侯衛(wèi)東，王俊宏△，張志宇，李進(jìn)，劉艷曉，丁紅霞，禹遠(yuǎn)遠(yuǎn)，田勇，劉艷峰

甲狀腺乳頭狀癌中CA19-9、CA15-3和CA125的表達(dá)及意義

侯衛(wèi)東1，王俊宏1△，張志宇1，李進(jìn)1，劉艷曉1，丁紅霞1，禹遠(yuǎn)遠(yuǎn)1，田勇1，劉艷峰2

目的 探討糖類(lèi)抗原19-9（CA19-9）、糖類(lèi)抗原15-3（CA15-3）和糖類(lèi)抗原125（CA125）在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化MaxVision兩步法檢測(cè)80例PTC和80例甲狀腺良性病變（BTL，包括34例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、26例橋本甲狀腺炎和20例濾泡性腺瘤）患者中CA19-9、CA15-3和CA125的表達(dá)狀況，分析其表達(dá)與PTC患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果80例PTC中CA19-9、CA15-3、CA125陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.0%、100.0%、43.8%，與BTL相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CA19-9、CA15-3、CA125的表達(dá)與患者年齡、性別、瘤結(jié)節(jié)數(shù)目、直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無(wú)關(guān)（P＞0.05）。CA19-9、CA15-3、CA125診斷PTC的靈敏度分別為85.0%、100.0%、43.8%，特異度分別為91.3%、36.3%、91.3%。結(jié)論CA19-9、CA153、CA125的表達(dá)有助于PTC和BTL的鑒別診斷。

甲狀腺腫瘤；癌，乳頭狀；免疫組織化學(xué)；診斷，鑒別；敏感性與特異性；CA-19-9抗原；CA-15-3抗原；CA-125抗原

上世紀(jì)80年代，人們利用雜交瘤技術(shù)及單克隆抗體識(shí)別系統(tǒng)獲得了能識(shí)別腫瘤特異性的大分子的糖類(lèi)抗原（carbohydrate antigen,CA）。CA是腫瘤細(xì)胞的相關(guān)抗原，常用的CA系列有：CA19-9（胰腺、腸癌相關(guān)抗原）、CA15-3（乳腺癌相關(guān)抗原）、CA125（卵巢癌相關(guān)抗原），這些腫瘤特異性大分子在腫瘤組織中的含量高于正常組織，與腫瘤的組織發(fā)生、細(xì)胞分化、細(xì)胞功能有關(guān)。檢測(cè)這些指標(biāo)有助于腫瘤的診斷分類(lèi)、預(yù)后判斷以及療效監(jiān)測(cè)。臨床病理檢查主要用于確定轉(zhuǎn)移癌原發(fā)部位。隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)在病理診斷中的廣泛應(yīng)用，研究人員發(fā)現(xiàn)一些蛋白標(biāo)志物特異度較低，給臨床病理診斷帶來(lái)很多困惑。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道CA19-9在甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）中的表達(dá)率達(dá)50%～70%［1-2］；近40%的PTC可表達(dá)CA125［3］。國(guó)內(nèi)尚鮮見(jiàn)CA19-9、CA15-3、CA125在PTC中表達(dá)情況的報(bào)道。最常見(jiàn)的甲狀腺良性病變（benign thyroid lesions，BTL）包括結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎，其組織形態(tài)有時(shí)亦可呈乳頭狀或假乳頭狀增生，以致與PTC不易鑒別。鑒于此，本研究對(duì)常用腫瘤標(biāo)志物CA19-9、CA15-3和CA125在PTC和BTL的表達(dá)情況進(jìn)行分析，探討該3種抗原的表達(dá)在PTC和BTL診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值和局限性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象收集2013年1月—2015年12月中國(guó)人民解放軍第152醫(yī)院病理科甲狀腺手術(shù)存檔標(biāo)本160例，其中PTC 80例，男32例，女48例，年齡22～71歲，平均（45.42± 11.15）歲，年齡≤45歲者53例，＞45歲者27例。PTC單個(gè)瘤結(jié)節(jié)52例，多個(gè)瘤結(jié)節(jié)28例；腫瘤最大直徑≤1 cm者54例，＞1 cm者26例。伴有中央?yún)^(qū)和（或）頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，其余56例未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；術(shù)后病理分期為Ⅰ期34例、Ⅱ期24例、Ⅲ期18例、Ⅳ期4例（腫瘤分期參照UICC/AJCC第七版TNM分期）。另80例BTL患者中，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫34例、橋本甲狀腺炎26例，濾泡性腺瘤20例，其中男25例，女55例，年齡20～72歲，平均（43.93±11.65）歲。

1.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CA19-9、CA15-3和CA125表達(dá)所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片，免疫組化采用MaxVision兩步法，所用抗體為CA19-9（TA888）、CA15-3（DF3）、CA125（TA347），均為即用型試劑，操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行（主要設(shè)備為德國(guó)Leica235切片機(jī)、德國(guó)Leica Bond-max全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)，所用試劑均購(gòu)自福州邁新公司）。使用陽(yáng)性對(duì)照片做陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗做陰性對(duì)照，對(duì)照片與研究標(biāo)本在同一條件下進(jìn)行染色。

1.3 結(jié)果判定CA19-9、CA15-3和CA125表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和（或）胞膜。染色陽(yáng)性為陽(yáng)性部位呈淺黃色至棕褐色。綜合判斷高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分。按染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分：每例隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分比，≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度得分和陽(yáng)性細(xì)胞百分率得分相加，0～1分為陰性（－），2～3分為弱陽(yáng)性（+），4～5分為中等陽(yáng)性（++），6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。分類(lèi)數(shù)據(jù)采用率或百分?jǐn)?shù)表示，并采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。按照臨床流行病學(xué)診斷試驗(yàn)研究評(píng)價(jià)計(jì)算方法，計(jì)算不同免疫標(biāo)志物單獨(dú)診斷的靈敏度和特異度。

2 結(jié)果

2.1 CA19-9、CA15-3和CA125的表達(dá)80例PTC中CA19-9陽(yáng)性率為85.0%，陽(yáng)性定位于胞質(zhì)及胞膜，胞質(zhì)普遍著色較弱，細(xì)胞頂端的胞膜或腔緣著色顯著增強(qiáng)，多為中等至強(qiáng)陽(yáng)性（圖1A）；在BTL中陽(yáng)性率為8.8%，均為灶狀弱陽(yáng)性；CA19-9在PTC與BTL中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CA15-3在PTC中陽(yáng)性率100.0%，陽(yáng)性定位于胞質(zhì)，細(xì)胞頂端胞質(zhì)或腔緣染色增強(qiáng)，多為彌漫性中等至強(qiáng)陽(yáng)性（圖1B）；在BTL中的陽(yáng)性率為63.8%，以弱至中等陽(yáng)性為主；CA15-3在PTC與BTL中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CA125在PTC中陽(yáng)性率為43.8%，陽(yáng)性定位于細(xì)胞頂端胞膜或腔緣，著色呈線(xiàn)條狀，多為片狀中等陽(yáng)性（圖1C）；在BTL中陽(yáng)性率為8.8%，多為胞質(zhì)弱陽(yáng)性；CA125在PTC與BTL中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。以上結(jié)果及BTL分型見(jiàn)表1。

Tab.1 Expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 in PTC and BTL表1 CA19-9、CA15-3和CA125在PTC及BTL中的表達(dá)

2.2 CA19-9、CA15-3和CA125的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系CA19-9和CA125的陽(yáng)性率在不同年齡、性別、腫瘤直徑、瘤結(jié)節(jié)數(shù)目、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。CA15-3在不同臨床病理參數(shù)組間全部表達(dá)陽(yáng)性（均為100%）。

Tab.2 Relationship between the expressions of CA19-9, CA15-3 and CA125 and the clinical pathological parameters of PTC表2 CA19-9、CA15-3和CA125的表達(dá)與PTC臨床病理參數(shù)的關(guān)系例（%）

2.3 CA19-9、CA15-3和CA125對(duì)PTC的診斷價(jià)值CA19-9、CA15-3和CA125在PTC中表達(dá)的靈敏度分別為85.0%（68/80）、100.0%（80/80）、43.8%（35/80），特異度分別為91.3%（73/80）、36.3%（29/ 80）、91.3%（73/80）。

3 討論

3.1 PTC中CA19-9表達(dá)的臨床意義CA19-9是Koprowski等［4］于1979年用人的結(jié)腸癌培養(yǎng)株（SW1116）為免疫原制備的單克隆抗體（NS19-9）所識(shí)別的一種抗原，類(lèi)似單唾液酸Lewis血型抗原物質(zhì)。CA19-9為細(xì)胞膜上的糖類(lèi)蛋白，分子質(zhì)量大于1 000 ku，是許多細(xì)胞的組成成分，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮、胃腸等處，在血清中以唾液黏蛋白形式存在，是存在于血液循環(huán)的消化道腫瘤相關(guān)抗原［5-6］。通常情況下CA19-9的合成量是極微量的，但在上述組織出現(xiàn)異常，尤其是惡性腫瘤時(shí)，其合成量通常明顯增加，造成血清中的CA19-9顯著增加。當(dāng)手術(shù)徹底切除腫瘤后，其在血清中的含量亦會(huì)大幅下降，如再上升，則預(yù)示腫瘤復(fù)發(fā)。因此其臨床血檢CA19-9的意義在于輔助診斷、預(yù)后判斷以及療效監(jiān)測(cè)［5-6］。CA19-9在惡性腫瘤中表達(dá)廣泛，對(duì)消化道腫瘤的診斷具有較高價(jià)值，主要包括胰腺癌、膽管癌、胃癌和結(jié)直腸癌，其中以胰腺癌陽(yáng)性率最高；此外在其他如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌等亦可表達(dá)［5,7］。臨床病理檢查中主要用于確定轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶部位，染色陽(yáng)性常常被認(rèn)為來(lái)源于胰腺或消化道。上世紀(jì)90年代初國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道CA19-9在PTC中的表達(dá)率為50%～70.0%，而在BTL尤其是濾泡性腺瘤中的表達(dá)從0～50%不等［1-2］。國(guó)內(nèi)尚鮮見(jiàn)CA19-9在PTC中研究的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究顯示CA19-9在PTC中表達(dá)率為85.0%，多為中等以上強(qiáng)度著色；且CA19-9用于PTC與BTL鑒別診斷時(shí)具有較高靈敏度和特異度；而在BTL中陽(yáng)性表達(dá)較弱或完全陰性，故其中等以上強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)對(duì)PTC有很好的提示意義。分析與文獻(xiàn)報(bào)道表達(dá)不一致的原因可能與早期文獻(xiàn)觀(guān)察例數(shù)較少以及當(dāng)時(shí)免疫組化技術(shù)檢測(cè)靈敏度及特異度較低有關(guān)。PTC形態(tài)學(xué)診斷主要依據(jù)典型的細(xì)胞核特征及復(fù)雜的乳頭狀結(jié)構(gòu)，而有時(shí)一些BTL亦可呈乳頭狀或假乳頭狀增生，當(dāng)遇到細(xì)胞核的特征不典型時(shí)，鑒別診斷常會(huì)存在一定困難，此時(shí)應(yīng)用CA19-9對(duì)PTC的確診具有重要參考意義。檢測(cè)血CA19-9是評(píng)價(jià)PTC術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或去分化的有效指標(biāo)［8］，但本組資料未檢測(cè)到CA19-9與臨床特征及預(yù)后有關(guān)。

3.2 PTC中CA15-3表達(dá)的臨床意義CA15-3是細(xì)胞表面的一種糖類(lèi)抗原，1984年Hilkens等［9］從人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成小鼠單克隆抗體（115-DB）；Kufe等［10］從肝轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞膜制成單克隆抗體（DF-3），這些抗體均可識(shí)別出CA15-3，其對(duì)人類(lèi)乳腺脂肪球膜抗原及乳腺癌細(xì)胞膜均具有特異性。CA15-3是黏糖蛋白1（mucin-1，MUC1）基因編碼的一種高糖基化、高分子量的跨膜糖蛋白，當(dāng)細(xì)胞癌變時(shí)，細(xì)胞內(nèi)糖基轉(zhuǎn)化酶被激活，其表面CA15-3表達(dá)增加。目前，以MUC1為靶點(diǎn)的免疫治療正成為癌癥治療新的研究方向，作為MUC1癌基因產(chǎn)物的可溶性成分，CA15-3水平升高可能是MUC1的代表性標(biāo)志物［11］。此外，CA15-3還可表達(dá)于甲狀腺癌、肺癌、卵巢癌及胰腺癌等［12］。本研究顯示CA15-3（DF-3）在PTC中的表達(dá)明顯高于BTL，靈敏度高達(dá)100.0%，多為彌漫性中等以上強(qiáng)度表達(dá)，細(xì)胞頂端胞質(zhì)或腔緣著色較強(qiáng)。其在BTL的表達(dá)率為63.8%，多為低至中等強(qiáng)度表達(dá)，但需注意的是BTL濾泡內(nèi)的膠質(zhì)著色亦較強(qiáng)，乍看甚至遮掩陰性的濾泡細(xì)胞。低特異度限制了CA15-3在PTC診斷中的應(yīng)用，其單獨(dú)陽(yáng)性不能確診PTC，但中等以上強(qiáng)度的陽(yáng)性表達(dá)對(duì)PTC有較好的警示作用；而高靈敏度則使CA15-3在PTC鑒別診斷中有其獨(dú)特價(jià)值，即CA15-3陰性表達(dá)可以作為一項(xiàng)PTC的排除指標(biāo)［1］。

3.3 PTC中CA125表達(dá)的臨床意義1981年美國(guó)科學(xué)家Bast等［13］以卵巢上皮癌細(xì)胞株（ovarian carcinoma antigen，OVCA433）為抗原制備了單克隆抗體OC125，OC125所識(shí)別的抗原稱(chēng)為CA125，是上皮性卵巢癌尤其是漿液性腺癌的主要標(biāo)志物。此后陸續(xù)發(fā)現(xiàn)其可表達(dá)于胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、食管癌等［14］。另?yè)?jù)報(bào)道近40%的PTC可表達(dá)CA125［1,3］，本研究顯示CA125在PTC中的陽(yáng)性率為43.8%，與文獻(xiàn)報(bào)道相近。陽(yáng)性特征是細(xì)胞頂端的胞膜或腔緣呈線(xiàn)條狀著色，多為中等強(qiáng)度表達(dá)，而在BTL中的陽(yáng)性率僅為8.8%，多為灶狀弱表達(dá)，有時(shí)BTL濾泡內(nèi)膠質(zhì)亦可著色；本研究證實(shí)CA125在PTC與BTL中的表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于其在PTC中的特異度高達(dá)91.3%，故CA125中等以上強(qiáng)度陽(yáng)性表達(dá)對(duì)鑒別PTC具有較高的參考價(jià)值。

綜上所述，當(dāng)遇見(jiàn)不典型病例或鑒別診斷有困難時(shí)，聯(lián)合檢測(cè)CA19-9、CA153和CA125對(duì)PTC的確診具有重要參考價(jià)值，有助提高正確診斷率。值得注意的是三者均不宜單獨(dú)用于PTC的鑒別診斷，尤其是在判斷頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的原發(fā)部位時(shí)，要考慮到PTC的可能性，以免誤診為胰腺癌、乳腺癌或卵巢癌等轉(zhuǎn)移。

（圖1見(jiàn)插頁(yè)）

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（2016-06-14收稿 2016-09-26修回）

（本文編輯 李鵬）

Expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and their significance in papillary thyroid carcinoma

HOU Weidong1,WANG Junhong1△,ZHANG Zhiyu1,LI Jin1,LIU Yanxiao1,DING Hongxia1,YU Yuanyuan1,TIAN Yong1, LIU Yanfeng2
1 Division of Endocrinology,Pingdingshan Municipal First People’s Hospital,Pingdingshan 467000,China; 2 Department of Pathology,People’s Liberation Army 152 Hospital△

ObjectiveTo investigate the expressions of carbohydrate antigen 19-9(CA19-9),carbohydrate antigen 15-3(CA15-3)and carbohydrate antigen 125(CA125)and their clinical significance in papillary thyroid carcinoma(PTC).MethodsThe expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 were detected by immunohistochemical MaxVision method in 80 cases of PTC and 80 cases of benign thyroid lesions(BTL),including 34 cases of nodular goiter,26 cases of Hashimoto's thyroiditis and 20 cases of follicular adenoma.The relationship between expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and the clinical pathological characteristics were analyzed.ResultsThe expression rates of CA19-9,CA15-3 and CA125 in 80 cases of PTC were 85%,100%and 43.8%respectively,compared with BTL,the difference was statistically significant (P＜0.01).There was no significant correlation between expressions of CA19-9,CA15-3 and CA125 and age,gender, number and diameter of tumor nodules,lymph node metastasis,and TNM staging(P＞0.05).The sensitivity of CA19-9, CA15-3 and CA125 in the differential diagnosis of PTC and BTL were 85%,100%and 43.8%respectively,and the specificity were 91.3%,36.3%and 91.3%,respectively.ConclusionThe expressions of CA19-9,CA153 and CA125 are helpful for the differential diagnosis of PTC and BTL.

thyroid neoplasms;carcinoma,papillary;immunohistochemistry;diagnosis,differential;sensitivity and specificity;CA-19-9 antigen;CA-15-3 antigen;CA-125 antigen

R736.1

A

10.11958/20160511

1河南省平頂山市第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科（郵編467000）；2中國(guó)人民解放軍152醫(yī)院病理科

侯衛(wèi)東（1981），男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌代謝疾病的基礎(chǔ)與臨床研究

△通訊作者E-mail:hou_dm@126.com