■陳 鵬陶 冶

(1.北京英惠爾生物技術(shù)有限公司，北京100081；2.西南大學(xué)，重慶402460)

隨著國(guó)內(nèi)畜禽抗生素限用和禁用規(guī)定的制定和實(shí)施，比如2017年5月后，硫酸黏桿菌素添加到飼料中將是違法行為，飼料企業(yè)在評(píng)估和篩選可替代抗生素的添加劑的壓力增大。飼料添加劑企業(yè)對(duì)該類添加劑的研發(fā)和應(yīng)用的興趣也大幅度的提高。酵母源飼料或添加劑作為對(duì)動(dòng)物腸道健康有益的一類產(chǎn)品，成為了近年來(lái)研發(fā)生產(chǎn)和應(yīng)用的主要方向和趨勢(shì)。酵母培養(yǎng)物是利用特選的酵母菌種在特殊的工藝條件下，經(jīng)過(guò)液態(tài)培養(yǎng)基和固體谷物培養(yǎng)基，進(jìn)行深度發(fā)酵而產(chǎn)生多種代謝物，包括變性的培養(yǎng)基（含肽、寡糖等）、酵母細(xì)胞本身和細(xì)胞外代謝物（含營(yíng)養(yǎng)代謝物、增味物質(zhì)和芳香物質(zhì)等）。很多研究已表明，酵母培養(yǎng)物在飼料中添加可以促進(jìn)反芻動(dòng)物、豬和家禽的健康，提高胃腸道對(duì)飼料的消化率，改善生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能。國(guó)內(nèi)外對(duì)酵母培養(yǎng)物在仔豬上的應(yīng)用效果和機(jī)制有一些報(bào)道。Kornegay等（1995）[1]發(fā)現(xiàn)，仔豬強(qiáng)化的開口料中加入酵母培養(yǎng)物并沒(méi)有對(duì)仔豬的生長(zhǎng)性能產(chǎn)生影響，且當(dāng)日糧纖維類型不同時(shí)，作用效果不同。這表示，酵母培養(yǎng)物的效應(yīng)取決于日糧原料特性。Peet-Schwering等（2007）[2]試驗(yàn)表明，酵母培養(yǎng)物可以作為斷奶仔豬日糧的抗生素替代。Shen等（2009）[3]研究了不同添加梯度的酵母培養(yǎng)物對(duì)斷奶仔豬的影響，結(jié)果表明，5 g/kg酵母培養(yǎng)物組提高了仔豬的生長(zhǎng)性能，其機(jī)制很可能是改善了腸絨毛的高度、腸道免疫反應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率，并認(rèn)為酵母培養(yǎng)物可以作為斷奶仔豬日糧抗生素替代。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和分組

試驗(yàn)動(dòng)物為120頭斷奶日齡為28 d的仔豬。隨機(jī)分3個(gè)處理組，包括對(duì)照組、0.5%酵母培養(yǎng)物組和1%酵母培養(yǎng)物組。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)保育仔豬日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧上分別添加0.5%和1%的酵母培養(yǎng)物。每個(gè)處理組分為5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8頭仔豬。試驗(yàn)地點(diǎn)位于重慶市六方格農(nóng)業(yè)綜合開發(fā)有限公司榮昌三元豬繁殖培育基地；試驗(yàn)時(shí)間是2017年1～2月。

1.2 試驗(yàn)日糧

酵母培養(yǎng)物（商品名，百惠邦）來(lái)源于北京英惠爾生物技術(shù)有限公司。保育仔豬日糧為商品飼料，由普瑞納公司提供，基礎(chǔ)日糧主要組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)由固定飼養(yǎng)員專人飼喂，日常的衛(wèi)生、消毒、免疫、保健工作均按豬場(chǎng)正常的操作規(guī)程實(shí)施。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

記錄受試仔豬試驗(yàn)初期、試驗(yàn)14 d和試驗(yàn)37 d的個(gè)體重；計(jì)算試驗(yàn)0～14 d、15～37 d和全期的仔豬采食量和平均日增重，計(jì)算料肉比。內(nèi)毒素、IgG、IL-2和CH50用試劑盒測(cè)定，血液生理指標(biāo)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，測(cè)定仔豬37 d血液中IL-6 mRNA的表達(dá)量。

表1 仔豬基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（%）

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Du?can's法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬平均個(gè)體重的影響(見(jiàn)表2)

表2 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬平均個(gè)體重的影響(kg)

試驗(yàn)初期，各組仔豬個(gè)體重沒(méi)有顯著差異。試驗(yàn)第14 d和37 d，與對(duì)照組仔豬相比，0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組的仔豬個(gè)體重極顯著提高（P＜0.01）。

2.2 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬增重、采食量和料肉比的影響（見(jiàn)表3）

在試驗(yàn)0～14、14～37 d和全期，與對(duì)照組仔豬相比，0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組的仔豬平均日增重極顯著提高（P＜0.01）。酵母培養(yǎng)物組減少了各試驗(yàn)階段保育豬的平均采食量和料肉比，在全期階段，與對(duì)照組相比，1%酵母培養(yǎng)物組仔豬平均日增重提高了13.74%，平均日采食量減少了8.50%，料肉比改善了19.72%。

2.3 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬血液免疫指標(biāo)的影響（見(jiàn)表4）

表3 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬增重、采食量和料肉比的影響

表4 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬血液免疫指標(biāo)的影響

在試驗(yàn)第14 d，與對(duì)照組相比，1%酵母培養(yǎng)物組顯著提高了CH50、IL-2和IL-6水平（P＜0.05），顯著降低了ET水平（P＜0.05）。在試驗(yàn)第37 d，與對(duì)照組相比，1%酵母培養(yǎng)物組極顯著提高了IgG和IL-2水平（P＜0.01），極顯著降低了ET水平（P＜0.01），顯著提高了CH50水平（P＜0.05）。

2.4 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬血液中IL-6 mRNA表達(dá)水平的影響（見(jiàn)表5）

表5 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬血液中IL-6 mRNA表達(dá)水平的影響

試驗(yàn)第37 d，1%酵母培養(yǎng)物組極顯著提高了IL-6 mRNA的表達(dá)量（P＜0.01），0.5%酵母培養(yǎng)物組和對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.5 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育仔豬血液生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表6）

在試驗(yàn)第14 d，與對(duì)照組相比，1%酵母培養(yǎng)物組極顯著提高了紅細(xì)胞水平（P＜0.01），0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組顯著提高了血紅蛋白水平（P＜0.05），0.5%酵母培養(yǎng)物組顯著降低了血小板水平。在試驗(yàn)第37 d，與對(duì)照組相比，0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組極顯著提高了白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞水平（P＜0.01），1%酵母培養(yǎng)物組極顯著提高了紅細(xì)胞水平（P＜0.01），0.5%酵母培養(yǎng)物組顯著提高了紅細(xì)胞水平（P＜0.05），0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組極顯著降低了血小板水平（P＜0.01）。

表6 酵母培養(yǎng)物對(duì)保育豬血液生化指標(biāo)的影響

3 討論

仔豬斷奶后，腸道免疫系統(tǒng)沒(méi)有完全建立，致病性有害細(xì)菌吸附在小腸絨毛上，釋放多種毒素，如內(nèi)毒素，導(dǎo)致仔豬斷奶后腹瀉甚至死亡。在本試驗(yàn)中，仔豬血漿內(nèi)毒素水平的差異是受日糧中酵母培養(yǎng)物水平所影響，1%酵母培養(yǎng)物組試驗(yàn)在前期和后期分別顯著和極顯著的降低了內(nèi)毒素水平。酵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)液體和固體發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)生的多種營(yíng)養(yǎng)和功能性代謝產(chǎn)物，不僅為仔豬提供了優(yōu)質(zhì)營(yíng)養(yǎng)素，同時(shí)也是腸道微生物菌群的營(yíng)養(yǎng)底物，促進(jìn)仔豬腸道內(nèi)有益微生物群的組成比例。有益微生物的數(shù)量和種類優(yōu)勢(shì)抑制了病原微生物群的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖，減少有害微生物產(chǎn)生內(nèi)毒素的含量?，F(xiàn)場(chǎng)飼喂試驗(yàn)記錄的腹瀉指數(shù)數(shù)據(jù)也表明，1%酵母培養(yǎng)物組的腹瀉指數(shù)最低，因腹瀉導(dǎo)致的死亡率也最低。

本試驗(yàn)中沒(méi)有測(cè)定對(duì)腸道菌落狀態(tài)的影響，但是一些文獻(xiàn)的結(jié)果并不一致。Mathew等（1998）[4]研究了酵母培養(yǎng)物對(duì)剛斷奶仔豬腸道微生物數(shù)量、揮發(fā)性脂肪酸的影響，結(jié)果表明，酵母培養(yǎng)物沒(méi)有改變仔豬主要菌落的數(shù)量和發(fā)酵產(chǎn)物的凈含量，盡管增加了斷奶仔豬的采食量和改善了其它生長(zhǎng)指標(biāo)。認(rèn)為仔豬性能的提高是其他原因?qū)е碌?。Weedman等（2011）[5]研究表明，仔豬在受到斷奶和運(yùn)輸雙重應(yīng)激時(shí)，酵母培養(yǎng)物有免疫調(diào)節(jié)作用，并和腸道菌落互相作用。Price等（2010）[6]進(jìn)一步探索了酵母培養(yǎng)物對(duì)經(jīng)過(guò)沙門氏菌感染的斷奶仔豬的影響，發(fā)現(xiàn)日糧中添加酵母培養(yǎng)物的仔豬比對(duì)照組仔豬在經(jīng)過(guò)沙門氏菌感染后增重更多，并說(shuō)明體重的提高很可能與胃腸道中有益微生物比例增多有關(guān)。酵母培養(yǎng)物增強(qiáng)了胃腸道形態(tài)的恢復(fù)，維持或提高了有益菌的數(shù)量，從而促進(jìn)了仔豬的生長(zhǎng)。Kiarie等（2011）[7]研究了受大腸桿菌（K88）感染的斷奶仔豬，經(jīng)飼喂酵母培養(yǎng)物以后，食欲得到改善，回腸食糜微生物的豐度和多樣性增高，同時(shí)減少了大腸桿菌對(duì)黏膜的附著和結(jié)腸氨的量，意味著腸道更健康。總結(jié)這些研究，表明仔豬在受到較強(qiáng)的應(yīng)激時(shí)，酵母培養(yǎng)物改善腸道菌落結(jié)構(gòu)顯著。

臨床上將血液生理指標(biāo)化驗(yàn)作為最常用的輔助診斷依據(jù)。不同的指標(biāo)具有不同的生理意義：紅細(xì)胞具有免疫和參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的功能；白細(xì)胞是主要免疫細(xì)胞之一，其數(shù)量多少直接影響動(dòng)物免疫能力；淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要物質(zhì)，它對(duì)抗原有明顯的專一性，接受抗原刺激后，則被激活、增殖、分化、發(fā)生免疫應(yīng)答；血紅蛋白的主要功能是攜帶O2和CO2。本試驗(yàn)前14 d，試驗(yàn)豬場(chǎng)沒(méi)有出現(xiàn)群體腹瀉，各組試驗(yàn)豬腹瀉發(fā)生率不高。因此試驗(yàn)前期仔豬血液生理指標(biāo)表明酵母培養(yǎng)物并沒(méi)有對(duì)腹瀉啟動(dòng)劇烈的免疫調(diào)節(jié)，對(duì)白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響不顯著，僅顯著上調(diào)了血紅蛋白、紅細(xì)胞的水平。在試驗(yàn)第14 d到37 d，豬場(chǎng)出現(xiàn)腹瀉時(shí)，酵母培養(yǎng)物啟動(dòng)了高水平的免疫應(yīng)答，淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)量因此極顯著上調(diào)（P＜0.01）。Davis等（2004）[8]研究表明，給仔豬日糧中添加酵母細(xì)胞壁甘露寡糖，仔豬血液中的淋巴細(xì)胞比例有增加趨勢(shì)，中性粒細(xì)胞比例又降低趨勢(shì)。

試驗(yàn)第14 d，0.5%和1%酵母培養(yǎng)物組都顯著降低了血清中血小板水平（P＜0.05），并且在試驗(yàn)第37 d，兩個(gè)處理組極顯著地降低了血清中血小板水平（P＜0.01）。血小板有維護(hù)血管壁完整性與生理止血全過(guò)程的功能，血小板上還存在內(nèi)毒素受體，對(duì)進(jìn)入血循環(huán)的內(nèi)毒素具有清除作用。在本試驗(yàn)中，酵母培養(yǎng)物下調(diào)了血小板水平，其原因很可能是酵母培養(yǎng)物在試驗(yàn)14 d和37 d，分別顯著和極顯著地降低了血液中的內(nèi)毒素水平，因此負(fù)反饋了血小板的水平。

補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體保護(hù)性免疫應(yīng)答和自身穩(wěn)定，協(xié)助吞噬細(xì)胞和抗體殺滅病原微生物，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，同時(shí)也是重要生物效應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)放大系統(tǒng)，在機(jī)體的非特異性和特異性免疫中發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)中只有1%酵母培養(yǎng)物組顯著提高了血液中的的總補(bǔ)體水平，

本試驗(yàn)中酵母培養(yǎng)物組的仔豬平均日增重都極顯著地高于對(duì)照組（P＜0.01），平均日采食量和料肉比都有隨著添加量增加而降低的趨勢(shì)，然而0.5%和1%組的平均日增重沒(méi)有差異。仔豬平均日采食量降低，平均日增重提高，有可能是因?yàn)榻湍概囵B(yǎng)物提高了仔豬對(duì)飼料消化利用率(Upadhaya，2015)[9]。

4 結(jié)論

日糧中添加酵母培養(yǎng)物改善了保育仔豬的生長(zhǎng)性能，添加量0.5%和1%酵母培養(yǎng)物的效果相當(dāng)；酵母培養(yǎng)物提高了仔豬的免疫系統(tǒng)的應(yīng)答能力，添加1%酵母培養(yǎng)物的免疫保護(hù)作用要好于添加0.5%酵母培養(yǎng)物。當(dāng)動(dòng)物受到應(yīng)激劇烈或者患病時(shí)，酵母培養(yǎng)物可以在一定程度上減少應(yīng)激，降低死亡率。