□ 朱盈蕊 李 琦 仵軍紅 鄭州市食品藥品檢驗(yàn)所

高效液相色譜法測定食品中納他霉素的檢測方法分析

□ 朱盈蕊 李 琦 仵軍紅 鄭州市食品藥品檢驗(yàn)所

本文建立了一種檢測食品中納他霉素的分析方法。樣品采用甲醇超聲提取，流動(dòng)相為甲醇：11%（體積分?jǐn)?shù)）乙酸溶液，流速為1.00 mL/ min，波長為305 nm，加標(biāo)回收率為97.6%～104.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6%，該方法簡單、快速，為納他霉素的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供依據(jù)。

納他霉素是一種無臭、無味，低劑量且安全性高的天然防腐劑，能顯著抑制酵母菌、霉菌真菌等，被廣泛應(yīng)用于乳酪、果汁、肉制品和糕點(diǎn)等食品中。我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2014）規(guī)定了不同食品中納他霉素的使用限量。為更好地保證此類食品安全，確保食品中防腐劑的使用在有效的控制范圍內(nèi)，建立一種快速、高效的檢測方法十分必要。

目前，對(duì)納他霉素的檢測方法主要有薄層層析法、分光光度法、加壓毛細(xì)管電色譜、高效液相色譜法和高效液相色譜串聯(lián)色譜法等。本文采用高效液相色譜法檢測糕點(diǎn)中納他霉素的含量，通過對(duì)前處理方法和色譜分離條件的優(yōu)化來達(dá)到檢測限量低、靈敏度高的目的。

試驗(yàn)部分

儀器與試劑

Agilent 1260型液相色譜儀，配紫外檢測器，安捷倫科技有限公司；Techcomp CT14RD高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)，天美（中國）科學(xué)儀器有限公司；VORTEX-5型渦旋混合器，江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；ME201E電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

納他霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%）0.010 0 g，用甲醇定容至100 mL，濃度為100 μg/mL。

納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，其濃度為1 μg/mL。分別準(zhǔn)確量取1 μg/mL溶液0.25、0.50、1.25、2.50 mL和 5.00 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容于刻度，作標(biāo)準(zhǔn)系列。

甲醇、乙酸為色譜純，其余試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為超純水，樣品購自本地超市。

試驗(yàn)條件

C18反相色譜柱（5μm，4.6× 250 mm）；流動(dòng)相為甲醇∶11%乙酸溶液=50∶50；流速為1.00 mL/min，波長為305 nm；進(jìn)樣量為10 μL。

樣品處理

精確稱取5.00 g樣品，置于50 mL離心管中，加入30 mL甲醇，于渦旋混合器上混合均勻，超聲提取30 min，加水10 mL混合均勻后置于離心機(jī)上以10 000 r/min離心10 min，上清液過0.45 μm濾膜，濾液待上液相色譜測定。

結(jié)果與討論

色譜條件的優(yōu)化

納他霉素難溶于大部分有機(jī)溶劑，微溶于水，易溶于乙酸，試驗(yàn)選擇甲醇-乙酸溶液為流動(dòng)性，并對(duì)不同乙酸濃度和比例進(jìn)行討論。由試驗(yàn)可得,當(dāng)甲醇和乙酸溶液比例為50∶50時(shí)，納他霉素達(dá)到最大響應(yīng)值；乙酸體積分?jǐn)?shù)為11%時(shí)，納他霉素的峰型最佳。因此選擇甲醇∶11%乙酸溶液為50∶50的比例為流動(dòng)性對(duì)納他霉素進(jìn)行測定。

對(duì)納他霉素標(biāo)準(zhǔn)系列濃度進(jìn)行測定，以納他霉素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：納他霉素質(zhì)量濃度在0.01～0.20 μg/mL，與其峰面積呈線性關(guān)系。回歸方程為y=28.011 4c-4.334 7e-2，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9。將對(duì)照品逐步稀釋，當(dāng)稀釋至0.02 μg/mL以下時(shí)，納他霉素峰高在3倍基線噪聲以下，故0.02 μg/mL為其最低檢出濃度；按測定方法計(jì)算，定量檢出限為0.04 mg/kg。

方法的回收率

在兩種糕點(diǎn)空白樣品中添加3個(gè)濃度水平的納他霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，作加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。由表1可知，納他霉素在糕點(diǎn)中的加標(biāo)回收率為93.6%～104.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為為＜6%。

表1 納他霉素的回收率

結(jié)論

本方法采用高效液相色譜法測定納他霉素含量，選取糕點(diǎn)為實(shí)驗(yàn)材料，通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，得納他霉素質(zhì)量濃度在為0.01～0.20 μg/mL范圍，與其峰面積呈線性關(guān)系。最低檢出濃度為0.02 μg/mL，定量檢出限為0.04 mg/kg，加標(biāo)回收率為93.6%～104.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜6%。該方法操作簡單、快速，準(zhǔn)確可靠，為食品中納他霉素的分析檢測提供了一定的參考依據(jù)。

存在問題及展望

納他霉素對(duì)真菌類有明顯的抑制作用，對(duì)細(xì)菌和乳酸菌效果不大，若專一使用納他霉素?zé)o法達(dá)到預(yù)期效果，因此與其他防腐劑協(xié)同使用應(yīng)是未來的重點(diǎn)研究方向。

納他霉素作為一種天然防腐劑以其安全、健康的特點(diǎn)而備受人們的關(guān)注，我國的納他霉素產(chǎn)業(yè)起步較晚，產(chǎn)量較低，普及率不高。隨著對(duì)其研究的逐步深入以及生產(chǎn)技術(shù)的逐步提高，會(huì)極大地推動(dòng)納他霉素的普及使用，也能更好地發(fā)揮其防腐作用。

朱盈蕊（1986-），女，漢族，河南鄧州人，鄭州市食品藥品檢驗(yàn)所，碩士研究生。研究方向：食品安全與分析。