荊廣會(huì)，楊 杰，紀(jì)新超，鐘 月，張?jiān)?，王艷嬌*

（沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

長效注射劑的含量和釋放度測定方法的建立

荊廣會(huì)，楊 杰，紀(jì)新超，鐘 月，張?jiān)?，王艷嬌*

（沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

目的建立用紫外可見分光光度計(jì)測定帕潘立酮棕櫚酸酯長效納米混懸注射劑的含量和體外釋放度的方法。方法混懸液采用濕法研磨技術(shù)制備，含量測定溶液為四氫呋喃-N,N-二甲基甲酰胺（體積比5∶95），釋放介質(zhì)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.489%聚山梨醇酯20的1 mmol·L-1鹽酸溶液900 mL，檢測波長為280 nm。結(jié)果在含量測定溶液中，帕潘立酮棕櫚酸酯的質(zhì)量濃度在20.0～60.0 mg·L-1內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=1.36×10-2ρ + 2.68×10-2(r=0.999 9)，回收率在98%～102%內(nèi)，精密度的RSD均小于2%(n=6)；在釋放介質(zhì)中，帕潘立酮棕櫚酸酯的質(zhì)量濃度在6.0～40.0 mg·L-1內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為A = 1.45×10-2ρ + 9.1×10-3(r=0.999 9)，帕潘立酮棕櫚酸酯在釋放介質(zhì)中8 h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論該方法操作簡單快捷，準(zhǔn)確性和重復(fù)性較好，可用于測定帕潘立酮棕櫚酸酯制劑的含量和釋放度。

藥劑學(xué)；長效混懸注射劑；紫外分光光度法；帕潘立酮棕櫚酸酯；含量測定；體外釋放度

精神分裂癥的致殘率很高，在精神性障礙中十分常見，在全世界范圍內(nèi)的患病率達(dá)到1%左右，是最為嚴(yán)重的精神疾病類型。已有的流行病學(xué)研究表明，我國的精神分裂癥終生的患病率有0.645%[1]。利培酮長效注射劑是第一個(gè)第二代抗精神病藥的長效注射劑，帕潘立酮（9-羥基利培酮）是利培酮的活性代謝物，最初被開發(fā)為長效口服制劑[2]。帕潘立酮長效注射劑以其棕櫚酸鹽的形式被開發(fā)為水性納米混懸注射液，給藥方式為肌肉注射（三角肌或臀?。o藥周期為每月一針。長周期的給藥方式不僅可讓藥物成分在患者體內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定釋放，保證穩(wěn)定的血漿藥物濃度，還能降低不良反應(yīng)，使藥效持續(xù)數(shù)周。此外，由于此種療法不必每日服藥，隱私保護(hù)大大增強(qiáng)，患者依從性大大提高，因此還可保證持續(xù)治療，從而預(yù)防復(fù)發(fā)[3-5]。目前，帕潘立酮棕櫚酸酯長效注射劑為進(jìn)口制劑，其含量的測定方法主要是進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)號：JX20100263）中規(guī)定的HPLC法，除對色譜柱的要求高外，還需使用梯度洗脫的方式，并且流動(dòng)相中含乙酸銨鹽，測定起來非常麻煩。本研究旨在建立帕潘立酮棕櫚酸酯含量測定的紫外分光光度法，以期為測定帕潘立酮棕櫚酸酯納米混懸液的含量和釋放度提供一種快捷、簡便、準(zhǔn)確性高并且經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法。帕潘立酮棕櫚酸酯（paliperidone palmitate，PP）的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。

Fig. 1 The chemical structure of paliperidone palmitate圖1 帕潘立酮棕櫚酸酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 儀器與材料

FA1104電子分析天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司），DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義予華儀器制備有限公司），T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），耐馳實(shí)驗(yàn)室砂磨機(jī) MiniZeta 03 E、0.4～0.6 mm氧化鋯 ZrO2 研磨珠(NETZSCH (Shanghai) Machinery and Instruments Co., Ltd., Selb, Germany)，ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀（天津天大天發(fā)科技有限公司），BT-9300S激光粒度儀（丹東百特儀器有限公司）。

帕潘立酮棕櫚酸酯（自制，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞99%），聚山梨醇酯20（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），聚乙二醇 4000（天津柯繆化學(xué)試劑有限公司），檸檬酸（天津博迪化工股份有限公司）無水磷酸氫二鈉、氫氧化鈉（天津瑞金特化學(xué)品有限公司），磷酸二氫鈉（西隴化工股份有限公司），娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 納米混懸液的制備

稱取聚山梨醇酯2.4 g、聚乙二醇4000 6.0 g、檸檬酸1 g和磷酸緩沖鹽適量，加至200 mL娃哈哈純凈水中，磁力攪拌下溶解作為研磨介質(zhì)。稱取帕潘立酮棕櫚酸酯 31.2 g，在攪拌條件下，加至研磨介質(zhì)中，繼續(xù)攪拌 30 min，使溶液充分浸潤藥物。將藥物與介質(zhì)溶液的初混合液加到MiniZeta研磨機(jī)中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1，控制研磨時(shí)間，使藥物體積徑的粒徑在d（0.1）為0.3～0.6 μm，d （0.5）為0.9～1.4 μm，d（0.9）為2.0～4.4 μm內(nèi)。粒徑分布圖見圖2。

Fig. 2 The particle size distribution of paliperidone palmitate suspension injection圖2 帕潘立酮棕櫚酸酯納米混懸注射液的粒徑分布

光學(xué)顯微鏡下觀察粒子在研磨前后的形態(tài)發(fā)現(xiàn)：研磨前帕潘立酮棕櫚酸酯的原料藥是層片狀晶體，形狀類似菱形；研磨后藥物粒子大小均勻，沒有聚集現(xiàn)象，呈類球狀(圖3)。一月后觀察研磨液的形態(tài)和粒子狀態(tài)發(fā)現(xiàn)，粒子略有沉降，經(jīng)搖勻后測定粒徑，其粒徑變化不大，釋放度測定結(jié)果也沒有明顯變化，說明所制得的研磨制劑穩(wěn)定可靠（表1、2）。

Fig. 3 The shapes of paliperidone palmitate particles before(A) and after(B) grinding圖3 帕潘立酮棕櫚酸酯在研磨前(A)、后(B)的粒子形狀變化

Table 1 The size of ground paliperidone palmitate particles before and after 1 month storage表1 一月前后研磨液的粒徑變化

Table 2 The dissolution rate of paliperidone palmitate suspension before and after 1 month storage表2 一月前后研磨液的釋放度測定結(jié)果

2.2 含量測定方法的建立

2.2.1 紫外分光光度法檢測波長的確定

稱取帕潘立酮棕櫚酸酯20 mg，用四氫呋喃-N,N-二甲基甲酰胺（體積比5∶95）制成每1 mL約含帕潘立酮棕櫚酸酯20 μg的溶液，同時(shí)配制相應(yīng)比例的的輔料溶液，以空白溶劑為對照，按《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA中紫外分光光度法測定，掃描圖見圖4。由圖4可知，帕潘立酮棕櫚酸酯在波長280 nm處有最大吸收，所用輔料在四氫呋喃-N,N-二甲基甲酰胺（體積比5∶95）溶液在280 nm處基本無干擾，故選擇于波長280 nm處進(jìn)行含量測定。

Fig. 4 The UV scanning spectra of paliperidone palmitate(A) and excipients(B) in diluent圖4 帕潘立酮棕櫚酸酯（A）和輔料（B）在稀釋液中的紫外掃描圖

2.2.2 線性關(guān)系及線性范圍的確定

精密稱取帕潘立酮棕櫚酸酯原料藥20 mg，置于50 mL量瓶中，用四氫呋喃2.5 mL振搖溶解，并用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。再用稀釋液四氫呋喃-N, N-二甲基甲酰胺（體積比5∶95）溶液分別稀釋成20、30、40、50 和60 mg·L-1的帕潘立酮棕櫚酸酯稀溶液，以稀釋液為空白溶劑，于波長280 nm處測定吸光度值。以吸光度值（A）對質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=1.36×10-2ρ + 2.68×10-2(r=0.999 9)。可見帕潘立酮棕櫚酸酯質(zhì)量濃度在20.0～60.0 mg·L-1內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為40.0 mg·L-1的樣品溶液，于室溫下分別在0、2、4、6和8 h測定其吸光度，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.55%。結(jié)果表明，帕潘立酮棕櫚酸酯在稀釋液四氫呋喃-N,N-二甲基甲酰胺（體積比5∶95）溶液中室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4 回收率和精密度試驗(yàn)

分別精密稱取硝苯地平對照品32、40和48 mg各3份，置于100 mL量瓶中，分別加入相應(yīng)比例的輔料，用5 mL四氫呋喃溶解并用N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，搖勻，濾過。取濾液1 mL置于10 mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻。按“2.2.1”條紫外分光光度法于波長280 nm處測定，將測得吸光度值帶入“2.2.2”條下的線性方程，計(jì)算加入值，將測得值與實(shí)際加入值比較計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。低、中、高3種質(zhì)量濃度的回收率均在98%～102%內(nèi)，回收率符合方法學(xué)要求。

Table 3 Recoveries of the UV method to determine PP in the diluent表3 帕潘立酮棕櫚酸酯在稀釋液中的紫外回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分別取低（30.0 mg·L-1）、中（40.0 mg·L-1）、高（50.0 mg·L-1）3種質(zhì)量濃度的樣品溶液，一天內(nèi)重復(fù)測定5次，計(jì)算日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差；每天測定1次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4。

Table 4 Precision of UV method to determine PP in the diluent (n=6)表4 帕潘立酮棕櫚酸酯在稀釋液中的紫外精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.5 帕潘立酮棕櫚酸酯長效注射劑的含量測定

取所得制劑樣品，精密稱取適量（約相當(dāng)于帕潘立酮棕櫚酸酯40 mg），置于100 mL量瓶中，加四氫呋喃5 mL振搖溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL稀釋液中約含帕潘立酮棕櫚酸酯40 μg的溶液；另取帕潘立酮棕櫚酸酯原料藥，同法配置制成每1 mL中約含帕潘立酮40 μg的溶液。取上述2種溶液，按《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA紫外分光光度法，在波長280 nm處分別測定吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算，得帕潘立酮棕櫚酸酯長效注射劑的含藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.6%。

2.3 釋放度測定方法的建立

2.3.1 檢測波長的確定

稱取帕潘立酮棕櫚酸酯20 mg，置于50 mL量瓶中，加四氫呋喃2.5 mL振搖溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，用釋放介質(zhì)（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.489%的聚山梨醇酯20的1 mmol·L-1鹽酸溶液）稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中約含帕潘立酮棕櫚酸酯40 μg的溶液。同時(shí)配制相應(yīng)比例的輔料溶液，以釋放介質(zhì)為空白對照，按《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA紫外分光光度法測定，掃描圖見圖5。由圖5可知，帕潘立酮棕櫚酸酯的釋放介質(zhì)溶液在波長280 nm處有最大吸收，所用輔料的釋放介質(zhì)溶液在波長280 nm處基本無干擾，故選擇280 nm用于釋放度的測定。

Fig. 5 The UV scanning spectra of paliperidone palmitate(A) and excipients(B) in dissolution medium圖5 帕潘立酮棕櫚酸酯（A）和輔料（B）在釋放介質(zhì)中的紫外掃描圖

2.3.2 線性關(guān)系及線性范圍的確定

精密稱取帕潘立酮棕櫚酸酯原料藥20 mg，置于50 mL量瓶中，加四氫呋喃2.5 mL振搖溶解并用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。再用釋放介質(zhì)分別稀釋成6、10、20、30和40 mg·L-1的帕潘立酮棕櫚酸酯稀溶液，以稀釋液為空白，于波長280 nm處測定吸光度值。以吸光度值（A）對質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=1.45×10-2ρ+ 9.1×10-3(r=0.999 9)。由此可見，在釋放介質(zhì)中帕潘立酮棕櫚酸酯的質(zhì)量濃度在6.0～40.0 mg·L-1內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取帕潘立酮棕櫚酸酯質(zhì)量濃度為40.0 mg·L-1的釋放介質(zhì)溶液，于室溫下分別在0、2、4、6和8 h測定其吸光度，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 0.89%。結(jié)果表明，帕潘立酮棕櫚酸酯在釋放介質(zhì)中室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 釋放度的測定

帕潘立酮棕櫚酸酯為進(jìn)口藥物，參考國家食品藥品監(jiān)督管理局進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)號：JX20100263），帕潘立酮棕櫚酸酯長效注射液釋放度測定方法確立如下：取帕潘立酮棕櫚酸酯混懸液，按《美國藥典）32版<711＞ 第二法釋放度測定法，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.489%聚山梨醇酯20的1 mmol·L-1鹽酸溶液900 mL為釋放介質(zhì)，介質(zhì)溫度為（25±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，依法操作，向每個(gè)溶出杯中加入相當(dāng)于(500 ± 25) μL的均勻混懸液樣品。加樣方式為取本品足夠支數(shù)，搖勻，預(yù)先混合，將預(yù)先混合注射液約(500 ± 25) μL，置于規(guī)格為1 mL的帶針頭注射器內(nèi)，精密稱定質(zhì)量，當(dāng)槳轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，將上述混懸液加入每個(gè)溶出杯中，精密稱定帶有針頭的注射完的空注射器質(zhì)量。經(jīng)1.5、20和45 min時(shí)，分別取釋放介質(zhì)6.0 mL，立即用0.22 μm孔徑的濾膜濾過，棄去初濾液至少3 mL，取續(xù)濾液3.0 mL作為供試溶液；另取棕櫚酸帕利哌酮原料藥40.0 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加四氫呋喃5 mL振搖溶解，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，精密量取1 mL，置于10 mL量瓶中，用釋放介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取上述2種溶液，按《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅣA中紫分光光度法，在波長280 nm處分別測定吸光度，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算釋放度。其中，由于45 min時(shí)的取樣點(diǎn)吸光度值過高，需要用釋放介質(zhì)對溶液進(jìn)行等量稀釋后再測定。試驗(yàn)過程中不需要在操作容器中補(bǔ)充釋放介質(zhì)，計(jì)算公式中不需要對釋放介質(zhì)的體積進(jìn)行校正。帕潘立酮棕櫚酸酯混懸液的釋放曲線見圖6。

Fig. 6 The dissolution profile of paliperidone palmitate suspension injection圖6 帕潘立酮棕櫚酸酯混懸液的釋放曲線

3 討論與結(jié)論

a. 利用紫外分光光度法對帕潘立酮棕櫚酸酯混懸注射劑進(jìn)行含量和釋放度測定的檢測手段與進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的高效液相色譜法相比，操作簡便快捷，節(jié)約有機(jī)試劑，同時(shí)準(zhǔn)確度和精密度等符合要求。

b. 對混懸液進(jìn)行含量和釋放度檢測時(shí)，要取5支以上注射劑進(jìn)行混合，充分搖勻后取樣以避免因?yàn)樗幬锓植疾痪斐山Y(jié)果的偏離。

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Determination of the content and release of paliperidone palmitate long-acting suspension injection

JING Guanghui, YANG Jie, JI Xinchao, ZHONG Yue, ZHANG Yuanyuan, WANG Yanjiao*
(School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

ObjectivesTo establish UV methods for the determination of the content and release of paliperidone palmitate (PP) in suspension injection.MethodsThe suspension injection was prepared by wet milling. The diluent consisted of tetrahydrofuran and N,N-dimethyl formamide (V∶V=5∶95). The dissolution medium was 1 mmol·L-1hydrochloric acid solution 900 mL with 0.489% polysorbate 20. The detection wavelength was set at 280 nm.ResultsGood linear relationship (r=0.999 9) between absorbance (A) and concentration (ρ) of PP in diluent ranging from 20.0 - 60.0 mg·L-1was obtained, and the calibration curve was A=1.36×10-2ρ + 2.68×10-2(r= 0.999 9). The solution stability of PP in diluent was good, and the recoveries of low, middle and high concentrations were in the range of 98% - 102%. The intra-day and inter-day RSDs were less than 2.0%. In the dissolution medium, good linear relationship (r=0.999 9) between absorbance (A) and concentration (ρ) of PP from 6.0 - 40.0 mg·L-1was obtained, and the calibration curve was A = 1.45×10-2ρ + 9.1×10-3(r=0.999 9).ConclusionsThe solution stability of PP is good. The methods are accurate, simple, rapid and reproducible, and can be used for determination of content and release of PP in suspension injection.

pharmaceutics; long-acting suspension injection; UV; paliperidone palmitate; content determination; in vitro release

(本篇責(zé)任編輯：趙桂芝)

R 94

A

（2016）05-0175-08

10.14146/j.cnki.cjp.2016.05.004

2015-05-05

荊廣會(huì)(1988-), 女(漢族), 山東威海人, 碩士研究生, E-mail jgh0410@126.com; 王艷嬌(1964-), 女(漢族), 遼寧遼陽人, 副教授, 博士, 碩士生導(dǎo)師, 從事藥物新劑型的研究與開發(fā),Tel. 024-23986343,E-mailtangpharm@sina.com。