錢勝華，酈銀芳，傅 雷，何幫順

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院，1.兒科，2.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，江蘇 南京 210006）

肺炎支原體肺炎伴喘息患兒血 IL-10、IL-17和 VEGF的檢測(cè)及其意義

錢勝華1，酈銀芳1，傅 雷2，何幫順2

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院，1.兒科，2.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，江蘇 南京 210006）

目的觀察白細(xì)胞介素10（IL-10）、白細(xì)胞介素17（IL-17）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在兒童肺炎支原體肺炎中的表達(dá)水平及其與喘息的相關(guān)性。方法選取62例肺炎支原體肺炎患兒，分為伴喘息組（A組，32例）和無(wú)喘息組（B組，30例），另選取健康兒童30位作為對(duì)照組（C組），檢測(cè)三組兒童血清中 IL-10、IL-17和 VEGF的濃度。結(jié)果肺炎支原體肺炎伴喘息組和無(wú)喘息組患兒血清IL-17和 VEGF的水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；肺炎支原體肺炎伴喘息患兒的 IL-17和VEGF的水平高于不伴喘息者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與對(duì)照組相比，肺炎支原體肺炎伴喘息組和無(wú)喘息組患兒的 IL-10水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；肺炎支原體肺炎伴喘息患兒的 IL-10的水平低于不伴喘息者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論IL-10、IL-17和 VEGF可能在小兒肺炎支原體肺炎導(dǎo)致喘息樣發(fā)作中起重要作用。

肺炎支原體肺炎； 支氣管哮喘； 白細(xì)胞介素10； 白細(xì)胞介素17； 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子； 兒童

肺炎支原體肺炎 （mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是臨床兒科常見的呼吸道感染性疾?。?］，部分兒童可出現(xiàn)喘息樣發(fā)作，具體機(jī)制尚不明確［2］。免疫紊亂、氣道炎癥是喘息發(fā)作最重要的病理生理特性，目前已有研究及本研究小組前期實(shí)驗(yàn)均證實(shí)部分細(xì)胞因子與氣道的炎癥及免疫損傷有關(guān)［3-4］，其中IL-10、IL-17和VEGF可能是參與氣道炎癥反應(yīng)的重要炎癥因子。本研究通過(guò)對(duì)已確診為MP肺炎患兒進(jìn)行分組，檢測(cè) MP肺炎伴喘息組和不伴喘息組的血清中 IL-10、IL-17和 VEGF的水平，并與對(duì)照組比較，以探討IL-10、IL-17和VEGF在MPP并喘息樣發(fā)作中的機(jī)制。

資料與方法

1 一般資料

隨機(jī)選取2013年 1月至2016年5月我院兒科住院和門診的肺炎支原體肺炎患兒進(jìn)行研究，肺炎支原體肺炎納入標(biāo)準(zhǔn)［5］：①符合實(shí)用兒科學(xué)肺炎支原體肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②咽拭子 MP分離培養(yǎng)結(jié)果呈陽(yáng)性，且血清MP-IgM陽(yáng)性或血清MP-IgG抗體呈4倍以上升高；③入院前病程不超過(guò)兩周。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有支氣管哮喘病史，患慢性肺疾病；②免疫系統(tǒng)疾病或功能缺陷；③先天性心臟病病史；④入院前使用過(guò)支氣管擴(kuò)張劑、免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素。入組患者共62例，其中男32例，女30例，年齡1～14歲，平均 5.3±2.2歲。MP伴喘息患兒組32例（A組），MP不伴喘息患兒組30例（B組）。另選取健康兒童 30位作為對(duì)照組（C組），其中男15名，女 15名，年齡1～14歲，平均5.2±2.1歲。三組兒童性別、年齡等一般資料經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有入組兒童家長(zhǎng)均簽署知情同意書。

2 方法

入組兒童均采集靜脈血5mL，3000r／min常溫離心10min，分離血清，保存于 -80℃冰箱中待用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法測(cè)定血清 IL-10、IL-17和 VEGF。IL-10、IL-17試劑盒由武漢博士德公司提供，VEGF酶聯(lián)免疫試劑盒由武漢中美科技生物有限公司提供。具體測(cè)定方法均由同一檢驗(yàn)師按照說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 MP肺炎伴喘息組、MP肺炎不伴喘息組與對(duì)照組的IL-17、VEGF水平比較

MP肺炎伴喘息組的 IL-17、VEGF水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），MP肺炎伴喘息患兒組的IL-17、VEGF的水平高于不伴喘息組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

2 MP肺炎伴喘息組、MP肺炎不伴喘息組與對(duì)照組的的IL-10水平比較

與對(duì)照組相比，MP肺炎伴喘息組的 IL-10水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而且 MP肺炎伴喘息組的 IL-10水平明顯低于不伴喘息組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 支原體肺炎組和對(duì)照組的 IL-10、IL-17和 VEGF的水平比較

討 論

MP感染是兒科臨床常見病，MP既可作為感染源，又可作為過(guò)敏原，誘發(fā)患兒喘息發(fā)作［6-7］。機(jī)制可能如下：①M(fèi)P感染可直接損傷呼吸道上皮［8］，增加呼吸道反應(yīng)性，誘導(dǎo)IgE的產(chǎn)生；②促進(jìn)細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放，引起呼吸道的慢性炎癥［9］；③MP感染后可促進(jìn)氣道粘液分泌增多，導(dǎo)致呼吸道炎癥及狹窄。

以往研究顯示［10］，肺炎支原體肺炎伴喘息的患兒存在Th1／Th2失衡。初始 CD4細(xì)胞在不同細(xì)胞因子的作用下分化為功能不同的效應(yīng)T細(xì)胞（Th）和Treg，Th又可分為 Th1、Th2及 Th17三個(gè)亞群。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)在哮喘發(fā)病機(jī)制中，Th17和 Treg細(xì)胞作為 T細(xì)胞亞群，兩者之間的不平衡是引起哮喘發(fā)病的重要因素［11］。IL-17是 Th17細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，在機(jī)體免疫反應(yīng)中主要起促炎作用，促炎作用強(qiáng)大，可通過(guò)募集中性粒細(xì)胞，對(duì)不同組織或者細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子、金屬蛋白酶以及剌激樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生，參與氣道慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程［12］。研究表明［13］，肺炎支原體肺炎伴喘息患兒外周血 IL-17的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組。相反，Treg分泌的細(xì)胞因子 IL-10，能夠負(fù)調(diào)節(jié)和抑制炎癥反應(yīng)［14］。

本研究結(jié)果顯示，MPP患兒與對(duì)照組相比，血清IL-17水平顯著升高，而IL-10水平顯著降低，而且喘息組血清IL-17水平顯著高于非喘息組和對(duì)照組，喘息組 IL-10水平顯著低于非喘息組和對(duì)照組。這提示MPP患兒存在細(xì)胞因子 IL-10和 IL-17的異常表達(dá)。分析其原因可能為：MP作為異物抗原刺激T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致 T細(xì)胞亞群失衡，進(jìn)而引起 Th17和 Treg水平異常，而 Th17和 Treg又可以分泌IL-17和 IL-10，打破免疫平衡，引起免疫紊亂，因此出現(xiàn)喘息。

喘息病人的氣道炎癥由多種炎性細(xì)胞和炎性因子參與，它們互相影響，可以增加氣道血管通透性，導(dǎo)致血漿蛋白滲出。VEGF屬于血小板生長(zhǎng)因子家族，除了能促進(jìn)新生血管形成，還可以促進(jìn)血管通透性增加。文獻(xiàn)報(bào)道 VEGF與哮喘氣道炎癥及重塑的發(fā)生密切相關(guān)［15］。本研究結(jié)果表明，MP肺炎伴喘息癥狀患兒 VEGF水平比不伴喘息癥狀者顯著增高，提示VEGF可能參與了 MPP患兒喘息形成的過(guò)程。機(jī)制可能為：VEGF結(jié)合受體，刺激嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞活化以及趨化，新生血管形成，同時(shí)還可以使呼吸道粘膜血管通透性增加，引起細(xì)胞水腫，細(xì)胞外基質(zhì)的改變加速了血管重構(gòu)，最終增強(qiáng)了氣道炎癥反應(yīng)。

綜上所述，MP肺炎患者血清 IL-17和 VEGF濃度增高，IL-10水平降低，而且喘息組血清 IL-17和VEGF水平顯著高于非喘息組和對(duì)照組，喘息組 IL-10水平顯著低于非喘息組和對(duì)照組。這提示IL-17、IL-10、VEGF可能在MP肺炎和哮喘的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，提示我們下一步可以在信號(hào)通路甚至是基因水平上進(jìn)行進(jìn)一步研究，為臨床醫(yī)師對(duì)MPP伴喘息患者的預(yù)防和治療提供新的科學(xué)的方法。

［1］Youn Y S，LeeK Y.Mycoplasmapneumoniaepneumoniain children.Korean Pediatr，2012，55（2）：42-47.

［2］Giavina-Bianchi P，KalilJ.Mycoplasmapneumoniaeinfection induces asthma onset.J Allergy Clin Immunol，2016，137（4）：1024-1025.

［3］Yan T.Role of anti-inflammatory cytokines in pathogenesis of pediatricmycoplasma pneumoniae pneumonia.J Biol Regul Homeost Agents，2016，30（2）：541-545.

［4］酈銀芳，張莉.IL-13和VEGF在肺炎支原體肺炎伴喘息兒童血清中檢測(cè)及意義.臨床肺科雜志，2014，19（1）：92-94.

［5］吳瑞萍，胡亞美，江載芳.實(shí)用兒科學(xué).第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：1136-1182.

［6］Shimizu T.Pathogenic factors of mycoplasma.Nihon Saikingaku Zasshi，2015，70（4）：369-374.

［7］Waites K B，Talkington D F.Mycoplasma pneumoniae and its role as a human pathogen.Clin Microbiol Rev，2004，17（4）：697-728.

［8］席琨，崔紅.肺炎支原體感染發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展.中國(guó)醫(yī)刊，2014，49（12）：15-18.

［9］張世杰，吳鳴.肺炎支原體感染與細(xì)胞因子變化研究進(jìn)展.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，25（2）：214-217.

［10］武冬娜，張志明，聶菲，等.肺炎支原體肺炎患兒外周血T輔助細(xì)胞亞群水平變化及其與喘息發(fā)生的關(guān)系.國(guó)際呼吸雜志，2016，36（10）：739-741.

［11］Tao B，Ruan G，Wang D，et al.Imbalance of Peripheral Th17 and Regulatory T Cells in Children with Allergic Rhinitis and Bronchial Asthma.Iran J Allergy Asthma Immunol，2015，14（3）：273-279.

［12］Peters M，K?hler-Bachmann S，Lenz-Habijan T，et al.Influence of an allergen-specific Th17 response on remodeling of the Airways.Am J Respir Cell Mol Biol，2016，54（3）：350-358.

［13］Shao L，Cong Z，Li X，et al.Changes in levels of IL-9，IL-17，IFN-γ，dendritic cell numbers and TLR expression in peripheral blood in asthmatic children with Mycoplasma pneumoniae infection.Int J Clin Exp Pathol，2015，8（5）：5263-5272.

［14］Trifunovic＇J，Miller L，Debeljak ?，et al.Pathologic patterns of interleukin 10 expression--a review.Biochem Med（Zagreb），2015，25（1）：36-48.

［15］Yuksel H，Yilmaz O，Karaman M，et al.Role of vascular endothelial growth factor antagonism on airway remodeling in asthma.Ann Allergy Asthma Immunol，2013，110（3）：150-155.

（李 雁 張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

Expression and Significance of IL-10，IL-17 and VEGF in Children with Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia Complicated with Wheezing

QIAN Sheng-hua，LI Yin-fang，F(xiàn)U Lei，HE Bang-shun
（Department of Pediatrics，Nanjing First Hospital，Nanjing medical University，Nanjing 210006，China）

ObjectiveTo detect serum levels of interleukin-10（IL-10），interleukin-17（IL-17）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in children with mycoplasma pneumoniae（MP）pneumonia complicated with wheezing.MethodsA total of 62 children with MP pneumonia were divided into the group A，with wheezing（32 cases）and the group B，without wheezing（30 cases）.30 healthy children were enrolled as control group.Serum levels of IL-10，IL-17and VEGF were measured by ELISA.ResultsIL-10 level of group A，B and control group were 8.5±1.4ng／L，13.3±2.1 ng／L and 18.6±2.2ng／L，respectively，The serum IL-17 level of group A，B and control group were 25.8±2.1ng／L，16.6±1.1 ng／L and 10.1± 1.2ng／L，respectively.The serum VEGF level of group A，B and control group were 2226.2±110.1ng／L，1601.1±114.3 ng／L and 465.2±100.1ng／L，respectively.IL-10，IL-17 and VEGF in both MP groups were significantly higher than that of control group（P＜0.01）.IL-10，IL-17 and VEGF in MP pneumonia complicated with wheezing were higher than that of MP without wheezing.ConclusionIL-10，IL-17 and VEGF may play important roles in the pathogenesis of MP pneumonia and wheezing attack in children.

Mycoplasma pneumoniae pneumonia； Bronchial asthma； Interleukin-10； Interleukin-17；Vascular endothelial growth factor； Child

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.002

2016-09-21；

2016-10-10