朱孟娜范開(kāi)亮韓 寧孔 立張飛虎劉 陽(yáng)金靈燕張 娟

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250000；3.山東力明科技職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250116）

·實(shí)驗(yàn)報(bào)告·

醒腦靜注射液對(duì)膿毒癥休克兔腸系膜微循環(huán)的影響*

朱孟娜1范開(kāi)亮2△韓 寧2孔 立2張飛虎2劉 陽(yáng)1金靈燕1張 娟3

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250000；3.山東力明科技職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250116）

目的觀察醒腦靜注射液對(duì)膿毒癥休克新西蘭大白兔腸系膜微循環(huán)的影響。方法 將30只新西蘭大白兔隨機(jī)抽取10只入正常對(duì)照組，剩余20只全部給予脂多糖1.0 mg/kg的劑量進(jìn)行內(nèi)毒素休克造模，造模成功后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、醒腦靜組。造模后醒腦靜組沿耳緣靜脈持續(xù)滴入醒腦靜注射液5 mL/（kg·h），正常對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組滴入0.9%氯化鈉溶液5 mL/（kg·h）。分別在實(shí)驗(yàn)的3 h、6 h通過(guò)BI-2000醫(yī)學(xué)圖像系統(tǒng)觀察并記錄選定部位微循環(huán)毛細(xì)血管動(dòng)靜脈血色、管徑、流速、流態(tài)、毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)變與化，并監(jiān)測(cè)0 h、3 h、6 h心率、平均動(dòng)脈壓、血清白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）變化。結(jié)果 正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組微靜脈、微動(dòng)脈管徑明顯收縮，血流速度減慢，毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)明顯減少，心率、IL-8、TNF-α值明顯升高，血壓明顯降低，血液流態(tài)以線(xiàn)粒流、粒緩流為主，少數(shù)為粒擺流甚至出現(xiàn)血流停滯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，治療6 h后，醒腦靜組微靜脈、微動(dòng)脈管徑明顯擴(kuò)張，血流速度增快，毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)明顯增多，心率、IL-8、TNF-α明顯下降，血壓顯著升高，血液流態(tài)顯著改善，以線(xiàn)流、線(xiàn)粒流為主，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 醒腦靜注射液能顯著改善膿毒癥休克新西蘭大白兔腸系膜微循環(huán)灌注，降低IL-8、TNF-α水平。

醒腦靜注射液 膿毒癥休克 微循環(huán) TNF-α IL-8

膿毒癥發(fā)病率高、死亡率高，在重癥監(jiān)護(hù)病房的死亡原因中占首位［1］，膿毒性休克是嚴(yán)重膿毒癥患者的持續(xù)性低血壓狀態(tài)，是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征（MODS）的重要原因，已成為ICU患者的主要死亡原因之一。近年來(lái)，中醫(yī)藥在膿毒癥的治療方面發(fā)揮了巨大的作用，醒腦靜注射液是由天然麝香、冰片等中藥經(jīng)科學(xué)方法提取精制而成的中藥注射制劑，具有清熱解毒、涼血活血的功效，研究認(rèn)為其具有抑制炎癥因子釋放、減輕炎癥反應(yīng)的作用［2］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察醒腦靜注射液對(duì)膿毒癥休克兔微循環(huán)的影響，為醒腦靜注射液用于臨床治療膿毒癥提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 新西蘭大白兔30只，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半，體質(zhì)量2.5～3.0 kg。脂多糖（LPS）：購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；白細(xì)胞介素-8（IL-8）試劑盒、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（購(gòu)自廈門(mén)慧嘉生物科技有限公司）；醒腦靜注射液（購(gòu)于無(wú)錫濟(jì)民可信山禾藥業(yè)）。

1.2 分組與造模 30只新西蘭大白兔適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食8 h，可自由飲水，隨機(jī)抽取10只入正常對(duì)照組。將剩余20只按1.0 mg/kg兔耳緣靜脈注射脂多糖建立內(nèi)毒素休克模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，進(jìn)行股動(dòng)脈置管，并連接壓力監(jiān)測(cè)儀，監(jiān)測(cè)心率、動(dòng)脈壓、平均動(dòng)脈壓。造模成功的標(biāo)志為心率和呼吸頻率較快超過(guò)自身對(duì)照值20%、平均動(dòng)脈壓下降超過(guò)自身對(duì)照值20%、體溫超過(guò)或者低于自身正常體溫1℃。造模成功后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、醒腦靜組。

1.3 給藥方法 造模成功后，醒腦靜組沿耳緣靜脈以5 mL/（kg·h）輸入醒腦靜注射液，正常對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組給予5 mL/（kg·h）（0.9%氯化鈉溶液）耳緣靜脈輸入。以上治療僅給藥1次。

1.4 標(biāo)本采集及檢測(cè) 1）微循環(huán)觀察。將造模成功的家兔麻醉后，縱向沿腹正中線(xiàn)切開(kāi)腹壁后拉出腸道回盲部，輕輕將腸系膜置于盛有恒溫生理鹽水的臺(tái)式灌流槽的觀察視窗上。首先在低倍顯微鏡下選取微循環(huán)迂回通路，隨后在高倍鏡下選定觀測(cè)視野，通過(guò)BI-2000醫(yī)學(xué)圖像系統(tǒng)觀察并記錄選定部位給藥后3、6 h微循環(huán)毛細(xì)血管動(dòng)靜脈血色、管徑、流速、流態(tài)、毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)變化。2）心率、平均動(dòng)脈壓監(jiān)測(cè)。3）血清指標(biāo)監(jiān)測(cè)：分別在給藥后的第0、3、6小時(shí)采集各組家兔后大腿處?kù)o脈血，監(jiān)測(cè)血清IL-8、TNF-α變化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以表示；兩組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組腸系膜微靜脈及微動(dòng)脈管徑、血液流速及交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)比較 見(jiàn)表1，圖1、2。與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組微靜脈、微動(dòng)脈管徑明顯收縮，血流速度減慢，毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療6 h后，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，醒腦靜組微靜脈及微動(dòng)脈管徑明顯擴(kuò)張，血流速度顯著增快，毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組新西蘭大白兔腸系膜微靜脈、微動(dòng)脈管徑、流速及交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)比較（）

表1 各組新西蘭大白兔腸系膜微靜脈、微動(dòng)脈管徑、流速及交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)比較（）

與正常對(duì)照組比較，▲P ＜ 0.01；與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，△P ＜ 0.01。下同。

?

2.2 各組心率、平均動(dòng)脈壓、IL-8、TNF-α的比較 見(jiàn)表2。與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組心率、IL-8、TNF-α值明顯升高，血壓明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，治療6 h后，醒腦靜組心率、IL-8、TNF-α明顯下降，血壓顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 各組新西蘭大白兔心率、平均動(dòng)脈壓及IL-8、TNF-α比較（）

表2 各組新西蘭大白兔心率、平均動(dòng)脈壓及IL-8、TNF-α比較（）

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2.3 各組家兔腸系膜微循環(huán)血液流態(tài)比較 正常對(duì)照組微血管流態(tài)大多為線(xiàn)流，與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組血液流態(tài)以線(xiàn)粒流、粒緩流為主，少數(shù)為粒擺流甚至為出現(xiàn)血流停滯。與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，治療6 h后，醒腦靜組微血管液流態(tài)顯著改善，以線(xiàn)流、線(xiàn)粒流為主，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討 論

膿毒癥休克的實(shí)質(zhì)是一種微循環(huán)障礙疾病［3］，在膿毒癥休克的早期即可有血壓下降、凝血功能異常、乳酸升高等微循環(huán)障礙的表現(xiàn)，微循環(huán)障礙同時(shí)也是膿毒癥及膿毒癥休克發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)［4］。因此，微循環(huán)障礙能更早期和敏感的反映組織器官的功能障礙，并且與膿毒性休克的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。而微循環(huán)功能障礙往往與膿毒癥休克過(guò)程過(guò)量炎癥介質(zhì)釋放所引起的“瀑布樣”連鎖反應(yīng)，以及促炎及抗炎介質(zhì)的失衡、纖溶系統(tǒng)的激活有關(guān)。TNF-α主要是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，是炎癥反應(yīng)的最初啟動(dòng)者，在炎癥反應(yīng)中可激活細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘發(fā)IL-1、IL-6、IL-8以及繼發(fā)性炎癥介質(zhì)的合成及釋放。同時(shí)TNF-α可作用于內(nèi)皮細(xì)胞引起內(nèi)皮細(xì)胞通透性的改變，可進(jìn)一步引起微循環(huán)功能障礙，導(dǎo)致臟器損傷加重。IL-8屬于一種炎性趨化因子，是由巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子，能夠特異性趨化中性粒細(xì)胞，具有促炎性細(xì)胞趨化、促血管生成、促有絲分裂和誘導(dǎo)細(xì)胞增殖等多種生物學(xué)功能［5］，在COPD、胰腺炎及胃腸道炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［6-8］。IL-8在病原菌的調(diào)理吞噬殺滅過(guò)程亦起到了一定的作用，可影響膿毒癥的發(fā)生發(fā)展［9］。

醒腦靜注射液是由天然麝香、冰片、梔子、郁金等中藥經(jīng)科學(xué)方法提取精制而成的中藥制劑。麝香辛香走竄，內(nèi)而臟腑筋骨，外而肌膚毛竅，無(wú)所不達(dá)，功擅開(kāi)竅醒神、活血通經(jīng)、散結(jié)止痛；冰片辛苦，涼，清香宣散，具有開(kāi)竅醒神、清熱解毒、明目退翳的功效；梔子苦，寒，可瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒；郁金辛苦，寒，能活血止痛、行氣解郁、清心涼血，可增強(qiáng)麝香、冰片開(kāi)竅之功。四藥合用共奏清熱解毒、涼血活血、開(kāi)竅醒腦之效?，F(xiàn)代藥理研究麝香具有明顯的抗炎作用，尤其在炎癥早期、中期能起到較強(qiáng)作用，其水溶性多肽類(lèi)蛋白質(zhì)類(lèi)可通過(guò)影響中性粒細(xì)胞的釋放作用、減少活性脂質(zhì)的生成、降低游離鈣素的水平影響中性粒細(xì)胞的功能，起到抗炎癥反應(yīng)的作用［10］。冰片具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌作用［11］，可抑制炎癥因子IL-1β、TNF-α的表達(dá)［12］。有研究認(rèn)為梔子具有明顯的抗炎作用，并可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)進(jìn)程［13］。冰片、郁金可降低血液黏稠度，減少早期微血栓形成，對(duì)微循環(huán)的改善具有一定的作用［14］。有研究證實(shí)醒腦靜注射液能夠抑制炎性因子與血管內(nèi)皮素的表達(dá)，并通過(guò)降低全血比黏度、血漿比黏度、濕質(zhì)量、干質(zhì)量、血栓長(zhǎng)度、紅細(xì)胞電泳時(shí)間等改善微循環(huán)，還可透過(guò)血腦屏障以調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、促進(jìn)大腦修復(fù)、減輕腦水腫［2］，對(duì)膿毒癥腦病亦具有較好的治療效果。

Trzeciak［15］研究發(fā)現(xiàn)在對(duì)膿毒癥休克的患者進(jìn)行早期液體復(fù)蘇時(shí)，微循環(huán)血流量的增加與臟器功能的改善密切相關(guān)，認(rèn)為以改善微循環(huán)功能為目標(biāo)來(lái)進(jìn)行液體復(fù)蘇對(duì)膿毒癥休克患者的預(yù)后會(huì)有極大改善。本研究應(yīng)用醒腦靜注射液作用于膿毒癥休克新西蘭大白兔，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，治療6 h后，醒腦靜組微靜脈、微動(dòng)脈管徑明顯擴(kuò)張，血流速度增快，毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)開(kāi)放數(shù)明顯增多，心率、IL-8、TNF-α明顯下降，血壓顯著升高，血液流態(tài)顯著改善，以線(xiàn)流、線(xiàn)粒流為主，結(jié)果表明醒腦靜注射液可以改善膿毒癥休克新西蘭大白兔微循環(huán)功能，降低TNF-α、IL-8水平，改善炎癥反應(yīng)，為臨床治療膿毒癥提供了新的診療思路。

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Effects of Xingnaojing Injection on the Mesenteric Microcirculation of Rabbits with Septic Sho

ZHU Mengna，F(xiàn)AN Kailiang，HAN Ning，et al. Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong，Jinan 250000，China.

Objective：To observe the effects of Xingnaojing Injection on the mesenteric microcirculation of rabbits with septic shock.Methods：10 New Zealand white rabbits were randomly selected as group A（normal control group）of 30 rabbits，and the remaining 20 rabbits as model group.The rabbit models of septic shock were established by injecting lipopolysaccharide（LPS）through ear vein（1.0 mg/kg）.When models were established，they were randomly divided into 2 groups：group B（experimental control group）and group C（Xingnaojing Injection group）.After models were established，the rabbits in group C were given Xingnaojing Injection 5 mL/（kg·h）through ear vein，normal control group and experimental control group were given equivalent saline 5 mL/（kg·h）. Then the opening number of mesenteric artery and vein diameter，velocity，flow pattern，junction of capillary network of rabbits with septic shock at 3 h，6 h by BI-2000 image analysis system were observed and recorded.And the change of heart rate，mean arterial pressure，tumor necrosis factor（TNF-α），IL-8 level at 0 h，3 h，6 h were observed and recorded.Results：Compared with the normal control group，the diameter of the micro vein and micro artery shrank significantly，blood flow velocity decelerated，junction of capillary network opening number reduced obviously，and the heart rate，IL-8，TNF-α values increased significantly，blood pressure decreased，and the blood flow pattern mainly presented the line particle flow and the slow particle flow，some presented pendulum flow even for blood stagnation in the experimental control group.The differences were statistically significant（P＜0.01）.Compared with the experimental control group，the diameter of the micro vein and micro artery dilated significantly，blood flow velocity accelerated，junction of capillary network opening number increased obviously，and the heart rate，IL-8，TNF-α values decreased significantly，blood pressure increased，blood flow pattern was significantly improved and mainly presented the line particle flow and particle flow in the Xingnaojing Injection group after 6 h.The differences were statistically significant（P＜0.01）.Conclusion：Xingnaojing Injection can significantly improve the mesentery microcirculation in rabbits with septic shock，and decrease IL-8，TNF-α levels.

Xingnaojing Injection；Septic shock；Microcirculation；TNF-α；IL-8

·研究報(bào)告·

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81503543）；2013年山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2013-080，2011-095）；2013年山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃面上項(xiàng)目 （2013WS0250）；2012年山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2012YD19011）；山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2015ZRB14327）

△（電子郵箱：fankailiang@126.com）

R285.5

A

1004-745X（2016）11-2039-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.11.006

（2016-07-31）