李冬霞，郭九玲，安新濤，崔章麗，艾冬梅

（河北省衡水市第二人民醫(yī)院，河北 衡水 053000）

淋巴細(xì)胞免疫治療不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)不同療程臨床效果分析

李冬霞，郭九玲，安新濤，崔章麗，艾冬梅

（河北省衡水市第二人民醫(yī)院，河北 衡水 053000）

目的探討本院生殖門診患者淋巴細(xì)胞主動免疫治療對原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)不同療程的療效。方法選取本院患者200例，治療組：提取其丈夫淋巴細(xì)胞進(jìn)行主動免疫，孕前及孕后均4次。對照組：同樣進(jìn)行淋巴細(xì)胞主動免疫，孕前4次，孕后只注射1～2次。自孕前免疫治療4次療程完成時開始，18個月后對其封閉抗體轉(zhuǎn)陽率、妊娠成功率等進(jìn)行比較。結(jié)果2組比較對照組封閉抗體轉(zhuǎn)陽率、妊娠成功率均低于治療組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論淋巴細(xì)胞提取治療免疫原因引起的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，微創(chuàng)，操作簡單，安全經(jīng)濟(jì)，療效滿意，值得臨床推廣。

淋巴細(xì)胞注射； 免疫治療； 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)； 治療療程與療效

連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)者稱為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（RSA），其病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，迄今仍有半數(shù)左右原因不明。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中免疫性相關(guān)因素包括自身免疫型，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡等；同種免疫型功能失調(diào)包括母體細(xì)胞毒性抗體、母親缺乏封閉抗體等。同種免疫型流產(chǎn)的診斷是排除性診斷，即排除染色體、內(nèi)分泌等方面的病因后仍病因不明，也可稱為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，約占免疫性不孕的2／3。目前普遍認(rèn)為與母體對父系抗原反應(yīng)性降低，不能產(chǎn)生足夠的保護(hù)性抗體即封閉抗體保護(hù)胎兒有關(guān)，從而使其被母體排斥而發(fā)生流產(chǎn)。本試驗旨在通過父系免疫細(xì)胞刺激母體產(chǎn)生足夠的封閉抗體即免疫治療的方法，分析研究免疫治療的不同療程達(dá)到的不同臨床效果，為臨床提供相關(guān)的治療意見。

材料和方法

1 研究對象及臨床資料

選取本院生殖門診2013年 1月至 2015年 1月期間，不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者200例，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，初始選擇的患者總數(shù)為206例，隨機(jī)分為治療組104例，對照組 102例；其中治療組中3例因各種原因失訪，1例妊娠已達(dá)16周以上，但因母體患有嚴(yán)重的糖尿病及妊高癥人工終止妊娠；對照組失訪2例，均不再作為本實驗的研究對象，最終確定研究的不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者總數(shù)為 200例，其中治療組100例，對照組100例。除外其他非免疫性因素疾?。悍驄D雙方染色體檢測正常；母體生殖道無畸形和結(jié)構(gòu)異常；內(nèi)分泌項目性激素及甲狀腺激素功能正常；TORCH檢查陰性（弓形蟲等抗體檢測陰性）；出凝血功能正常；自身免疫性抗體陰性（抗卵巢抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體，抗心磷脂抗體等，其中封閉抗體陰性）；男方精液常規(guī)檢查正常，傳染病系列檢查正常（乙肝五項、丙肝、梅毒、艾滋病抗體陰性，若配偶患有傳染性疾病使用其他健康人的血液）；患者均為早期流產(chǎn)（孕周 ＜12周）或 B型超聲只見空孕囊，患者年齡22～46歲，平均 28.2歲。流產(chǎn)次數(shù)2～6次，流產(chǎn)時孕周為5～11周，平均8周。（注：為保證研究對象處于抗體產(chǎn)生的有效期間，本實驗研究選取的入組患者均為孕前經(jīng)正規(guī)免疫治療4次后，半年內(nèi)即懷孕者。半年內(nèi)未懷孕者不列為本研究的實驗對象。

2 研究方法

選取本院的生殖門診 200例不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者，按上面所述除外其他因素，孕前半年內(nèi)均進(jìn)行過免疫治療（2周1次，共 4次），懷孕后隨機(jī)分為治療組100例，對照組 100例，2組在年齡、流產(chǎn)次數(shù)、流產(chǎn)時孕周、體重等指標(biāo)方面比較無顯著性差異。治療組：提取其丈夫淋巴細(xì)胞并注射至患者皮下進(jìn)行主動免疫：抽取男方全血 10mL（肝素抗凝），運用淋巴細(xì)胞分離液（國藥集團(tuán)有限公司，250mL）進(jìn)行細(xì)胞提取，離心機(jī)3000r／18min，巴氏吸管提取淋巴細(xì)胞層，洗滌2次，配制細(xì)胞懸液1mL，使其濃度在3～4×107左右，即時對女方分六點前臂屈側(cè)進(jìn)行皮下注射（首次注射為皮內(nèi)），2周1次，共4次；之后指導(dǎo)受孕，孕后治療的開始時間是一旦確定妊娠立即開始［1］，爭取在孕90d左右完成；同樣 4次。對照組：同樣提取其丈夫淋巴細(xì)胞對患者進(jìn)行主動免疫，孕前 4次，之后指導(dǎo)受孕，孕后治療的開始時間同樣是一旦確定妊娠立即開始，因各種原因只注射1～2次，不足 4次。常見的不良反應(yīng)有紅腫，瘙癢，色素沉著等，紅腫瘙癢患者一般可以耐受，過段時間可以消失不需特別處理；關(guān)于色素沉著，患者權(quán)衡利弊，一般也可接受。

自孕前淋巴細(xì)胞免疫治療4次療程完成之時開始進(jìn)行統(tǒng)計，18個月后對 2組患者的封閉抗體轉(zhuǎn)陽率、再次流產(chǎn)率、妊娠成功率進(jìn)行比較。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

封閉抗體轉(zhuǎn)陽率 ＝抗體轉(zhuǎn)陽例數(shù)／患者總例數(shù)，再次流產(chǎn)率 ＝再次流產(chǎn)例數(shù)／患者妊娠例數(shù)，妊娠成功率 ＝妊娠成功例數(shù)（妊娠37～40周足月分娩）／妊娠例數(shù)，組間率數(shù)據(jù)比較采用 χ2檢驗。所有數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計分析軟件SPSS進(jìn)行統(tǒng)計處理，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

治療組和對照組封閉抗體轉(zhuǎn)陽率分別為87.00%、72.00%，相比有顯著性差異（P＜0.05）；再次流產(chǎn)率分別為 10.00%、18.00%，妊娠成功率為90.00%、82.00%，治療組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），具體數(shù)據(jù)見下表1。

表2 兩組患者再次流產(chǎn)率及妊娠成功率的比較（n）

討 論

習(xí)慣性流產(chǎn)指連續(xù)自然流產(chǎn) 3次及 3次以上者，給患者身心及其家庭帶來巨大的傷害。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的原因大致可分為內(nèi)分泌因素，如黃體功能不全、甲狀腺功能異常；泌尿生殖系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)異常，如子宮發(fā)育異常、宮腔粘連等；染色體異常、自身免疫因素等。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)又可分為早期及晚期流產(chǎn)。早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)系指流產(chǎn)發(fā)生在妊娠12周以前，一般多與遺傳因素，母內(nèi)分泌失調(diào)及免疫學(xué)因素等有關(guān)；晚期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)多指流產(chǎn)發(fā)生在妊娠12周以后，多與胎盤問題（如胎盤早剝）、子宮問題（如宮頸無力、子宮畸形等）、血型不合及孕婦患有疾?。ㄈ缣悄虿。误w?。┑纫蛩赜嘘P(guān)。自然流產(chǎn)的原因復(fù)雜，除以上因素，尚有40%的自然流產(chǎn)原因不明，約50%的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病與免疫因素有關(guān)，流產(chǎn)是母胎之間免疫狀態(tài)失衡，發(fā)生免疫排斥所致［2］。免疫紊亂是導(dǎo)致自然流產(chǎn)的重要因素，又分為自身免疫型和同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，自身免疫型主要有三方面：①抗磷脂抗體形成，引起胎盤微循環(huán)血栓，從而引起流產(chǎn)。②組織非特異性抗體例如抗核抗體、抗 DNA抗體的形成，損害胎兒和胎盤 DNA，引起胎盤炎癥；③組織特異性抗體如抗精子抗體等損害胚胎導(dǎo)致流產(chǎn)。自身免疫型治療以免疫抑制劑和抗凝劑為主，而同種免疫型必須除外其他明確的流產(chǎn)原因，即所謂的不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，表現(xiàn)為封閉抗體產(chǎn)生不足，可占到免疫型復(fù)發(fā)流產(chǎn)的 2／3，為其主要的病因類型，采取主動免疫治療可對異常的細(xì)胞免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，使得再次妊娠成功率提高［3］。

同種免疫型反復(fù)自然流產(chǎn)與患者體內(nèi)的封閉抗體缺乏有關(guān)，尤其在原發(fā)性反復(fù)自然流產(chǎn)患者中更為明顯，故而在流產(chǎn)患者中及時進(jìn)行封閉抗體的檢測，對于原因不明自然流產(chǎn)的實驗室診斷及免疫治療非常重要［4］。封閉抗體的存在被認(rèn)為是妊娠成功的必要因素?，F(xiàn)代生殖免疫學(xué)上妊娠被認(rèn)為是半同種移植，母體免疫功能正常時，胚胎刺激母體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生封閉抗體，可以中和胚胎抗原，阻斷免疫反應(yīng)，從而使胎兒不受排斥，另外封閉抗體還可以與母體免疫細(xì)胞結(jié)合，封閉其細(xì)胞毒作用，阻止對胎兒的殺傷；它還可直接結(jié)合到靶細(xì)胞的抗原上，從而降低它們對受體細(xì)胞參與的免疫反應(yīng)的敏感性；一旦缺乏封閉因子，免疫系統(tǒng)容易對胚胎產(chǎn)生免疫攻擊，最終導(dǎo)致自然流產(chǎn)。正常妊娠時，胚胎同時攜帶父系和母系基因，父系的抗原可刺激母體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫保護(hù)，一旦母體免疫功能低下或紊亂，不能產(chǎn)生足夠的封閉抗體，則胚胎被母體免疫系統(tǒng)攻擊，造成流產(chǎn)。

淋巴細(xì)胞提取治療不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)患者，發(fā)現(xiàn)其能提高封閉抗體陽性率及再次妊娠成功率，對于臨床治療有很好的指導(dǎo)價值［5］。而本研究通過實驗發(fā)現(xiàn)，不同注射次數(shù)即不同療程與封閉抗體的產(chǎn)生率和妊娠成功率密切相關(guān)。在主動免疫治療時，淋巴細(xì)胞提取的要點為淋巴數(shù)量足夠多［6］，且為避免其活性喪失，需在2小時內(nèi)注射，且采取孕前治療一個療程，注射4次，孕后加強(qiáng)一個療程，也注射4次，其效果明顯優(yōu)于孕前4次，孕后1～2次，不足4次的治療；可能與相應(yīng)時間內(nèi)多次的免疫刺激才能產(chǎn)生足夠的封閉抗體有關(guān)。通過實驗可以看出，不同的注射次數(shù)與患者的免疫結(jié)局存在重要關(guān)系，而封閉抗體的產(chǎn)生又與妊娠結(jié)局密切相關(guān)。本實驗通過對患者進(jìn)行不同次數(shù)的免疫刺激后，分析不同療程后的封閉抗體的產(chǎn)生率和妊娠成功率，發(fā)現(xiàn)治療組比對照組的封閉抗體轉(zhuǎn)陽率和妊娠成功率均有提高，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。淋巴細(xì)胞免疫治療習(xí)慣性流產(chǎn)療效確切肯定，但其療程并未規(guī)范統(tǒng)一，如何達(dá)到更好的臨床效果而又不增加嚴(yán)重的不良反應(yīng)，是醫(yī)患雙方均重點關(guān)注的問題。本實驗說明不同注射次數(shù)即不同療程影響妊娠結(jié)局，且經(jīng)過對兩組患者出生的172名新生兒隨訪觀察，均未出現(xiàn)畸形兒，證明增加注射次數(shù)并未增加嚴(yán)重的不良反應(yīng)，故臨床上宜建議患者切勿半途而廢，要按療程完整治療，才能產(chǎn)生滿意的療效。

目前，提取淋巴細(xì)胞后注射母體的主動免疫治療方法，越來越受到臨床重視，其操作簡便，安全、微創(chuàng)，不良反應(yīng)輕微，經(jīng)濟(jì)，療效滿意［7］。本研究旨在通過淋巴細(xì)胞主動免疫治療過程中分析不同療程對妊娠結(jié)局的影響，為臨床醫(yī)生的治療提供更多參考，從而規(guī)范治療，早日解除患者痛苦，增加社會的和諧因素。

［1］張占華，安新濤.淋巴細(xì)胞注射治療原因不明復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)60例療效觀察.中國性科學(xué)，2013，22（1）：32-33.

［2］仝佳麗，陳子江.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的病因?qū)W研究進(jìn)展.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2005，14（2）：152-154.

［3］邱香廷，宋玉翠.主動免疫療法在原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者中的應(yīng)用.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，30（6）：548-550.

［4］張運麗，郭婧婧，金燕，等.反復(fù)自然流產(chǎn)患者封閉抗體檢測的臨床意義.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，16（6）：1917-1918.

［5］范開蓉，吳侃倪，李麗琴，等.反復(fù)自然流產(chǎn)患者主動免疫治療前后封閉抗體變化對再次妊娠的影響研究.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，10（9）：56-58.

［6］孫玲.封閉抗體療法治療免疫性不孕癥與習(xí)慣性流產(chǎn)效果.齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2006，21（5）：401-403.

［7］徐艷，翁時秋.封閉抗體不足性習(xí)慣性流產(chǎn)的治療概況.吉林醫(yī)學(xué)，2008，29（21）：1958-1959.

（潘子昂編輯）

Effect of Different Courses of Lymphocyte Active Immunotherapy in the Treatment of Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion

LI Dong-xia，GUO Jiu-ling，AN Xin-tao，CUI Zhang-li，AI Dong-mei
（The Second Hospital of Hengshui，Hengshui 053000，China）

ObjectiveTo explore the effect of different courses of lymphocyte active immunotherapy in the treatment of unexplained recurrent spontaneous abortion in our hospital.MethodsA total of 200 cases of patients in our hospital，the treatment group，received the extraction of lymphocyte from partner 4 times prepregnancy and 4 times post-pregnancy..The control group received the same lymphocyte treatment 4 times pre-pregnancy，but only 1 or 2 times post-pregnancy.Starting from the 4thpregnancy immune treatment，the positive rate of blocking antibody and pregnancy rate were compared eighteen month after.ResultsThe positive rate of blocking antibody and pregnancy success rate in control groups were lower than the treatment group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionLymphocyte extraction in the treatment of recurrent spontaneous abortion induced immunization.It is minimally invasive，simple，safe and economic operation.The curative effect is satisfactory.It is worthy of clinical promotion.

Lymphocyte injection； Immunotherapy； Recurrent spontaneous abortion； Treatment course and curative effect

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.015

2016-08-03；

2016-10-08

李冬霞（1976—），女，醫(yī)學(xué)學(xué)士，主管檢驗技師，主要從事醫(yī)學(xué)免疫和微生物方面的研究。