劉子華，樊彩云，李鳳林，鄧新榮，徐燕華，羅志福

1.中國原子能科學(xué)研究院 同位素研究所，北京 102413；2.成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司，四川 成都 610225

125I-OxLDL-Ab在正常小鼠及動脈粥樣硬化動物模型體內(nèi)的生物分布

劉子華1，樊彩云1，李鳳林1，鄧新榮1，徐燕華2，羅志福1

1.中國原子能科學(xué)研究院 同位素研究所，北京 102413；2.成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司，四川 成都 610225

分別采用高效液相色譜法、紫外分光光度法對OxLDL-Ab進(jìn)行定性、定量分析，評價125I-OxLDL-Ab在正常動物和動脈粥樣硬化模型動物的體內(nèi)分布。正常動物采用昆明小鼠，模型采用載脂蛋白E基因敲除的小鼠(apolipoprotein E-deficient mice, ApoE-/-)。高效液相色譜條件為：磷酸緩沖液(PB, 0.2 mol/L, pH=7.4)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長220 nm；紫外分光光度法測得蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=0.664 5x-0.008 3，r2=0.999 7。125I-OxLDL-Ab在正常小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：除甲狀腺外，各器官的放射性攝取隨時間延長而減少，無明顯濃集；在注射125I-OxLDL-Ab后1 d各器官代謝消除超過2/3， 7 d后血液中完全清除。125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布實(shí)驗(yàn)中采用w=2%的KI溶液封閉了甲狀腺，消除了甲狀腺高攝取的影響；靶器官肺有較高放射性攝取，且在注射后4～8 h顯示出放射性濃集；除血外，其它各器官的靶器官/非靶器官的放射性攝取比值(T/NT)均大于1，其中T/Mu(肌肉)>8，顯示出125I-OxLDL-Ab對靶器官有一定的選擇性。標(biāo)記抗體的體內(nèi)靶向性是顯像研究中至關(guān)重要的一環(huán)，要進(jìn)一步用于動脈粥樣硬化早期顯像診斷，還需進(jìn)一步提高靶器官/非靶器官的放射性攝取比值，提高其在體內(nèi)與其抗原的親和性。

氧化低密度脂蛋白單克隆抗體；動脈粥樣硬化；125I；ApoE-/-小鼠；生物分布

動脈粥樣化屬于慢性炎癥疾病，發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，與基因相關(guān)[1]。目前的檢測方法很多，各有利弊[2-3]，多數(shù)診斷方法與動脈粥樣化的診斷無直接對應(yīng)性。介入性診斷結(jié)果準(zhǔn)確，檢查風(fēng)險大，費(fèi)用高。檢查現(xiàn)狀主要是根據(jù)病人的典型病史、臨床癥狀，并結(jié)合儀器進(jìn)行生化檢查。抗體因?yàn)槠涓咛禺愋?，廣泛地應(yīng)用到疾病的靶向診治中。放射性核素因其檢查的高靈敏度及無創(chuàng)的診療優(yōu)點(diǎn)[4]，越來越多應(yīng)用到疾病的檢查中；放射性核素標(biāo)記抗體同時具備了靶向性好、靈敏度高、檢查方便的特點(diǎn)，在臨床上應(yīng)用前景廣闊。用放射性核素標(biāo)記抗體對動脈粥樣化進(jìn)行檢查的研究為其早期診斷方案提供了一種新途徑[5]。

目前學(xué)術(shù)界公認(rèn)氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, OxLDL)在動脈粥樣硬化的形成與發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用[6]。OxLDL-Ab是一類以O(shè)xLDL作為抗原誘發(fā)自身機(jī)體免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體，針對不同位點(diǎn)的抗原決定簇產(chǎn)生的OxLDL-Ab也不同[7]。OxLDL-Ab與動脈粥樣化關(guān)系的研究表明，患者體內(nèi)OxLDL-Ab滴度與OxLDL的比值越高，動脈粥樣硬化越趨于穩(wěn)定，心腦血管疾病發(fā)生的危險性降低[8]，這可能與它對OxLDL的特異親和性相關(guān)。動脈粥樣硬化發(fā)病早期病灶處有OxLDL異常濃集，可利用OxLDL-Ab將放射性核素載帶到早期病灶-靶點(diǎn)，通過放射性核素示蹤技術(shù)獲得該疾病因子體內(nèi)分布情況，獲取病變部位和病變程度的信息，評價進(jìn)行放射性顯像診斷動脈粥樣硬化的可能性。

放射性核素123I半衰期13.27 h，發(fā)射158.97 keV(83.3%)的γ射線，可與蛋白質(zhì)等生物分子的酪氨酸殘基發(fā)生取代反應(yīng)而被鍵合到分子中，是標(biāo)記抗體、進(jìn)行體內(nèi)顯像的最佳核素之一，但因其需加速器制備，價格昂貴且半衰期短，往往用其同位素125I代替進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。125I在化學(xué)性質(zhì)上與123I幾乎相同[9]，發(fā)射能量為27.472 keV的X射線和35.492 keV的γ射線，衰變方式是軌道電子俘獲，半衰期59.407 d，對多數(shù)蛋白質(zhì)的免疫活性輻射損傷影響小，標(biāo)記物穩(wěn)定性好。

本工作對制備的125I-OxLDL-Ab[10]進(jìn)行動物體內(nèi)研究，所用OxLDL-Ab[11]分子量為900 kDa，是IgM型免疫球蛋白，以五聚體存在，由二硫鍵連接，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，抗體特異性高，與其抗原OxLDL的親和常數(shù)高達(dá)109L/mol，在體外的穩(wěn)定性和活性極佳。用125I核素標(biāo)記IgM型OxLDL-Ab的研究在國內(nèi)尚未見其它報道，本工作擬在此基礎(chǔ)上對制備的125I-OxLDL-Ab進(jìn)行定性、定量分析，評價125I-OxLDL-Ab在正常動物和模型動物ApoE-/-鼠(載脂蛋白E基因敲除的小鼠)[12-13]體內(nèi)的分布，為123I-OxLDL-Ab進(jìn)一步用于動脈粥樣硬化早期顯像診斷提供研究基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和儀器

OxLDL-Ab，由成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；1，3，4，6-四氯-3α，6α-二苯甘脲，Sigma公司；Na125I溶液，美國Perkin Elmer Life Science公司；牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)，北京國藥有限責(zé)任公司；Sephadex G-25 M凝膠過濾預(yù)裝柱(Pre-packed disposable PD-10, PD-10)，瑞典Amersham Bioscience公司；UFC510096型超濾管，美國Millipore公司；Zorbax-GF450凝膠過濾色譜柱，美國Agilent公司。昆明小鼠：健康雄性，體重20～22 g，4～5周齡，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物研究所提供(清潔級)。載脂蛋白E基因敲除的小鼠(apolipoprotein E-deficient mice, ApoE-/-)：雄性，體重18～22 g，4月齡，具有動脈粥樣硬化斑塊，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物實(shí)驗(yàn)中心提供(SPF級)。

Miniscan放射性薄層掃描儀，美國Bioscan公司；HPLC 1200型高效液相色譜儀，美國Agilent 公司；UV2450型紫外可見分光光度計，日本Shimadzu公司；RM905a活度計，中國計量科學(xué)研究院；LB-2722-2放射性色層掃描儀，德國Berthold公司；211型數(shù)字型酸度計，美國Orion research 公司；Research單道可調(diào)移液器，美國Eppendorf公司；AGBP211D型電子天平，精度為0.000 1，德國Sartorius公司。

1.2 OxLDL-Ab 的分析

1.2.1 OxLDL-Ab的純度分析 采用HPLC法對生物樣品OxLDL-Ab進(jìn)行分析。將樣品置于UFC510096型超濾管中，以3 000 r/min離心3 min，將濃縮后的抗體轉(zhuǎn)移于無菌樣品管中保存，待測。色譜條件：采用磷酸緩沖液(PB, 0.2 mol/L, pH=7.4)為流動相，流速1.0 mL/min；檢測波長220 nm，檢測時間30 min；進(jìn)樣量20 μL，平行實(shí)驗(yàn)3次。

1.2.2 OxLDL-Ab的濃度分析 采用紫外分光光度法測OxLDL-Ab樣品的濃度：準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白0.25 g，用0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的氯化鈉溶液稀釋到250 mL，精確稀釋成1 g/L標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。取9支試管編號，按表1配制系列溶液，混勻后分別測定各溶液在280 nm的吸光度，繪制吸光度-蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；取濃縮后的OxLDL-Ab樣品液約4 mL，測其280 nm處的紫外吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗體準(zhǔn)確濃度。

1.3125I-OxLDL-Ab的制備

采用Iodogen法標(biāo)記抗體，取含40 μg 1，3，4，6-四氯-3α，6α-二苯甘脲的Iodogen管，依次將OxLDL-Ab、適量的PB(pH=7.4，0.2 mol/L)、Na125I(1.3×1010kBq/L)溶液置于Iodogen管進(jìn)行取代反應(yīng)，從反應(yīng)管中移出反應(yīng)液，靜置數(shù)分鐘待活化的碘穩(wěn)定，采用凝膠過濾色譜法進(jìn)行分離純化，紙色譜法測定標(biāo)記率和放化純，采用新華1號層析紙，展開劑為80%甲醇-水體系，用放射性薄層掃描儀檢測。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

Table 1 Preparation of standard solution

No.V(標(biāo)準(zhǔn)蛋白液)/mLV(NaCl)/mLρ/(g·L-1)10.04.0020.53.50.12531.03.00.25041.52.50.37552.02.00.50062.51.50.62573.01.00.75083.50.50.87594.00.01.000

1.4125I-OxLDL-Ab在動物體內(nèi)的分布

1.4.1125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布 取正常昆明小鼠28只，隨機(jī)分為7組，每組4只，每只自尾靜脈注射100 μL125I-OxLDL-Ab(370 kBq, 2.5×1010MBq/mol)，記錄注射時間，分別于注射后4 h、8 h 、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d斷頸處死動物，取血、心、肝、脾、肺、腎、甲狀腺、血管(取左冠脈5～10 mm長)等主要臟器，稱重，測量放射性計數(shù)，經(jīng)衰變校正后計算每克組織百分注射劑量率(%ID/g )。

1.4.2125I-OxLDL-Ab在模型動物體內(nèi)的分布 實(shí)驗(yàn)前2天，給所有的實(shí)驗(yàn)小鼠飲用w=2%的碘化鉀水，封閉甲狀腺。實(shí)驗(yàn)時，取ApoE-/-動脈粥樣硬化小鼠21只，隨機(jī)分為7組，每組3只，每只自尾靜脈注射100 μL125I-OxLDL-Ab溶液(370 kBq，2.5×1010MBq/mol)，在不同時間處死動物并測量血、心、肝、脾、肺、腎、甲狀腺、血管等臟器的放射性計數(shù)，計算每克組織百分注射劑量率(%ID/g)，實(shí)驗(yàn)方法同正常動物。

2 結(jié)果與討論

2.1 OxLDL-Ab 的分析

2.1.1 OxLDL-Ab的純度分析 樣品的HPLC圖示于圖1。由圖1可知：OxLDL-Ab有兩個主要的色譜峰，第一峰保留時間為7.555 min，經(jīng)確定為OxLDL-Ab的主峰；第二峰保留時間為11.593 min，為流動相NaH2PO4的色譜峰。流動相附近有少量雜峰，因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)是按分子量大小順序出峰，可初步肯定雜質(zhì)分子量很小，接近流動相，在標(biāo)記制備中會被PD-10柱分離，不會對標(biāo)記抗體產(chǎn)生影響，該批抗體純度高。

圖1 樣品的HPLC圖Fig.1 HPLC of the sample

2.1.2 OxLDL-Ab的濃度分析 紫外分光光度法繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線示于圖2。由圖2可知，標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=0.664 5x-0.008 3，r2=0.999 7，計算得樣品的質(zhì)量濃度為0.432 g/L。

2.2125I-OxLDL-Ab的制備及評價

125I-OxLDL-Ab的標(biāo)記率和放化純度示于圖3。如圖3可知，制備的125I-OxLDL-Ab標(biāo)記率為75%，放化純度為98%，親和常數(shù)Ka=(1.06±0.25)×10-10，該純度可以進(jìn)行體內(nèi)分布研究。

2.3125I-OxLDL-Ab在動物體內(nèi)的分布

2.3.1125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布結(jié)果列入表2。由表2可知：注射后4 h甲狀腺125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率最高為(19.280±2.914)%ID/g，且在7 d后仍有(7.215±5.818)%ID/g的高攝取，說明125I-OxLDL-Ab在體內(nèi)的脫碘嚴(yán)重，甲狀腺一直有很高的125I攝取，在以后的體內(nèi)分布研究時應(yīng)消除甲狀腺高吸收的影響；125I-OxLDL-Ab的胃放射性攝取在4 h時為(15.686±2.962)%ID/g，8 h時降為(3.314±1.186)%ID/g；血液放射性攝取在4 h時為(9.611±1.295)%ID/g，1 d后僅為(2.908±0.379)%ID/g，超過三分之二的125I-OxLDL-Ab被代謝清除，到第7 d時血中計數(shù)很低，測得值為(0.062±0.013)%ID/g，說明125I-OxLDL-Ab已基本清除；除甲狀腺外，各器官的放射性攝取隨時間延長而減少，無明顯濃集。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 Calibration curve

2.3.2125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布結(jié)果列入表3。由表3可知：注射4 h后，甲狀腺中125I-OxLDL-Ab的放射性攝取為(2.080±0.111)%ID/g，且隨時間延長而降低，與其它組織器官無顯著差異，說明封閉甲狀腺避免了甲狀腺對放射性碘離子的大量吸收，使體內(nèi)的碘離子濃度增大，這可能會抑制125I-OxLDL-Ab脫碘的發(fā)生；血液中125I-OxLDL-Ab的放射性攝取在4 h時為(8.001±1.211)%ID/g，與正常動物相似，但1 d后血中放射性攝取率仍有(4.609±1.183)%ID/g，為4 h時的57%，正常動物注射后24 h時放射性攝取率降低了70%，提示模型動物血液OxLDL滴度高，OxLDL與125I-OxLDL-Ab發(fā)生分子結(jié)合而使其代謝清除變慢；注射1 d后標(biāo)記抗體在胃中放射性攝取仍有(2.757±0.488)%ID/g ，相對于注射后降低不明顯，可能跟標(biāo)記抗體在體內(nèi)的代謝途徑有關(guān)，如標(biāo)記抗體在體內(nèi)脫碘、再分布等影響。而靶器官肺的放射性攝取在注射125I-OxLDL-Ab 后4～8 h增大，在4 h時為(6.014±1.101)%ID/g，比血放射性攝取低，8 h時為(8.936±2.294)%ID/g，高于血中的值，出現(xiàn)放射性濃集，1 d后隨時間延長而攝取量降低，但僅次于血液含量，提示說明肺部毛細(xì)血管叢病變，有一定的靶向性；血管部位在4～8 h也有放射性濃集現(xiàn)象，由(4.098±0.731)%ID/g增大到(4.347±0.674)%ID/g；肝、腎等重要代謝器官125I-OxLDL-Ab放射性攝取低于血和肺；其它組織器官的值均隨時間增加而降低，除靶器官肺和甲狀腺外，注射后各時間點(diǎn)125I-OxLDL-Ab放射性攝取與正常動物體內(nèi)分布結(jié)果無明顯差異，考慮為正常代謝。

圖3 125I-OxLDL-Ab的標(biāo)記率(a)和放化純度(b)Fig.3 Labeling yield(a) and radiochemical purity(b) of 125I-OxLDL-Ab

Table 2 Biodistribution of125I-OxLDL-Ab of normal miceinvivo

組織125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率/(%ID·g-1)4h8h1d2d3d5d7d血9.611±1.2956.209±0.7332.908±0.3791.177±0.1450.525±0.5250.133±0.0420.062±0.013心2.232±0.5071.142±0.2160.516±0.0860.225±0.0290.111±0.0100.032±0.0060.017±0.003肝臟2.802±0.4411.572±0.3630.765±0.1050.363±0.0620.256±0.0130.099±0.0310.059±0.013脾2.675±0.6791.079±0.2250.511±0.0730.220±0.0400.139±0.0270.051±0.0170.027±0.008肺3.529±0.5541.883±0.4470.867±0.1640.365±0.0260.282±0.1530.063±0.0180.032±0.008腎3.190±0.5721.879±0.4140.849±0.1470.388±0.0590.211±0.0180.078±0.0170.062±0.018胃15.686±2.9623.314±1.1860.631±0.1080.197±0.0440.216±0.0360.061±0.0120.030±0.007腸2.229±0.3421.056±0.1960.327±0.0630.130±0.0150.087±0.0100.070±0.0840.014±0.002肌肉0.876±0.1020.631±0.1580.239±0.0360.357±0.5350.097±0.0190.036±0.0340.011±0.009血管4.031±0.9092.262±0.4261.090±0.2340.436±0.1350.277±0.0770.060±0.0330.042±0.020骨1.943±0.1711.120±0.2560.475±0.0630.248±0.0580.161±0.0250.089±0.0590.044±0.007甲狀腺19.280±2.914-37.272±10.94757.942±40.050-20.321±7.2837.215±5.818

注：n=4

表3125I-OxLDL-Ab在模型動物體內(nèi)的分布

Table 3 Biodistribution of125I-OxLDL-Ab of atherosclerosis miceinvivo

組織125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率/(%ID·g-1)4h8h1d2d3d5d7d血8.001±1.2116.966±1.1064.609±1.1831.091±0.2640.504±0.0750.105±0.0340.085±0.025心1.617±0.2561.258±0.3000.793±0.2130.166±0.0490.093±0.0160.019±0.0050.018±0.005肝2.688±0.5102.800±0.6851.305±0.3720.323±0.0120.144±0.0290.065±0.0080.062±0.018脾2.808±0.3903.260±0.9131.447±0.2210.266±0.0590.124±0.0180.043±0.0040.039±0.010肺6.014±1.1018.936±2.2943.876±0.6200.509±0.1190.277±0.0760.072±0.0160.057±0.014腎3.582±0.5254.381±1.3031.837±0.4810.360±0.0850.177±0.0250.055±0.0100.050±0.012胃2.243±0.4202.794±0.6842.757±0.4880.195±0.0550.100±0.0270.015±0.0030.016±0.005腸1.945±0.2412.154±0.5551.250±0.2510.150±0.0450.057±0.0150.012±0.0020.010±0.005肌肉0.581±0.0400.590±0.1200.436±0.0900.055±0.0140.030±0.0040.008±0.0010.008±0.001血管4.098±0.7314.347±0.6741.866±0.5430.395±0.1120.198±0.0460.042±0.0080.041±0.011骨1.713±0.3051.840±0.3080.762±0.1910.130±0.0310.059±0.0150.016±0.0050.015±0.003甲狀腺2.080±0.1111.804±0.3661.185±0.1540.230±0.0650.093±0.0130.120±0.0270.076±0.016

注：n=3

根據(jù)125I-OxLDL-Ab 在ApoE-/-鼠體內(nèi)分布數(shù)據(jù)，做靶器官與非靶器官放射性攝取比值(T/NT)的柱形圖，如圖4所示。由圖4可知：靶器官肺與血的T/NT比值小于1，不同時間點(diǎn)125I-OxLDL-Ab的T/Bl(血)含量比為0.462～1.300，提示動物模型血液中OxLDL抗原含量高，在下一步的斑塊顯像研究中可能會有內(nèi)源性的干擾，需采用措施排除血液中OxLDL的干擾；除血外，肺與其它器官的T/NT比值均大于1.0，其中肝、腎的T/NT較低， 3 d內(nèi)T/NT比值在1.344～3.024，這表明125I-OxLDL-Ab在靶器官肺中的靶向性較低，對以后的顯像研究可能會產(chǎn)生干擾；而靶器官與肌肉的T/Mu(肌肉)值較高，為8.149～15.370，靶向性明顯。

Bl——血，He——心，Li——肝，Sp——脾，Ve——血管，Ki——腎，St——胃，In——腸，Mu——肌肉，Bo——大腿骨，Th——甲狀腺□——4 h，■——8 h，——1 d，——2 d，——3 d，——5 d，——7 d圖4 125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的主要器官T/NT比值Fig.4 Target/nontarget ratio of 125I-OxLDL-Ab of main organs of ApoE-/- mice

2.3.3 討論 本實(shí)驗(yàn)所采用動物模型為載脂蛋白E基因缺陷的鼠，為高脂飲食型模型，屬全身性動脈粥樣硬化模型，因此對動脈粥樣硬化易發(fā)部位冠脈血管也取樣研究，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)冠脈部位沒有明顯斑塊。對比125I-OxLDL-Ab在正常動物和模型動物的體內(nèi)分布數(shù)據(jù)可知，肺在注射8 h時放射性濃集明顯(正常(1.883±0.447)%ID/g，模型(8.936±2.294)%ID/g)，血管在注射8 h時有一定放射性濃集(正常(2.262±0.426)%ID/g，模型(4.347±0.674)%ID/g)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示對于本批實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠碚f，肺、血管均為125I-OxLDL-Ab的靶部位。125I-OxLDL-Ab與其抗原OxLDL在體外的活性好，在其模型動物分布中，肺、血管等在4～8 h時有放射性濃集現(xiàn)象，顯示出125I-OxLDL-Ab在體內(nèi)的靶向性，為其作為粥樣硬化顯像藥物的研究起到積極作用。

3 結(jié) 論

采用儀器測定了OxLDL-Ab的純度和濃度，保證了原料的質(zhì)量。制備的125I-OxLDL-Ab在動脈粥樣硬化動物模型的靶器官——肺(注射后4～8 h)有放射性濃集，可進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)靶向性研究，不排除其研發(fā)為動脈粥樣硬化放射性顯像診斷劑的可能性。

致謝：感謝韓世泉、梁端鵬、葉肇云、柳銀黎、楊超一、馮婷婷等科研人員的幫助。

[1] Hansson G K. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease[J]. N Engl J Med, 2005, 352(16): 1685-1695.

[2] 張春東，勇強(qiáng)，李治安.動脈硬化的影像學(xué)檢測方法[J].心肺血管病雜志，2008,27(5):313-316.

[3] Davies J R, Rudd J H F, Weissberg P L, et al. Radionuclide imaging for the detection of inflammation in vulnerable plaques[J]. J Am Coll Cardio, 2006, 47(8 Suppl): 57-68.

[4] Zahi A F, Valentin F, Konstantin N, et al. Computed tomography and magnetic resonance imaging for noninvasive coronary angiography and plaque imaging current and potential future concepts[J]. Circulation, 2002, 106: 2026-2034.

[5] 李學(xué)斌,郭繼鴻.21世紀(jì)心血管疾病的診治展望[J].新醫(yī)學(xué)，2000,31(3)：135-137.

[6] Boullier A, Bird D A, Chang M K, et al. Scavenger receptors, oxidized LDL and atherosclerosis[J]. Ann Cad Sci, 2001, 947: 214-222.

[7] Norata G D, Tonti L, Roma P, et al. Apoptosis and proliferation of endothelial cells in early atherosclerotic lesions: possible role of oxidized LDL[J]. Nutr Metab Cardiovasc Dis, 2002, 12(5): 297-305.

[8] Shoji T, Nishizawa Y, Fukumoto M, et al. Inverse relationship between circulating oxidized low density lipoprotein (OxLDL) and anti-oxLDL antibody levels in healthy subjects[J]. Atherosclerosis, 2000, 148(1): 171-177.

[9] 盧玉楷.簡明放射性同位素應(yīng)用手冊[M].上海：上海科學(xué)普及出版社,2004:28.

[10]劉子華，鄧新榮，徐燕華，等.125I標(biāo)記氧化低密度脂蛋白抗體[J].同位素,2009,22(4):204-208.

[11]Xu Y H, Luo Z X. Development of methods for preparation of monoclonal antibody against oxidized low density lipoprotein[J]. China J Biol, 2007, 20 (9): 693-696.

[12]Plump A S, Smith J D, Hayek T, et al. Several hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells[J]. Cell, 1992, 71(10): 343-353.

[13]Ayala-Lopez W, Xia W, Varghese B, et al. Imaging of atherosclerosis in ApoE knockout mice: targeting of a folate-conjugated radiopharmaceutical to activated macrophages[J]. J Nucl Med, 2010, 51: 768-774.

Biodistribution of125I-OxLDL-Ab in Normal Mice and in Animal Models of AtherosclerosisinVivo

LIU Zi-hua1, FAN Cai-yun1, LI Feng-lin1, DENG Xin-rong1,XU Yan-hua2, LUO Zhi-fu1

1.Department of Isotope, China Institute of Atomic Energy, Beijing 102413, China；2.Chengdu Hoist Bio-tech Co. Ltd, Chengdu 610225, China

Anti-oxidized low-density lipoprotein antibody(OxLDL-Ab) was analysized with high performance liquid chromatography(HPLC) and ultraviolet spectrophotometry(UV). The biodistribution of125I-OxLDL-Ab was evaluated in both normal animals and animal models of atherosclerosis. Kunming mice were used as normal animals and ApoE knock-out mice (ApoE-/-mice) were used as animal models of atherosclerosis in the study of biodistribution. The optimum conditions of HPLC were as follows: phosphate buffer (0.2 mol/L, pH=7.4) was used as the mobile phase, the flow rate was 1 mL/min and the detection wavelength was 220 nm. The standard curve of concentration was obtained in the quantitative analysis of UV withy= 0.664 5x-0.008 3(r2=0.999 7). Biodistribution in normal animal show that organ uptakes decrease with time and no obvious accumulation is observed in organs except hypothyroid; over 2/3 uptake clear away in 24 h after injection and couldn’t be detected 7 d later. The hypothyroids of ApoE-/-mice are blocked by 2% KI solution to avoid their high uptake in the biodistribution of125I-OxLDL-Ab. Uptake in lung (the target organ) is high in the early 4-8 h after injection of125I-OxLDL-Ab. The ratio of target/organs is more than 1 except blood, and the ratio of target/muscle is more than 8, which show the selectivity of125I-OxLDL-Ab to the targeted organinvivo. Futher studies need to be done to evaluate the possibility125I-OxLDL-Ab as a SPECT imaging agent in diagnose of early stage of atherosclerosis.

OxLDL-Ab; atherosclerosis;125I ; ApoE-/-mice; biodistribution

2015-07-10；

2015-09-10

劉子華(1977—)，女，山東煙臺人，碩士，副研究員，從事放射性藥物研究

TL923

A

0253-9950(2016)06-0378-07

10.7538/hhx.2016.YX.2015064