宋麗娜，陸洪軍，趙錦程

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

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骨金散治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究

宋麗娜1，陸洪軍1，趙錦程2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：研究骨金散治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的效果及可能的作用機(jī)制。方法：選擇3.5月齡健康清潔級(jí)雌性SD大鼠60只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)，模型對(duì)照組(B組)，低劑量治療組(C組)和高劑量治療組(D組)，每組15只，除A組外其余各組大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5 mg/kg·d建立糖皮質(zhì)激素骨質(zhì)疏松模型，連續(xù)9周，低鈣飼料正常喂養(yǎng)。A組大鼠給予全價(jià)飼料喂養(yǎng)。3周后C、D兩組大鼠開始分別按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比l mL/100g生理鹽水灌服，1次/d，A、B兩組等量生理鹽水灌服，連續(xù)服用9周。檢測(cè)大鼠體質(zhì)量、骨密度、括血清鈣(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨鈣素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降鈣素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)后各組大鼠體質(zhì)量均有增加， A組平均體質(zhì)量增加最明顯， B、C、D三組體質(zhì)量增加幅度依次為D>C>B，表明糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松大鼠模型建立成功，影響大鼠體質(zhì)量增加，骨金散治療可以緩解大鼠體質(zhì)量緩慢，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組大鼠股骨骨密度測(cè)定差異顯著，B、C、D組大鼠骨密度均低于A組，但應(yīng)用骨金散治療的C、D兩組骨密度高于B組，且使用高劑量骨金散的D組更接近A組值，可見，中藥骨金散對(duì)提高糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度有效，且隨著劑量增加療效增強(qiáng)。糖皮質(zhì)激素使B、C、D組大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標(biāo)志物骨鈣素BGP、降鈣素CT均有所下降，但C、D組在給藥骨金散后各指標(biāo)數(shù)值明顯提升，且隨著劑量的增加提升明顯，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但血清P含量變化無(wú)顯著差異(P>0.05)，血清骨吸收標(biāo)志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮質(zhì)激素后明顯升高，但給藥骨金散后數(shù)值明顯下降，且隨劑量增加，效果明顯。組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：骨金散治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松效果顯著，值得逐步轉(zhuǎn)向臨床，且骨金散可通過(guò)改善骨代謝生化指標(biāo)，增加骨含量，拮抗骨丟失，達(dá)到防治骨質(zhì)疏松的作用，這可能與其治療骨質(zhì)疏松的機(jī)制有關(guān)。

骨金散；骨代謝；骨密度；糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥(GIOP)

糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥(glucocorticoid induced osteoporosis，GIOP)是一種因?yàn)閮?nèi)源或外源糖皮質(zhì)激素導(dǎo)致的代謝性骨病[1,2]。長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素治療的患者一半以上都會(huì)發(fā)生骨質(zhì)疏松癥狀，表現(xiàn)為骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞、強(qiáng)度降低、骨折風(fēng)險(xiǎn)增加等。GIOP導(dǎo)致的骨折愈合困難，致殘率高[3]。因此，尋找預(yù)防和治療該病癥的藥物是目前醫(yī)學(xué)研究的重要課題，本研究以GIOP大鼠為研究對(duì)象，采用中藥骨金散治療，觀察骨金散的療效以及探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

選擇3.5月齡健康清潔級(jí)雌性SD大鼠60只，體質(zhì)量200～250g，平均(230±20)g，所有SD大鼠均在恒溫、恒濕的條件下喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室溫度恒定為(24±1)℃，相對(duì)濕度50%～70% ，保持環(huán)境清潔，每12h黑白交替光照，自主進(jìn)食飼料和自來(lái)水。實(shí)驗(yàn)藥物為天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司購(gòu)買的地塞米松磷酸鈉注射液(批號(hào):1101264)；佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院購(gòu)買骨金散，其主要成分為三七、血蝎、乳香、沒(méi)藥、龍骨、方蟲、桂枝等十余味中藥材，低劑量組用量為1.8 g/kg體質(zhì)量，高劑量組用量為3.6g/kg體質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)儀器為上海江萊生物科技有限公司的雌激素(E2)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，美國(guó)NORLAND的XR-2626型雙能X線骨密度儀，中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心的骨鈣素、降鈣素試劑盒，美國(guó)Harris的R-404A低溫冰箱，北京醫(yī)用離心機(jī)廠的LDZ4型微量離心機(jī)等[4,5]。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

所有實(shí)驗(yàn)大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(A組)，模型對(duì)照組(B組)，低劑量治療組(C組)和高劑量治療組(D組)，每組15只。除A組外其余各組大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5mg/kg·d建立糖皮質(zhì)激素骨質(zhì)疏松模型，連續(xù)9周，低鈣飼料正常喂養(yǎng)。A組大鼠給予全價(jià)飼料喂養(yǎng)。3周后C、D兩組大鼠開始分別按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比1mL/100g生理鹽水灌服，1次/d，A、B兩組等量生理鹽水灌服，連續(xù)服用9周。于取材前24h終止給藥，各組大鼠麻醉摘眼球取血，收集血液離心(3000 r/min，10min)，分離血清，-80℃冰箱凍存?zhèn)涔巧笜?biāo)測(cè)定，處死大鼠；取大鼠右側(cè)股骨剔除肌肉等組織，用生理鹽水紗布包裹，浸透于生理鹽水中-20℃冰箱保存，備作骨密度測(cè)定[6,7]。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)前后稱量大鼠體質(zhì)量，對(duì)大鼠離體股骨上1/3處骨采用雙能X線骨密度儀測(cè)定骨密度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果骨密度采用單位面積內(nèi)的骨礦物質(zhì)含有量表示(g/cm2)[8,9]。取血清進(jìn)行下列血生化指標(biāo)檢測(cè)，具體檢測(cè)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，包括血清鈣(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨鈣素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降鈣素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量及骨密度變化

實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)后各組大鼠體質(zhì)量均有增加， A組平均體質(zhì)量增加最明顯， B、C、D三組體質(zhì)量增加幅度依次為D>C>B，表明GIOP大鼠模型建立成功，影響大鼠體質(zhì)量增加，骨金散治療可以緩解大鼠體質(zhì)量緩慢，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組大鼠股骨骨密度測(cè)定差異顯著，B、C、D組大鼠骨密度均低于A組，但應(yīng)用骨金散治療的C、D兩組骨密度高于B組，且使用高劑量骨金散的D組更接近A組值，可見，中藥骨金散對(duì)提高GIOP大鼠的骨密度有效，且隨著劑量增加療效增強(qiáng)。見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量及骨密度變化±s，n=15)

2.2 各組大鼠骨生化指標(biāo)的變化

糖皮質(zhì)激素使B、C、D組大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標(biāo)志物骨鈣素BGP、降鈣素CT均有所下降，但C、D組在給藥骨金散后各指標(biāo)數(shù)值明顯提升，且隨著劑量的增加提升明顯，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但血清P含量變化無(wú)顯著差異(P>0.05)，血清骨吸收標(biāo)志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮質(zhì)激素后明顯升高，但給藥骨金散后數(shù)值明顯下降，且隨劑量增加，效果明顯。組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠骨生化指標(biāo)的變化±s，n=15)

3 討論

骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis)是一種骨強(qiáng)度受損、骨密度下降、骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞的系統(tǒng)性骨病，骨質(zhì)疏松患者骨折的發(fā)生率和危險(xiǎn)性都會(huì)增加，且骨折不易愈合，易反復(fù)骨折，致殘率極高。近年骨質(zhì)疏松的發(fā)病率明顯上升，已躍居世界常見病第六位，這可能與飲食習(xí)慣及食品安全有關(guān)。骨質(zhì)疏松分原發(fā)性和繼發(fā)性，繼發(fā)性骨質(zhì)疏松多為疾病或藥物副反應(yīng)引起，GIOP使發(fā)病率較高的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松，系長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素類藥物引起機(jī)體代謝異常，導(dǎo)致骨流失，骨密度下降等[10]。本研究為應(yīng)用中藥骨金散對(duì)GIOP進(jìn)行治療，觀察療效及探討可能的作用機(jī)制，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠骨密度、血清Ca、血清P、血清雌二醇E2、血清骨形成標(biāo)志物骨鈣素BGP、降鈣素CT、抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP等指標(biāo)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)骨金散可以使GIOP大鼠的骨密度、血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標(biāo)志物骨鈣素BGP、降鈣素CT含量增加，使抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP含量下降，且隨骨金散劑量變大這種作用在增強(qiáng)，因此可以判斷骨金散治療GIOP效果顯著，值得逐步轉(zhuǎn)向臨床，且骨金散可通過(guò)改善骨代謝生化指標(biāo)，增加骨含量，拮抗骨丟失，達(dá)到防治骨質(zhì)疏松的作用，這可能與其治療骨質(zhì)疏松的機(jī)制有關(guān)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨科學(xué)分會(huì).骨質(zhì)疏松骨折診療指南[J].中華骨科雜志,2008,28(10):875-878

[2]張志長(zhǎng),李菲,毛金軍,等.含中藥骨金散血清對(duì)大鼠成骨細(xì)胞OPG、RANKL mRNA表達(dá)的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2012,35(3):4-6

[3]陳珺 ,李鳳華,袁順儀,等.不同頻率糖皮質(zhì)激素骨質(zhì)疏松造模對(duì)大鼠肱骨的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(3):393-397

[4]金海英.中藥骨金散對(duì)去卵巢大鼠骨密度及細(xì)胞因子的影響[D].佳木斯大學(xué),2006

[5]沈建軍.中藥骨金散對(duì)去卵巢大鼠骨密度、骨生物力學(xué)及代謝指標(biāo)的影響[D].佳木斯大學(xué),2008

[6]徐進(jìn),丁任,石曉兵,等.中藥復(fù)骨方對(duì)糖皮質(zhì)激素致骨質(zhì)疏松骨折大鼠骨代謝及骨密度的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2016,(01):21-22,23

[7]邢亞群，王迪生，王群，等.精骨補(bǔ)腎顆粒對(duì)地塞米松誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥大鼠的保護(hù)作用[J].中成藥,2016,38(06):1221-1225

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[9]趙錦程,李菲,劉明遠(yuǎn)，等.骨金散對(duì)去卵巢大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)N-端肽、Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2012,35(2):3-4

[10]唐壯.中藥骨金散對(duì)老齡雄性小鼠骨量及骨代謝相關(guān)激素的影響[D].佳木斯大學(xué),2006

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，編號(hào)：12541820。

宋麗娜(1973～)女，黑龍江佳木斯人，本科，主管護(hù)師。

趙錦程(1964～)男，黑龍江伊春人，碩士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：zhjch1110@163.com。

R681

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1008-0104(2016)06-0029-02

2016-06-19)