[6]、核桃[7]都是其優(yōu)良來源。同時，研究證實MCP具有多種金屬離子(鐵(Ⅲ)[9]、銅(Ⅱ)[6]、鈣[10]、鋅[5])螯合能力，可以提高微量元素的穩(wěn)定性、吸收率和生物利用率[8]。國內(nèi)外學(xué)者已鑒定出具有金屬螯合活性的肽序列，如Ser-Cys-His[3]和Asn-Cys-Ser[5]。

菜籽是我國重要的油料作物之一，產(chǎn)量僅次于大豆[12]。菜籽蛋白質(zhì)量分數(shù)達37%～50%，已用于制備抗氧化肽、抗腫瘤肽和抗高血壓肽等多種活性肽[13]。但是，以菜籽蛋白制備鋅螯合肽的研究鮮見報道。此外，對螯合肽的序列鑒定和結(jié)構(gòu)表征有助于揭示其結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系。因此，本研究采用堿性蛋白酶水解菜籽蛋白，利用固定金屬親和層析(Immobilized metal-chelated affinity chromatography-Zinc, IMAC-Zn2+)、葡聚糖凝膠(Sephadex G25)層析、反相高效液相色譜(Reverse pphase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)純化水解物，采用EDTA絡(luò)合滴定法(EDTA complexometric titration, ECT)、雙硫腙比色法(Dithizone colorimetric method, DCM)、原子吸收光譜法(Atomic absorption spectrometry, AAS)和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(Inductively coupled plasma atomic emission spectrometry, ICP-AES)檢測鋅螯合能力，電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)鑒定序列。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

菜籽(Brassicanapus)：安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所；堿性蛋白酶(P4860，≥2.4 U/g)、谷胱甘肽(GSH，G4251)：Sigma-Aldrich公司；固定金屬親和層析填料(Sepharose 6 Fast Flow)：GE Healthcare公司；ZnCl2、EDTA、雙硫腙等：國藥集團化學(xué)試劑。

Analyst 800型原子吸收光譜儀：美國Perkin-Elmer公司；Optima 7300DV型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀：美國Perkin Elmer公司；AKTA Explorer 100型蛋白純化儀：美國通用電氣公司；waters 1525型高效液相色譜：美國Waters公司；Proteome X-LTQ 型LC-ESI-MS儀：美國Thermo Fisher Scientific公司；Apex 396型平行合成儀：美國Nature Gene 公司；Voyager DE PRO型基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜：美國JBI Scientific公司；WF-250型萬能粉碎機：上海藍深制藥機械有限公司。

1.2 肽-鋅(Ⅱ)螯合物的制備

改進Wu等[14]的方法制備菜籽蛋白。稱取10 g菜籽粉，添加100 mL石油醚脫脂30 min，重復(fù)3～5次，過濾取殘渣。在100 mL 70%的乙醇溶液中浸泡脫脂菜籽12 h后，過濾取殘渣用蒸餾水清洗。通過考馬斯亮藍染色鑒定沉淀物為蛋白質(zhì)，將其冷凍干燥保存。

參照He等[15]的方法水解菜籽蛋白。向菜籽蛋白溶液(4%，pH 8.0)中添加2%堿性蛋白酶。55 ℃水浴水解0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h，8 000×g離心15 min取上清液后濃縮于-80 ℃冷凍備用。TNBS法測定水解度(Degree of hydrolysis, DH)[16]。

改進Wang等[5]的方法制備肽-鋅(Ⅱ)螯合物。向5 mL肽溶液(20 mg/mL)中添加1.0 mL ZnCl2溶液(50 mg/mL)，調(diào)節(jié)pH 6.0。30 ℃下培養(yǎng)45 min后在底部形成白色沉淀物(螯合物)。8 000×g離心15 min取沉淀物。空白組以蒸餾水代替ZnCl2溶液。

1.3 鋅(Ⅱ)螯合能力的測定

采用4種方法測定鋅(Ⅱ)螯合能力，GSH(20 mg/mL)和EDTA(5 mg/mL)作為陽性對照組。(1)改進Novick[17]的EDTA絡(luò)合滴定法。測定螯合態(tài)鋅(Ⅱ)含量時，用蒸餾水溶解1.2所得沉淀物并定容至50 mL。測定總鋅(Ⅱ)時，用蒸餾水將ZnCl2和水解物的混合溶液定容至50 mL。取20 mL定容溶液，滴定?？鄢瞻捉M的鋅(Ⅱ)含量。(2)《食品中鋅的測定》(GB/T 5009.14—2003)雙硫腙比色法。(3)肽-鋅(Ⅱ)螯合物用酸消化后用25 mL的1 mol/L HCl稀釋。根據(jù)Hedberg等[18]的方法用原子吸收光譜分析。(4)參考Chope等[19]采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀測量鋅(Ⅱ)含量。含有ZnCl2和菜籽蛋白水解物的溶液作為空白組。

鋅(Ⅱ)螯合率通過公式計算：

鋅(Ⅱ)螯合率=(c樣品-c空白)/(c總-c空白)×100%

式中：c樣品，c空白和c總分別為肽-鋅(Ⅱ)螯合物、菜籽蛋白水解物、ZnCl2和菜籽蛋白水解物混合溶液的鋅含量。

1.4 鋅(Ⅱ)螯合肽的分離純化

1.4.1 IMAC-Zn2+

IMAC填料與ZnCl2溶液(50 mg/mL)混合后在30 ℃下?lián)u動螯合12 h，得到IMAC-Zn2+。用3倍柱體積含0.1 mol/L NaCl的20 mmol/L PBS(pH 7.4)沖洗去除非特異性結(jié)合鋅并平衡色譜柱。上樣(1 mL 5 mg/mL蛋白水解物)后用PBS(pH 7.4)沖洗去除未螯合肽，再用含NaCl的 PBS(pH 3.5)洗脫，獲得螯合肽濃縮冷凍備用。洗脫流速為2.0mL/min，檢測波長220 nm。

1.4.2 凝膠過濾層析

將肽組分(1.5 mL，約20 mg/mL)注入Sephadex G25層析柱(1.6 cm×50 cm)分離，柱溫條件4 ℃，蒸餾水洗脫，流速2.0 mL/min，檢測波長220 nm，所得肽組分于-20 ℃冷凍。

1.4.3 反相高效液相色譜

流速1 mL/min，檢測波長220 nm。首先進行階段I分離。流動相A：超純水，流動相B：甲醇；洗脫條件為0～30 min，流動相B從5%線性變?yōu)?0%；31～33 min，線性變?yōu)?00%；34～40 min，線性變?yōu)?%。進樣量10 μL(10 mg/mL)。將階段I所獲峰組分進行階段Ⅱ分離。流動相A：0.1%(V/V) TFA水溶液，流動相B：0.1%(V/V) TFA乙腈溶液；洗脫條件為0～5 min，流動相B保持5%；6～15 min，線性變?yōu)?5%；16～20 min，線性變?yōu)?00%。進樣量20 μL(10 mg/mL) 。

1.5 氨基酸序列測定

采用液相色譜-電噴霧離子化-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-ESI-MS)獲得質(zhì)譜數(shù)據(jù)，手動解譜，獲得氨基酸序列。

1.6 肽合成

合肥賽曼諾生物科技有限公司采用固相合成法合成4條多肽：AR，NSM，GKR，EPSH，純度大于95%。

1.7 肽的立體結(jié)構(gòu)分析

利用RasMol (http://www.openrasmol.org/software/rasmol/軟件，定位肽段在母體蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)中的位置(蛋白數(shù)據(jù)庫：http://www.rcsb.org/pdb/)。

1.8 數(shù)據(jù)分析

每個處理組進行3次獨立試驗，結(jié)果以“平均值±標準差”表示。數(shù)據(jù)顯著性采用SPSS 13.0軟件評定。

2 結(jié)果與討論

2.1 菜籽蛋白水解物的制備

研究表明多種蛋白酶的水解產(chǎn)物均具有金屬螯合能力，如堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶(葵花籽蛋白)[6]，胰蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶(狹鱈魚皮)[3]，protease M(大豆蛋白)[10]，堿性蛋白酶/Viscozyme酶/Protex 51FP酶(酵母)[9]，胃蛋白酶和胰酶(鷹嘴豆蛋白)[11]，胃蛋白酶/胰蛋白酶/堿性蛋白酶(芝麻蛋白)[5]。本研究采用70%乙醇-水溶液處理菜籽后蛋白得率約22%。多種酶水解該蛋白發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶產(chǎn)物的水解度(DH值)最高，鋅螯合潛力優(yōu)異。

注：不同字母表示在P<0.05水平上差異顯著，下同。

圖1 水解時間對水解度和鋅螯合率的影響

圖1a顯示堿性蛋白酶水解6 h過程中菜籽蛋白水解度的變化規(guī)律?？梢?，最初1 h內(nèi)DH值迅速增至17.26%。隨后2～4 h內(nèi)增速放緩，升至23.26%(增幅是0～1 h內(nèi)的41.67%)。然而，水解6 h比4 h的DH值更低(P<0.05)。圖1b為ECT法和DCM法測量水解物鋅螯合率在前4 h內(nèi)逐漸上升達到最高值，而在水解6 h時顯著降低(P<0.05)。水解物的DH值與鋅螯合率的變化規(guī)律相似，可能因為不同的水解度下所生成肽的組成不同，一定程度上影響水解物的螯合活性[5]。另外，水解6 h時檢測指標下降，可能因為蛋白酶催化的類蛋白反應(yīng)導(dǎo)致肽分子聚集，產(chǎn)生具有不同特征的新型肽[20]。因此，選擇水解4 h的菜籽蛋白水解物進行后續(xù)試驗。

2.2 鋅螯合肽的分離純化

以2.1所得水解物為底物，采用IMAC-Zn2+、Sephadex G25、RP-HPLC等分離純化鋅螯合肽。IMAC層析技術(shù)相對成熟。該技術(shù)利用多肽對基質(zhì)上所固定金屬離子的親和能力不同進行分離[21]。固定金屬通常是具有d層空價電子軌道的過渡金屬[22]，如Cu2+、Ni2+、Co2+、Zn2+、Fe3+等。

圖2 從菜籽蛋白4 h水解物中分離鋅螯合肽

圖2a顯示水解物經(jīng)過IMAC-Zn2+在pH 7.0的洗脫中收集的未螯合組分(I)和在pH 3.5時收集的鋅螯合組分(Ⅱ和Ⅲ)。降低洗脫液pH值是獲得金屬螯合肽的重要方法之一。已有研究采用該方法在pH 3.6或4.5獲得銅(Ⅱ)螯合肽[9, 23]，或獲得鐵(Ⅱ)螯合肽。Sephadex G25柱層析屬于分子量排阻層析技術(shù)，洗脫時間精確，分離效果良好，操作簡單，樣品流失少[23-24]，廣泛用于從蛋白質(zhì)水解液中分離活性肽[25-26]。圖2b為Sephadex G25分離組分Ⅱ獲得3個組分(Ⅱ-1，Ⅱ-2，Ⅱ-3)，而分離組分Ⅲ獲得2個組分(Ⅲ-1和Ⅲ-2，數(shù)據(jù)未給出)。

表1所列為IMAC-Zn2+和Sephadex G25分離所得各組分的鋅螯合率，測量方法包括ECT、DCM、AAS和ICP-AES。EDTA絡(luò)合滴定法是測量金屬離子含量的傳統(tǒng)方法之一。Zn2+，F(xiàn)e3+，Cu2+等金屬離子在酸性pH值下與EDTA絡(luò)合[17]。而雙硫腙分光光度法是測定鋅的國家標準分析方法之一。AAS和ICP-AES是食品科學(xué)，生命科學(xué)和環(huán)境科學(xué)中常用的重金屬和微量元素檢測手段[27]，de la Hoz等[9]曾采用ICP-AES分析鐵(Ⅱ)肽混合物中的鐵含量以評估酵母肽的鐵螯合能力。

表1 固定金屬親和層析和葡聚糖凝膠G25分離所得肽組分的鋅螯合率

注：肽組分，GSH和EDTA的濃度分別為20，20和5 mg/mL。ECT，DCM，AAS和ICP-AES分別代表EDTA絡(luò)合滴定法，雙硫腙比色法，原子吸收光譜法，電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法。同列中不同字母表示在P<0.05水平上差異顯著，下同。

ECT、DCM測得組分Ⅱ和Ⅲ的螯合率明顯低于未分離水解物(圖1b和圖1c)(P<0.05)。同時，DCM，AAS和ICP-AES表明組分Ⅱ和Ⅲ的鋅螯合率間沒有顯著性差異(P>0.05)，但ECT顯示組分Ⅱ的鋅螯合率較高(P<0.05)。此外，4種方法都表明組分Ⅱ-3的鋅螯合率明顯高于Ⅱ-1和Ⅱ-2(P<0.05)，但后二者間無顯著差異(P>0.05)。ECT，DCM和ICP-AES表明組分Ⅲ-1的鋅螯合率明顯高于Ⅲ-2(P<0.05)，而AAS表明組分Ⅲ-1和Ⅲ-2之間無顯著差異(P>0.05)。因此，Sephadex G25收集的組分中Ⅱ-3的鋅螯合率最高，高于GSH，但低于EDTA。另外，ECT表明組分Ⅱ-3的鋅螯合率低于未分離的菜籽蛋白水解物(RPH)(圖1b)，可能因為RPH中含有具有螯合活性的游離氨基酸，這符合已有研究結(jié)果[28]。

注：流動相含有超純水和甲醇。

圖3 RP-HPLC分離純化組分Ⅱ-3

根據(jù)表1，選擇組分Ⅱ-3進行RP-HPLC分離。圖3a為組分Ⅱ-3經(jīng)過階段I甲醇-水體系后所得組分(Ⅱ-3-1、Ⅱ-3-2、Ⅱ-3-3、Ⅱ-3-4，保留時間依次為：2.263 min、5.232 min、9.139 min、11.893 min)。隨后進行階段Ⅱ的0.1%TFA乙腈體系純化，所得四種組分(Ⅱ-3-1，Ⅱ-3-2，Ⅱ-3-3和Ⅱ-3-4)色譜鑒定為單一肽。各組分再次分別經(jīng)過色譜純化(流動相含有0.1% TFA水溶液和0.1% TFA乙腈溶液，圖譜未列出)。

2.3 鋅螯合肽的序列鑒定

采用電噴霧電離質(zhì)譜法(ESI-MS)獲得2.2所得組分的系列質(zhì)譜圖。圖4為組分Ⅱ-3-2的ESI-MS及其二級質(zhì)譜(MS/MS)圖譜。通過MS/MS檢測該活性肽的a-離子，b-離子，c-離子，x-離子，y-離子和z-離子等質(zhì)譜碎片后解析數(shù)據(jù)，獲得肽結(jié)構(gòu)序列。a-離子，b-離子，c-離子，x-離子，y-離子和z-離子碎片質(zhì)量標準如下[5]：a-離子，氨基酸的分子質(zhì)量加27；b-離子，加1；c-離子，加18；x-離子，加45；y-離子，加19；z-離子，加2。經(jīng)過人工計算，質(zhì)譜片段b3(331.13)，y2 (237.14)，b2(202.03)和a2(174.15)，分別為114+87+131+1，131+87+19，114+97+1，114+87-27。其中，114,87和131分別為N，S和M的分子質(zhì)量。最終，確定組分Ⅱ-3-2(350.90)為Asn-Ser-Met(NSM)。此外，組分Ⅱ-3-1，Ⅱ-3-3和Ⅱ-3-4分別為Ala-Arg，Gly-Lys-Arg(或Gly-Gln-Arg)和Glu-Pro-Ser-His。Lys和Gln相對分子質(zhì)量相同，分析Ⅱ-3-3的氨基酸組成，未檢出Gln(數(shù)據(jù)未列)，因此確定其序列為Gly-Lys-Arg。

圖4 鋅螯合肽的序列鑒定

序號相對分子質(zhì)量序列片段鋅螯合率/%Ⅱ-3-1245.28Ala-Arg(AR)Cruciferincru4subunit(156-157):151-ISPQEARSVK-16034.67±0.82dⅡ-3-2350.39Asn-Ser-Met(NSM)NADH-enoyl-ACPreductaseChainA(296-298):291-VDNGLNSMGV-30082.12±0.65aⅡ-3-3359.43Gly-Lys-Arg(GKR)NADH-enoyl-ACPreductase,ChainA(18-20):11-GLPIDLRGKR-2054.50±0.91cⅡ-3-4468.47Glu-Pro-Ser-His(EPSH)Cruciferinprecursor(39-42):31-QLDQLNALEPSHVLKAEAGR-5056.11±0.83b

注：*表示菜籽蛋白的氨基酸序列來自于NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)；**表示ICP-AES法測得GSH的鋅螯合率是(62.45±0.67)%。

采用固相肽合成法人工合成所得的4條肽并驗證其鋅螯合能力。表2顯示4種合成肽的結(jié)構(gòu)特征和ICP-AES法測得的鋅螯合率。這4條肽含2～4個氨基酸殘基，吻合NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫中的Brassicanapus油菜蛋白，來源于cruciferin cru4 subunit，NADH-enoyl-ACP reductase Chain A 和cruciferin precursor的蛋白序列。Ala-Arg(AR)，Gly-Lys-Arg(GKR)，和Glu-Pro-Ser-His(EPSH)經(jīng)ICP-AES檢測的鋅螯合率分別是(34.67±0.82)%，(54.50±0.91)%和(56.11±0.83)%，明顯低于Asn-Ser-Met(NSM)(82.12±0.65)%(P<0.05)。而GSH的螯合率是(62.45±0.67)% ，同樣低于NSM。因此，NSM有作為新型鋅補充劑螯合前體的應(yīng)用潛力。

酸性和堿性氨基酸殘基可能對活性肽的鐵(Ⅱ)和銅(Ⅱ)螯合能力具有重要作用[29]。Lv等[10]鑒定的五種鈣(Ⅱ)/鐵(Ⅲ)螯合肽都在N端有酸性氨基酸殘基。本研究中EPSH在N端含有1個酸性氨基酸殘基(E)，而AR和GKR在C端分別含有1個堿性氨基酸殘基(R)和2個堿性氨基酸殘基(K和R)。Torres-Fuentes等[11]研究表明鷹嘴豆螯合肽的銅(Ⅱ)螯合能力與His含量有良好的線性關(guān)系，而Guo等[3]獲得了序列為Ser-Cys-His的鐵(Ⅱ)螯合肽。本研究中EPSH有1個His殘基。

最后，利用分子結(jié)構(gòu)可視化軟件(RasMol)定位目標肽段的空間位置，如圖5所示。NADH-enoyl-ACP reductase Chain A標為綠色帶狀，目標肽NSM標為紅色的ball-and-stick模式。目標肽段NSM位于NADH-enoyl-ACP reductase Chain A蛋白的C-端無規(guī)則卷曲區(qū)域。

圖5 鋅螯合肽NSM在ADH-enoyl-ACP reductase Chain A中的模擬三維結(jié)構(gòu)(PDB代碼：1ENO)

3 結(jié)論

本研究采用堿性蛋白酶制備菜籽蛋白水解物，通過EDTA絡(luò)合滴定法、雙硫腙比色法、原子吸收光譜和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法檢測水解物的鋅螯合率。另采用色譜層析及反相高效液相色譜純化獲得四條具有鋅螯合能力的肽，借助電噴霧電離質(zhì)譜鑒定肽的序列，為開發(fā)安全高效的鋅補充劑提供了思路。

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Preparation, Purification and Structure Analysis of Rapeseed Source Zinc Chelating Peptide

Huang Jingjing1Xie Ningning1Li Bo2Cheng Jianghua1Wang Zhuochen1Yin Junfeng1Yan Xiaoming1

(Institute of Agro-products Processing, Anhui Academy of Agricultural Sciences1, Hefei 230031)(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University2, Beijing 100083)

In this study, rapeseed protein hydrolysates (RPH) obtained from rapeseed meal was hydrolyzed by alcalase and sequentially separated using IMAC-zinc2+, Sephadex G25 gel filtration and RP-HPLC. The sequences of chelating peptides were then characterized through ESI-MS. Meanwhile, the zinc-chelating rates were validated by EDTA complexion titration, dithizone chromometer method, atomic absorption spectrometry, and inductively coupled plasma atomic emission spectrometry. RPH at 4 h with the highest degree of hydrolysis and zinc-chelating ability was separated into three peptide fractions (Ⅰ, Ⅱ, and Ⅲ) after IMAC-zinc2+. What's more, the two fractions with zinc chelating abilities (II and III) were further separated into three fractions (Ⅱ-1, Ⅱ-2, and Ⅱ-3) and two fractions (Ⅲ-1 and Ⅲ-2), respectively. Among the five fractions, Ⅱ-3 showed the highest zinc-chelating ability. Moreover, four small peptides, namely, Ala-Arg (AR), Asn-Ser-Met (NSM), Gly-Lys-Arg (GKR), and Glu-Pro-Ser-His (EPSH), were obtained and identified from fraction Ⅱ-3. NSM, which exhibited the highest zinc-chelating rate, came from the cruciferin cru4 subunit, NADH-enoyl-ACP reductase chain A, and cruciferin precursor of Brassica napus protein. In conclusion, we speculated that utilizing small peptides from rapeseed protein as novel carriers for zinc supplement was feasible.

zinc, rapeseed protein hydrolysates, chelating peptides, immobilized metal affinity chromatography, alcalase

TS229

A

1003-0174(2016)06-0068-07

國家科技支撐計劃(2012BAD14B13)，安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長杰出青年基金(14B1211)，安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長青年創(chuàng)新基金面上項目(14B1253)

2014-10-11

黃晶晶，女，1988年出生，助理研究員，功能食品

謝寧寧，男，1984年出生，副研究員，生物活性肽