王偉利，肖賀,2，姜蘭*，羅理，張瑞泉，譚愛(ài)萍，鄧玉婷

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部漁用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海，201306)

單次和連續(xù)藥餌投喂方式下復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的代謝消除規(guī)律

王偉利1，肖賀1,2，姜蘭1*，羅理1，張瑞泉1，譚愛(ài)萍1，鄧玉婷1

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部漁用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海，201306)

在120 mg/kg單次藥餌投喂和首劑量投喂復(fù)方磺胺嘧啶(磺胺嘧啶∶甲氧芐啶=5∶1)120 mg/kg后，再按60 mg/kg的劑量連續(xù)5 d投喂條件下，采用HPLC法研究了復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)體內(nèi)的代謝消除規(guī)律。結(jié)果顯示，單次給藥下磺胺嘧啶和甲氧芐啶在羅非魚(yú)血漿、肌肉、腎臟和肝臟中的消除半衰期(t1/2ke)分別為16.82 和5.99，23.40 和13.49，13.43和6.53，15.9和11.02 h，甲氧芐啶在各組織中的消除均快于磺胺嘧啶。給藥24 h內(nèi)，藥物在各組織中的比值(SD∶TMP)均在1～40∶1(除了腎臟4 h采樣點(diǎn)為0.71)的理想抑菌濃度范圍內(nèi)，提示5∶1給藥比例在羅非魚(yú)上使用能夠達(dá)到理想的體內(nèi)抑菌效果。血漿較組織中具有更高的比值，這與甲氧芐啶在體內(nèi)的快速分布特性一致。連續(xù)給藥情況下，磺胺嘧啶的濃度較單次給藥情況下顯著提高，甲氧芐啶的濃度較單次給藥并未顯著提高，這可能與甲氧芐啶較快的代謝速率及體內(nèi)快速分布有關(guān)。參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部NY 5070—2002號(hào)公告中對(duì)水產(chǎn)品中磺胺類(lèi)藥物總量最大殘留限量(MRL)為0.1 mg/kg，甲氧芐啶MRL為0.05 mg/kg的規(guī)定，單次給藥和連續(xù)給藥情況下，計(jì)算的休藥期結(jié)果一致，建議本實(shí)驗(yàn)條件下的休藥期不低于12 d。[中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2016,6(1):29-35]

吉富羅非魚(yú)；復(fù)方磺胺嘧啶；藥物動(dòng)力學(xué)；休藥期

磺胺類(lèi)藥物(sulfonamides，SAs) 因其具有抗菌譜廣、性質(zhì)穩(wěn)定、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用非常廣泛，常用的主要有磺胺嘧啶(sulfadiazine，SD)、磺胺間甲氧嘧啶(sulfamonmethoxine，SMM)和磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole，SMZ)等?；前奉?lèi)藥物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的豎鱗病、赤皮病、弧菌病、爛鰓病等細(xì)菌性疾病均有較好的治療效果[1]。常與抗菌增效劑甲氧芐啶(trimethoprim)合用，兩者分別通過(guò)抑制細(xì)菌四氫葉酸合成的兩個(gè)不同階段來(lái)抑制細(xì)菌繁殖，聯(lián)合使用能夠降低最小抑菌濃度(MIC)，減少耐藥菌株的產(chǎn)生，同時(shí)擴(kuò)大藥物抗菌譜[2-3]。復(fù)方磺胺嘧啶(磺胺嘧啶+甲氧芐啶)和復(fù)方甲噁唑(磺胺甲噁唑+甲氧芐啶)為最常用的組方。獸醫(yī)體外藥敏實(shí)驗(yàn)表明，磺胺類(lèi)藥物∶甲氧芐啶在1～40∶1范圍內(nèi)具有較好的抗菌效果，而20∶1為最佳抗菌比例[4]。為了達(dá)到理想的治療效果，獸醫(yī)臨床上常將磺胺類(lèi)藥物與甲氧芐啶以質(zhì)量比5∶1的比例合用[5-6]。該比例同樣被使用于水產(chǎn)動(dòng)物，但未見(jiàn)文獻(xiàn)資料描述其合理性。鑒于水生動(dòng)物與恒溫動(dòng)物生理特性的巨大不同，該給藥比例可能并非水生動(dòng)物的最佳方式。

吉富羅非魚(yú) (Oreochromisniloticus)俗稱(chēng)非洲鯽魚(yú)，被譽(yù)為未來(lái)動(dòng)物性蛋白質(zhì)的主要來(lái)源之一，是世界水產(chǎn)業(yè)重點(diǎn)培養(yǎng)的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，也是中國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖品種[7]。在高密度工廠(chǎng)化養(yǎng)殖過(guò)程中，羅非魚(yú)經(jīng)常受到各種細(xì)菌性疾病的侵害，磺胺類(lèi)藥物是常用的防控細(xì)菌病害的水產(chǎn)國(guó)標(biāo)藥物之一。藥物的不合理使用，致使?jié)O藥殘留問(wèn)題成為目前中國(guó)水產(chǎn)品出口貿(mào)易中的重要障礙[8]，藥動(dòng)學(xué)研究是指導(dǎo)科學(xué)合理用藥的主要依據(jù)。磺胺類(lèi)藥物在水生動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究報(bào)道較多，如磺胺嘧啶在歐洲鰻鱺[9]體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，磺胺二甲嘧啶(DVD)在大菱鲆[10]和銀鯽[11]體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，磺胺甲噁唑(SMZ)在草魚(yú)[12]和羅非魚(yú)[13]體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，磺胺間甲氧嘧啶(SMM)在羅非魚(yú)[14]體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究等，但均為單一藥物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的藥代研究，復(fù)方磺胺藥物的研究報(bào)道較少，涉及到藥物體內(nèi)合理比例的研究?jī)H見(jiàn)肖賀等[15]對(duì)復(fù)方磺胺嘧啶在羅非魚(yú)血漿中的比值進(jìn)行了探討。其研究通過(guò)對(duì)不同溫度下血漿中藥物比例的討論，表明溫度對(duì)于合理的給藥間隔、藥物在體內(nèi)比值有重要影響，但其研究中并未涉及不同組織中的藥物代謝情況；在生產(chǎn)實(shí)踐中，復(fù)方藥物各個(gè)組分在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)，尤其是病灶部位的比例和濃度對(duì)于疾病的治療至關(guān)重要。本研究通過(guò)對(duì)復(fù)方藥物的藥物代謝規(guī)律及給藥比例進(jìn)行了探討，研究結(jié)果對(duì)于優(yōu)化給藥方案、提高治療效果、保障食品安全均具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 吉富羅非魚(yú)

健康實(shí)驗(yàn)吉富羅非魚(yú)200尾，購(gòu)自珠江水產(chǎn)研究所水產(chǎn)養(yǎng)殖基地，平均體質(zhì)量為(150±10)g，經(jīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行抽檢表明魚(yú)體組織不含復(fù)方磺胺嘧啶組分。購(gòu)入后使用不含任何藥物的全價(jià)飼料在實(shí)驗(yàn)暫養(yǎng)魚(yú)池(150 cm×400 cm)內(nèi)飼喂15 d。

1.1.2 藥品與試劑

磺胺嘧啶(sulfadiazine, SD)對(duì)照品，200 mg，含量100%，批號(hào)H036110；甲氧芐啶(trimethoprim, TMP)對(duì)照品，200 mg，含量100%，批號(hào)H0160704；均購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。SD原粉，純度為98%，批號(hào)611205007，購(gòu)自佛山市南海北沙制藥有限公司；TMP原粉，純度為98%，批號(hào)A-10111211006，購(gòu)自壽光富康制藥有限公司。乙腈和甲醇均為色譜純，購(gòu)自迪馬公司；三乙胺、乙酸乙酯和磷酸均為分析純，購(gòu)自廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)。

1.1.3 儀器與設(shè)備

美國(guó)Waters 2695高效液相色譜儀，配備2998紫外檢測(cè)器；美國(guó)Organomation Associate公司氮吹濃縮儀；梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司分析天平；德國(guó)Sigma公司臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)；德國(guó)IKA公司MS3型振蕩器和T18型均質(zhì)機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)魚(yú)的馴養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)魚(yú)首先在實(shí)驗(yàn)水池內(nèi)經(jīng)15 d的暫養(yǎng)后，篩選分組至供氧充足的實(shí)驗(yàn)魚(yú)缸內(nèi)，采用加熱棒逐步升至28 ℃。

1.2.2 藥餌的制備

按5∶1(m/m)的比例稱(chēng)取適量磺胺嘧啶和甲氧芐啶原粉混勻，與適量吉富羅非魚(yú)粉料攪拌均勻。添加適量的蒸餾水揉制成團(tuán)，分別稱(chēng)重制備成磺胺嘧啶和甲氧芐啶含量為5%和1%的藥餌顆粒。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)吉富羅非魚(yú)按6尾/組，分為10組，給藥前1 d停飼。按復(fù)方磺胺嘧啶劑量為120 mg/kg[16]單次藥餌飼喂，給藥過(guò)程中不再飼喂飼料；另取6尾飼以空白飼料作對(duì)照。分別于給藥后0.5、1、2、4、6、8、10、24、48和72 h采集吉富羅非魚(yú)血液、肌肉、肝臟和腎臟樣品?？瞻讓?duì)照組樣品于72 h后采集。

藥物殘留實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)吉富羅非魚(yú)按6尾/組，分為7組，給藥前1 d停飼。按復(fù)方磺胺嘧啶劑量為120 mg/kg 首次藥餌飼喂后，再按復(fù)方磺胺嘧啶劑量為60 mg/kg[16]連續(xù)飼喂5 d，給藥過(guò)程中不再飼喂飼料；另取6尾吉富羅非魚(yú)飼以空白飼料作對(duì)照；分別于給藥后6 h，及1、2、3、5、7和9 d采集肌肉樣品?？瞻讓?duì)照組樣品于9 d后采集。

血漿樣品使用5 000 r/min離心5 min，吸取上層血漿置于新的離心管中。血漿及組織樣品均置于-20℃冰箱中保存。

1.2.4 色譜條件

色譜柱為T(mén)hermo BDS Hypersil C18，150 mm×4.6 mm。檢測(cè)波長(zhǎng)：SD檢測(cè)波長(zhǎng)為266 nm，TMP檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm。流動(dòng)相為乙腈:水(含0.15%三乙胺和0.15%磷酸)=13∶87(V/V)[17]，流速為1 mL/min，進(jìn)樣量為20 μL，柱溫為35 ℃。

1.2.5 樣品處理方法

參考農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-12-2007[18]，優(yōu)化后使用。

血漿樣品：取1.0 mL血漿樣品至10 mL離心管中，添加3 mL乙腈，振蕩1 min，5 000 r/min離心5 min，取上清液，40 ℃水浴下氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.0 mL流動(dòng)相溶解，0.22 μm針孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)檢測(cè)。

肌肉、肝臟、腎臟組織的處理方法：稱(chēng)取2 g肌肉組織(1 g肝臟組織或0.5 g腎臟組織)置于50 mL離心管，添加20 mL乙酸乙酯萃取，均質(zhì)1 min，5 000 r/min離心5 min，取上清液，下層殘?jiān)褂?0 mL乙酸乙酯重復(fù)萃取一次，合并上清液于40 ℃水浴中氮?dú)獯蹈伞Ｊ褂?.0 mL流動(dòng)相溶解，10 mL正己烷除脂后，經(jīng)0.22 μm針孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)檢測(cè)。

1.2.6 回收率的確定

準(zhǔn)確取1.0 mL血漿或定量的組織樣品(2.0 g肌肉、1.0 g肝臟或0.5 g腎臟)，分別添加標(biāo)樣制得0.02、1.00、10.00 mg/L(或mg/kg)的加標(biāo)樣品，每個(gè)濃度做4個(gè)重復(fù)。按照1.2.5方法進(jìn)行處理，測(cè)定方法的平均回收率及標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.7 線(xiàn)性關(guān)系與檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)的確定

準(zhǔn)確取1.0 mL血漿或組織樣品(2.0 g肌肉、1.0 g肝臟或0.5 g腎臟)，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，分別加入復(fù)方磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)液，制備0.005、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、5.000和10.000 mg/L(或mg/kg)的混標(biāo)樣品(n=4)。按照1.2.5方法處理，制備工作曲線(xiàn)。以3倍信噪比為檢測(cè)限，以10倍信噪比為定量限。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)Winnonlin 6.1軟件(美國(guó)Pharsight公司)擬合；休藥期采用WT1.4軟件(德國(guó)，獸醫(yī)產(chǎn)品委員會(huì))計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 線(xiàn)性范圍、回收率、檢測(cè)限及定量限

采用在魚(yú)體各組織勻漿中加標(biāo)制備復(fù)方磺胺嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，兩種藥物在0.05～10.00 mg/L(或mg/kg)的范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，R2均大于0.99(見(jiàn)表1)。

表1 吉富羅非魚(yú)各組織中磺胺嘧啶(SD)和甲氧芐啶(TMP)測(cè)定的線(xiàn)性范圍、相關(guān)系數(shù)、平均回收率、檢測(cè)限及定量限

Tab.1 The range of linearity, relevant coefficient, average recovery,LOD and LOQ of sulfadiazine and trimethoprim in GIFT

組織Tissue藥物Drug線(xiàn)性范圍/(mg·L-1或mg·kg-1)Rangeoflinearity相關(guān)系數(shù)(R2)Relevantcoeffi-cient平均回收率/%Averagerecov-ery檢測(cè)限/(mg·L-1或mg·kg-1)LOD定量限/(mg·L-1或mg·kg-1)LOQ血漿磺胺嘧啶0.05～10.000.998785±1.520.0050.05肌肉磺胺嘧啶0.05～10.000.993881±2.130.010.05肝臟磺胺嘧啶0.05～10.000.998371±3.530.010.05腎臟磺胺嘧啶0.05～10.000.997583±2.670.010.05血漿甲氧芐啶0.10～10.000.999383±2.630.020.10肌肉甲氧芐啶0.10～10.000.994079±1.930.050.10肝臟甲氧芐啶0.10～10.000.998358±2.730.050.10腎臟甲氧芐啶0.10～10.000.998765±2.690.050.10

2.2 復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥-時(shí)曲線(xiàn)

按照120 mg/kg劑量單次藥餌飼喂實(shí)驗(yàn)吉富羅非魚(yú)后,發(fā)現(xiàn)磺胺嘧啶在其肝臟和腎臟組織中的藥-時(shí)曲線(xiàn)有雙峰現(xiàn)象，首次達(dá)峰時(shí)間要早于血液和肌肉組織；首次峰值之后藥物濃度迅速下降，之后又形成第二個(gè)峰值。血液和肌肉組織的藥-時(shí)曲線(xiàn)未見(jiàn)雙峰?；前粪奏ぴ诩涣_非魚(yú)各組織的藥-時(shí)曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。甲氧芐啶在吉富羅非魚(yú)肝臟和腎臟中的達(dá)峰時(shí)間同樣早于血漿和肌肉組織，但未見(jiàn)雙峰現(xiàn)象(圖2)。

圖1 單次飼喂后磺胺嘧啶(SD)在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥-時(shí)曲線(xiàn)Fig.1 Concentration-time curve ofsulfadiazine in GIFT at single dose

圖2 單次飼喂后甲氧嘧啶(TMP)在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥-時(shí)曲線(xiàn)Fig.2 Concentration-time curve oftrimethoprim in GIFT at single dose

2.3 復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

在28 ℃下，磺胺嘧啶和甲氧芐啶在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥動(dòng)參數(shù)見(jiàn)表2。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)顯示，磺胺嘧啶在肝臟和腎臟中的第一次達(dá)峰時(shí)間分別為1和2 h，第二次達(dá)峰時(shí)間分別為8和10 h；血漿(tmax=10.0)和肌肉(tmax=6.0)達(dá)峰時(shí)間(tmax)與肝腎組織的第二次達(dá)峰時(shí)間大致相當(dāng)；磺胺嘧啶在各組織中的達(dá)峰濃度(Cmax)：肝臟>腎臟>血漿>肌肉，對(duì)應(yīng)的吸收半衰期(t1/2ke)分別為：15.92、13.43、16.82和23.40 h，肌肉中藥物消除最慢。甲氧芐啶在各組織中的Cmax：肝臟>腎臟>肌肉>血漿，腎臟中藥物消除最快。甲氧芐啶在各組織中的消除(t1/2ke)均快于磺胺嘧啶。

2.4 吉富羅非魚(yú)體內(nèi)SD與TMP的含量比

28oC下單次給藥后24 h內(nèi)，除4 h所取的腎臟組織外，吉富羅非魚(yú)各組織測(cè)得的SD與TMP含量的比值均在1～40的理想抑菌范圍內(nèi)[4]。血漿中比值隨時(shí)間延長(zhǎng)顯著增大，其他組織(肌肉、肝臟和腎臟)24 h內(nèi)的比值顯著低于血漿中比值。

表2 28oC單次給藥后磺胺嘧啶(SD)和甲氧芐啶(TMP)在吉富羅非魚(yú)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

Tab.2 Pharmacokinetics parameter of sulfadiazine and trimethoprim in GIFT following single oral administration at 28 ℃

參數(shù)Parameter單位Unit血漿Plasma肌肉Muscle腎臟Kidney肝臟LiverSDTMPSDTMPSDTMPSDTMP吸收半衰期t1/2kah3.052.111.230.67消除半衰期t1/2keh16.825.9923.4013.4913.436.5315.9211.02達(dá)峰時(shí)間tmax1h10.06.046.012.032.003.641.003.45達(dá)峰時(shí)間tmax2h10.008.00峰濃度Cmax1mg·L-1或mg·kg-122.432.4515.675.0434.9012.8541.3013.44峰濃度Cmax2mg·L-1或mg·kg-125.4639.70表觀(guān)曲線(xiàn)下面積AUCmg·L-1·h851.6242.37585.38196.03713.69178.32593.8214.25清除率CL/FL·kg-1·h-10.120.390.020.090.090.160.060.23

注：Cmax為最大濃度；tmax為峰濃度時(shí)間；AUC為藥物濃度時(shí)間曲線(xiàn)下面積；CL/F為總體清除率；t1/2ka為吸收半衰期；t1/2ke為消除半衰期。

表3 吉富羅非魚(yú)不同組織中磺胺嘧啶(SD)與甲氧芐啶(TMP)含量的比值

Tab.3 Ratios of sulfadiazine vs trimethoprim in GIFT

時(shí)間/hTime血漿Blood肌肉Muscle肝臟Liver腎臟Kidney0.512.763.014.353.8616.922.355.881.3926.544.552.363.2046.933.951.190.7168.193.601.111.191010.353.592.352.742422.612.354.161.964835.603.4919.370.96

2.5 復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)肌肉中的殘留消除

復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)肌肉的消除曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。連續(xù)給藥情況下SD的含量較單次給藥顯著提高，而連續(xù)給藥情況下TMP濃度較單次給藥上升不明顯，肌肉中SD和TMP消除趨勢(shì)一致，分別于給藥后 168和 72 h后，低于方法檢測(cè)限。參考中國(guó)農(nóng)業(yè)部NY 5070—2002號(hào)公告[19]對(duì)磺胺類(lèi)藥物在水產(chǎn)品中的最大殘留限量(MRL)為0.1 mg/kg，TMP的MRL為0.05 mg/kg的規(guī)定，使用軟件 WT 1.4計(jì)算復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)肌肉組織中的休藥期，連續(xù)給藥與單次給藥情況下一致，均不低于12 d。

圖3 復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)肌肉的消除曲線(xiàn)Fig.3 Elimination curve of sulfadiazine andtrimethoprim in muscle of GIFT

3 討論

3.1 復(fù)方磺胺嘧啶的吸收特點(diǎn)

本研究中血漿、肝臟和腎臟中的藥物濃度與肌肉中的藥物濃度相比始終保持較高水平。這與林麗聰?shù)萚9]報(bào)道的磺胺嘧啶在歐洲鰻鱺(Anguillaanguilla)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果和艾曉輝等[11]報(bào)道的磺胺二甲嘧啶在銀鯽(Carassiusauratusgibelio)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果均是一致的。肌肉組織中SD的含量較低，這可能與SD在肌肉組織中的乙?；潭容^高有關(guān)[20]。連續(xù)給藥情況下，肌肉中SD的含量顯著提高，TMP的含量較單次給藥并未明顯提高，這可能與TMP在動(dòng)物體內(nèi)的快速分布有關(guān)[21-22]。SD在吉富羅非魚(yú)肝臟和腎臟組織中發(fā)現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，推測(cè)SD在吉富羅非魚(yú)肝臟中存在“首過(guò)效應(yīng)”。這種現(xiàn)象同樣出現(xiàn)于SD在虹鱒魚(yú)(Oncorhynchusmykiss)[23]和歐洲鰻鱺[9]體內(nèi)代謝規(guī)律中；另外，磺胺間甲氧嘧啶在羅非魚(yú)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[14]及磺胺二甲嘧啶在銀鯽體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[11]中也均有發(fā)現(xiàn)。但同樣為磺胺二甲嘧啶，張長(zhǎng)坤等[10]在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)體內(nèi)則未發(fā)現(xiàn)雙峰現(xiàn)象。腸肝循環(huán)和多部位吸收被認(rèn)為是產(chǎn)生多峰現(xiàn)象最可能的機(jī)制。周懷梧[24]認(rèn)為，攝入的藥量與雙峰現(xiàn)象有顯著相關(guān)性。至于僅有部分藥物，在部分組織中有雙峰現(xiàn)象，分析首先是藥物本身的特點(diǎn)，其次可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬特點(diǎn)有關(guān)。藥動(dòng)學(xué)中的多峰現(xiàn)象，對(duì)于藥物的作用強(qiáng)度及消除過(guò)程有著顯著的影響，加強(qiáng)對(duì)其的研究，可以對(duì)生產(chǎn)用藥提出更合理的建議。

3.2 復(fù)方磺胺嘧啶吸收與消除的種屬差異

本研究中，在28 ℃下，SD/TMP在吉富羅非魚(yú)的tmax為10.0/6.04 h，t1/2ke為16.82/5.99 h。而韓冰等[25-26]發(fā)現(xiàn)20 ℃下，SMZ/TMP在鯽魚(yú)血漿的tmax為5.4/2.6 h，t1/2ke為26.9/27.3 h，同樣條件下，SMZ/TPM在松浦鏡鋰血漿的tmax為2/2.24 h，t1/2ke為50.97/8.35 h；艾曉輝等[12]發(fā)現(xiàn)，28 ℃時(shí)SMZ在草魚(yú)血漿的tmax為2.06 h，t1/2ke為31.94 h；林麗聰?shù)萚9]發(fā)現(xiàn)，25 ℃時(shí)SD在歐洲鰻鱺血漿中的tmax為21.5 h，t1/2ke為100.51 h。這說(shuō)明同類(lèi)藥物或相同藥物在不同魚(yú)體間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在較大的差異。由于實(shí)驗(yàn)魚(yú)的品種和大小、溫度等均有差異，難以確定哪些是最主要的決定因素[27]，但相關(guān)參數(shù)均大于陸生動(dòng)物體內(nèi)的研究結(jié)果。復(fù)方磺胺在陸生動(dòng)物體內(nèi)的吸收和消除遠(yuǎn)快于水生動(dòng)物。如VAN等[28]發(fā)現(xiàn)，在口服給藥后，TMP/SD在馬體內(nèi)(血液)的tmax為3.17/1.83 h,t1/2ke為4.43/12.38 h；BAERT等[5,29]研究發(fā)現(xiàn)，TMP/SD在豬和火雞體內(nèi)的tmax分別為1.80/2.19 h和1.42/1.64 h,t1/2ke分別為2.73/2.63 h和2.23/3.71 h；Abu-basha等[17]研究發(fā)現(xiàn)，TMP/SD在鴕鳥(niǎo)體內(nèi)的tmax為3.27/2.47 h,t1/2ke為3.83/10.96 h。復(fù)方磺胺在水生動(dòng)物體內(nèi)較恒溫動(dòng)物體內(nèi)達(dá)峰時(shí)間晚，而消除較慢，這可能與水生動(dòng)物的基礎(chǔ)代謝遠(yuǎn)低于恒溫動(dòng)物有關(guān)。該差異體現(xiàn)了水產(chǎn)動(dòng)物與畜禽的顯著不同，因此需要更多的研究來(lái)指導(dǎo)水產(chǎn)用藥，而不能簡(jiǎn)單的借鑒畜禽用藥。

3.3 不同動(dòng)物SD/TMP的比值差異

復(fù)方藥物不同組份之間的比值，對(duì)于療效有重要影響。研究認(rèn)為，SD與TMP的質(zhì)量濃度比值在1～40∶1范圍內(nèi)具有較好的抗菌效果，20∶1 為最佳的抗菌比例[4]。本研究中，SD和TMP的消除半衰期(t1/2ke)分別為血漿16.82/5.99 h，肌肉23.40/13.49 h，肝臟15.92/11.02 h和腎臟13.43/6.53 h，SD的消除半衰期均長(zhǎng)于TMP的消除半衰期，因此，隨著時(shí)間的推移，SD/TMP的比值逐漸升高；這與Abu-Basha 等[17]在鴕鳥(niǎo)和Baert等[5]在火雞體內(nèi)的研究結(jié)果變化趨勢(shì)一致，但后兩者的比值明顯偏大，分別為>45∶1和60～85∶1，本研究中，SD與TMP的含量比值在1～40∶1的理想抑菌范圍內(nèi)，但未能維持20∶1最佳的抗菌比例。這說(shuō)明對(duì)于不同種屬動(dòng)物，復(fù)方藥物的應(yīng)用比例可能需要調(diào)整，而將SD與TMP以5∶1(m/m)比例混合投喂吉富羅非魚(yú)，是可行的。

3.4 藥物的殘留消除

近年來(lái)，日本、歐盟、美國(guó)等主要進(jìn)口國(guó)對(duì)水產(chǎn)品質(zhì)量安全要求越來(lái)越嚴(yán)格?；前奉?lèi)藥物由于殘留時(shí)間長(zhǎng)，而在生產(chǎn)應(yīng)用中受到一定的限制。參考中國(guó)農(nóng)業(yè)部NY 5070—2002號(hào)公告對(duì)水產(chǎn)品中磺胺類(lèi)藥物的 MRL 0.1 mg/kg，甲氧芐啶的 MRL 0.05 mg/kg的規(guī)定，模擬生產(chǎn)實(shí)踐中連續(xù)用藥情況，在本研究條件下，復(fù)方磺胺嘧啶在吉富羅非魚(yú)可食性組織肌肉中的休藥期應(yīng)不低于12 d?？紤]到藥物在體內(nèi)的消除受諸多因素的影響，如養(yǎng)殖環(huán)境、健康狀況、飼料、水溫等，在不同條件下休藥期應(yīng)該相應(yīng)調(diào)整。

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Pharmacokinetic and residues of compound sulfadiazine in GIFT(Oreochromis niloticus) at single and multiple dosage

WANG Weili1, XIAO He1,2, JIANG Lan1*, LUO Li1, ZHANG Ruiquan1,TAN Aiping1, DENG Yuting1

(1.Key Laboratory of Fishery Drug Development, Ministry of Agriculture； Guangdong Key Laboratory of Aquatic AnimalImmune Techniques; Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangdong 510380,China;2.College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

HPLC method was used to study the pharmacokinetics and tissue residual of compound sulfadiazine (sulfadiazine∶ trimethoprim =5∶1) in GIFT after a single dose of 120 mg/kg body weight or an initial dose of 120 mg/kg body weight following a 5 d consecutive dose of 60 mg/kg body weight. Result showed: The elimination half-life (t1/2 ke) in plasma, muscle, kidney and liver were 16.82 and 5.99, 23.40 and 13.49, 13.43 and 6.53, 15.9 and 11.02 h for sulfadiazine and trimethoprim at single-dose, respectively. Trimethoprim was more quickly eliminated than sulfadiazine in all the tissues. The ratio of SD∶TMP were between the optimal ratio of 1～40∶1 within 24 h in each group (expect 0.71 at 4 h in kidney), which indicated the rationality dosage of compound sulfadiazine in GIFT. The ratio was higher in plasma than in tissues, which was consistent with the rapid distribution characteristics of TMP. The concentration of sulfadiazine in multiple dosage had improved significantly than that in single-dose, while the concentration did not increase significantly for TMP. This may be related to the faster metabolism and rapid distribution of TMP. According to the MRL of 0.1 mg/kg for sulfonamides and 0.05 mg/kg for trimethoprim in fishes in the NY 5070—2002 Announcement issued by the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China, the withdrawal time should not be less than 12 d under this experiment condition. [Chinese Fishery Quality and Standards, 2016, 6(1):29-35]Key words:GIFT Nile Tilapia (Oreochromisniloticus); compound sulfadiazine; pharmacokinetics; withdrawal periodCorresponding author:JIANG Lan, fanjianglan@hotmail.com

2015-06-18；接收日期：2015-10-12

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201203085)；廣東省魚(yú)病防治專(zhuān)項(xiàng)資金(2012年)

王偉利(1978-)，男，碩士，助理研究員，研究方向?yàn)樗幬飫?dòng)力學(xué)，yihui-w@163.com 通信作者：姜蘭，研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)病害防治，fanjianglan@hotmail.com

S948

A

2095-1833(2016)01-0029-07