吳皓 孫常領(lǐng)

耳聾是人類最常見(jiàn)的致殘性疾病之一，據(jù)WHO 2013年的數(shù)據(jù)，全世界范圍內(nèi)約有3.6億人遭受耳聾的困擾[1]。耳聾不但會(huì)造成嚴(yán)重的交流障礙，更為嚴(yán)重的是影響兒童的言語(yǔ)和認(rèn)知功能發(fā)育[2]。耳聾可大致分為三種類型：傳導(dǎo)性耳聾、感音神經(jīng)性耳聾和混合性耳聾[3]。其中，感音神經(jīng)性耳聾占耳聾的大部分。感音神經(jīng)性耳聾是由于耳蝸毛細(xì)胞、聽(tīng)神經(jīng)、聽(tīng)傳導(dǎo)通路各級(jí)神經(jīng)元受損害所導(dǎo)致的聲音感受與神經(jīng)沖動(dòng)傳遞障礙，其常見(jiàn)的致聾因素有耳毒性藥物使用、感染、噪聲暴露、年齡及遺傳因素等。部分感音神經(jīng)性耳聾患者可以通過(guò)藥物治療，但絕大部分患者只能依靠配戴助聽(tīng)器和/或人工聽(tīng)覺(jué)植入提高聽(tīng)力[4]。然而，無(wú)論是助聽(tīng)器，還是人工聽(tīng)覺(jué)植入，都僅僅是一種替代治療，其治療效果仍不盡如人意，功能上無(wú)法與正常聽(tīng)力相比。

基因治療是指通過(guò)操作遺傳物質(zhì)來(lái)干預(yù)疾病的發(fā)生、發(fā)展，通過(guò)替代和糾正異常的致病基因來(lái)達(dá)到治療疾病的目的[5]。近年來(lái)，隨著遺傳基因與耳聾發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，各種耳聾動(dòng)物模型的建立，越來(lái)越多的學(xué)者試圖通過(guò)基因治療的方式來(lái)預(yù)防和治療感音神經(jīng)性耳聾。內(nèi)耳膜迷路相對(duì)封閉、處于骨性迷路的包繞之中，與周圍組織相對(duì)隔離；注入耳蝸內(nèi)的載體可以通過(guò)流動(dòng)的外淋巴液或內(nèi)淋巴液在耳蝸內(nèi)擴(kuò)散[6]。由于這些特殊的解剖和生理特點(diǎn)，使耳蝸在基因治療方面擁有其它器官無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，為內(nèi)耳基因治療提供了理想的環(huán)境。本文將結(jié)合最新的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展，對(duì)感音神經(jīng)性耳聾的基因治療進(jìn)展做一綜述。

1 感音神經(jīng)性耳聾基因治療的主要策略

1.1 聽(tīng)神經(jīng)的保護(hù)與再生

對(duì)于重度感音神經(jīng)性耳聾患者，目前主要的治療方法是人工耳蝸植入。然而人工耳蝸植入要求有一定數(shù)量的螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。術(shù)后效果取決于殘存螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子如腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3（neurotrophin-3,NT-3）有助于耳聾后螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活[7～8]。有學(xué)者使用新霉素致豚鼠耳聾后1周，通過(guò)腺病毒和腺相關(guān)病毒向豚鼠耳蝸內(nèi)導(dǎo)入BDNF，結(jié)果表明可有效保護(hù)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并且能夠促進(jìn)其神經(jīng)纖維向基底膜方向生長(zhǎng)[9]。因此，基因治療和人工耳蝸植入聯(lián)合應(yīng)用有望提高人工耳蝸植入的遠(yuǎn)期療效。

1.2 毛細(xì)胞保護(hù)與再生

毛細(xì)胞是產(chǎn)生聽(tīng)覺(jué)沖動(dòng)的感受器，人類的毛細(xì)胞一旦缺失，不可再生[10]。毛細(xì)胞的保護(hù)對(duì)于防止耳聾具有重要意義。現(xiàn)實(shí)生活中，大的環(huán)境噪聲、耳毒性藥物（如氨基糖苷類抗生素和順鉑）的使用均可導(dǎo)致毛細(xì)胞損傷?；蛑委熆梢酝ㄟ^(guò)表達(dá)某些具有保護(hù)作用的基因或沉默耳毒性發(fā)生過(guò)程中的某些關(guān)鍵基因起到保護(hù)毛細(xì)胞和聽(tīng)力的作用。Kawamoto以腺病毒為載體，通過(guò)在豚鼠耳蝸內(nèi)過(guò)表達(dá)銅/鋅超氧化物歧化酶（superoxide dismutase 1,SOD1），錳超氧化物歧化酶（SOD2），過(guò)氧化氫酶（catolase,CAT）成功地預(yù)防了卡那霉素導(dǎo)致的耳聾[11]。Cooper以腺相關(guān)病毒為載體通過(guò)表達(dá)X連鎖凋亡抑制蛋白（x-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）來(lái)預(yù)防順鉑耳毒性[12]。Mukherjea通過(guò)鼓室內(nèi)注射小干擾RNA來(lái)拮抗NADPH氧化酶3（NADPH oxidase 3,NOX3）來(lái)阻止注射順鉑后氧自由基的產(chǎn)生，從而預(yù)防毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷[13]。

一旦毛細(xì)胞發(fā)生死亡，治療的重點(diǎn)就從毛細(xì)胞的保護(hù)轉(zhuǎn)移到再生。隨著毛細(xì)胞再生研究的深入，已發(fā)現(xiàn)了多個(gè)潛在的基因治療靶點(diǎn)，其中最有代表性的是Atoh1基因[14]。Atoh1基因是毛細(xì)胞分化所必需的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，已經(jīng)有多項(xiàng)動(dòng)物研究證明在內(nèi)耳進(jìn)行Atoh1基因的過(guò)表達(dá)，通過(guò)Corti器支持細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化實(shí)現(xiàn)了耳蝸和前庭毛細(xì)胞再生[15～17]。

1.3 遺傳性耳聾的基因治療

與其他致病因素導(dǎo)致的耳聾不同，遺傳性耳聾的基因治療不能通過(guò)毛細(xì)胞的再生來(lái)實(shí)現(xiàn)，而需要通過(guò)導(dǎo)入野生型的基因取代或補(bǔ)充致病基因的功能。近幾年來(lái)遺傳性耳聾的基因治療研究取得了很大的突破，已經(jīng)有多項(xiàng)研究通過(guò)基因治療的方式逆轉(zhuǎn)了遺傳性耳聾小鼠動(dòng)物模型的聽(tīng)力表型。包括GJB6、VGLUT3、TMC、KCNQ1在內(nèi)的基因敲除小鼠，都通過(guò)向耳蝸內(nèi)導(dǎo)入相應(yīng)的野生型基因，成功地保留了部分聽(tīng)力[18～21]。這一系列研究成果預(yù)示基因治療有望成為治療遺傳性耳聾的有效方法。

2 感音神經(jīng)性耳聾基因治療載體

基因治療的開(kāi)展首先需要有理想的基因治療載體，目前常見(jiàn)的基因載體有病毒載體和非病毒載體兩大類。由于轉(zhuǎn)染效率較高，病毒載體是應(yīng)用最為廣泛的載體。用作耳聾基因治療載體的病毒主要有腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒、單純皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。其中最為常用的是腺病毒和腺相關(guān)病毒。

2.1 腺病毒（adenovirus,AV）

腺病毒具備①感染非分裂和分裂細(xì)胞；②可高效、迅速地傳遞和表達(dá)基因；③易于制備；④基因組不整和進(jìn)入宿主染色體而相對(duì)安全等優(yōu)點(diǎn)。被廣泛應(yīng)用于內(nèi)耳基因治療的研究中[22]。Raphael通過(guò)圓窗膜注射的方法，將載有大腸桿菌β-半乳糖（LacZ）的腺病毒導(dǎo)入鼓階內(nèi)，結(jié)果顯示耳蝸毛細(xì)胞、支持細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、血管紋、前庭膜、螺旋韌帶均被轉(zhuǎn)染，其中以螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高[23]。其他研究也證實(shí)了腺病毒經(jīng)鼓階鉆孔途徑可以成功轉(zhuǎn)染包括毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及支持細(xì)胞在內(nèi)的多種內(nèi)耳細(xì)胞[24，25]。但是腺病毒有一定的毒性，免疫源性較強(qiáng)，并且只能實(shí)現(xiàn)目的基因的短暫表達(dá)（1個(gè)月），因此應(yīng)用受到了很大限制[23，26]。

2.2 腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus,AAV）

AAV無(wú)致病性和毒性，因被轉(zhuǎn)染的基因整合入宿主的基因組內(nèi)，所以能夠長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)[27]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，AAV既能夠感染毛細(xì)胞，又能夠感染支持細(xì)胞[19～21]。不同血清型的AAV對(duì)耳蝸內(nèi)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率也不相同，Askew通過(guò)小鼠耳蝸組織體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明，在AAV1、2、6、8、9血清型中，AAV1/2對(duì)毛細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率最高，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)[20]。但是，腺相關(guān)病毒DNA裝載量有限，制備比較困難，并且會(huì)引起宿主的免疫反應(yīng)，限制了其應(yīng)用[28]。

2.3 非病毒載體

與病毒載體相比較，非病毒載體具有諸多的優(yōu)勢(shì)，例如制備簡(jiǎn)單，毒性低，不會(huì)誘發(fā)宿主的免疫反應(yīng)，對(duì)攜帶基因容量沒(méi)有限制，可以通過(guò)生物學(xué)改造來(lái)獲得多種生物學(xué)特性等。非病毒基因載體主要有陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陽(yáng)離子聚合物、納米材料。近年來(lái)用于內(nèi)耳基因治療的非病毒載體主要有聚乙烯亞胺（polyethylene imine,PEI）[29]、聚酰胺-胺型樹(shù)狀物（PAMAM-D）[30]、羥基磷灰石納米顆粒[31]、四氧化三鐵納米顆粒等[32]，但這些非病毒載體的轉(zhuǎn)染效率相對(duì)較低。

理想的基因治療載體應(yīng)該具備以下條件：①在體內(nèi)能夠?qū)NA準(zhǔn)確送入靶細(xì)胞和靶組織；②能夠?qū)NA轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞核并高效表達(dá)；③轉(zhuǎn)染效率較高，強(qiáng)度和時(shí)間可控；④安全性高；⑤易于大規(guī)模制備。現(xiàn)階段，無(wú)論是病毒載體還是非病毒載體都還無(wú)法滿足上述條件，感音神經(jīng)耳聾基因治療的開(kāi)展，仍需要探索新型的基因載體。

3 感音神經(jīng)性耳聾基因治療載體導(dǎo)入途徑

內(nèi)耳血迷路屏障的存在、骨性結(jié)構(gòu)包裹以及淋巴液流動(dòng)的特點(diǎn)使得內(nèi)耳適合于基因治療。同時(shí),也使得如何安全、高效地將目的基因轉(zhuǎn)入至耳蝸內(nèi)成為一個(gè)難題。因此，探索一條安全有效的內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)移方法是開(kāi)展內(nèi)耳基因治療的重要前提之一。目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中常用的基因?qū)胪緩接幸韵聨追N：①經(jīng)耳蝸開(kāi)窗；②經(jīng)半規(guī)管開(kāi)窗；③經(jīng)圓窗膜注射；④經(jīng)完整圓窗膜滲透。

3.1 耳蝸開(kāi)窗

經(jīng)耳蝸開(kāi)窗后，可以行鼓階或中階注射，相對(duì)于鼓階注射，中階注射能更加直接地將目的基因?qū)雰?nèi)淋巴，轉(zhuǎn)染效率也更高，文獻(xiàn)報(bào)道經(jīng)中階注射AAV后幾乎可以轉(zhuǎn)染耳蝸內(nèi)所有類型的細(xì)胞。然而，無(wú)論是鼓階注射，還是中階注射均會(huì)造成一定程度的聽(tīng)力損失[33]。

3.2 半規(guī)管開(kāi)窗

半規(guī)管開(kāi)窗路徑主要是在后半規(guī)管開(kāi)窗，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明此種路徑對(duì)聽(tīng)力的影響較小，但是，經(jīng)此路徑主要轉(zhuǎn)染前庭細(xì)胞，較少轉(zhuǎn)染耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞和支持細(xì)胞[24，34]。

3.3 經(jīng)圓窗膜注射

將AAV經(jīng)圓窗膜注射途徑導(dǎo)入鼓階后，目的基因可以表達(dá)于外淋巴間隙的間皮細(xì)胞，內(nèi)、外毛細(xì)胞，支持細(xì)胞，螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞[35]。但是經(jīng)圓窗膜注射容易造成圓窗膜的破裂，形成外淋巴瘺，也會(huì)對(duì)聽(tīng)力造成輕微的影響[19]。

3.4 經(jīng)圓窗膜滲透

經(jīng)完整圓窗膜滲透可以通過(guò)鼓室內(nèi)注射或者耳后切開(kāi)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，操作簡(jiǎn)單，對(duì)聽(tīng)力影響小，是向內(nèi)耳導(dǎo)入基因最為理想的一條途徑。圓窗膜是位于中耳與內(nèi)耳之間的唯一膜性結(jié)構(gòu)，在正常情況下是一半透膜，通透性大小主要與滲透分子的大小、構(gòu)型、濃度、脂溶性、所帶電荷有關(guān)。許多種物質(zhì)包括水、離子、大分子（如毒素）、抗生素、直徑小于1μm的微球都能透過(guò)圓窗膜進(jìn)入內(nèi)耳[36]。然而，作為耳聾基因治療常用載體，病毒卻不易透過(guò)圓窗膜。因此，許多學(xué)者嘗試采用易化劑（透明質(zhì)酸、膠原酶等）來(lái)增加圓窗膜的通透性。Shibata等發(fā)現(xiàn)使用透明質(zhì)酸預(yù)先處理圓窗膜可以明顯增加圓窗膜對(duì)腺病毒的通透性，從而提高腺病毒在耳蝸內(nèi)的轉(zhuǎn)染效率[37]。國(guó)內(nèi)王慧和夏力使用膠原酶處理圓窗膜后，通過(guò)圓窗膜滲透途徑向豚鼠和小鼠耳蝸內(nèi)導(dǎo)入AAV，取得了和經(jīng)圓窗膜注射途徑類似的轉(zhuǎn)染效率[35，38]。

4 展望

感音神經(jīng)性耳聾基因治療的基礎(chǔ)研究雖然已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，但是要實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化還有很長(zhǎng)的一段路要走。目前限制基因治療向臨床轉(zhuǎn)化的主要障礙是缺乏理想的基因載體和基因?qū)胪緩健＂倩蛑委熭d體；鑒于非病毒載體的安全性較高，相對(duì)于病毒載體而言，非病毒載體更有希望成為耳聾基因治療的理想載體。非病毒載體的主要缺點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率較低和缺乏靶向性，如何提高非病毒載體的轉(zhuǎn)染效率和靶向性是今后研究的熱點(diǎn)。通過(guò)對(duì)納米粒子表面進(jìn)行多種修飾（如穿膜肽[39]和靶向配體[40]）的多功能復(fù)合基因載體也許是人類基因治療載體發(fā)展的方向。②基因?qū)胪緩剑荒壳白钣邢ＭM(jìn)行臨床轉(zhuǎn)化的基因?qū)胪緩绞墙?jīng)完整圓窗膜滲透。病毒載體通過(guò)新型易化劑對(duì)圓窗膜進(jìn)行預(yù)處理；非病毒載體通過(guò)改變粒徑，表面電荷，連接穿膜肽等方法有望進(jìn)一步提高圓窗膜滲透途徑的轉(zhuǎn)染效率。如果上述問(wèn)題能夠得到解決，我們有理由相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)基因治療將成為治療感音神經(jīng)耳聾的有效方法。

[1]Richardson RT,Atkinson PJ.Atoh1 gene therapy in the cochlea for hair cell regeneration[J].Expert Opin Biol Ther,2015,15:417-430.

[2]Dawson PW,Blamey PJ,Rowland LC,et al.Cochlear implants in children,adolescents,and prelinguistically deafened adults:speech perception[J].J Speech Hear Res,1992,35:401-417.

[3]Petersen MB,Willems PJ.Non-syndromic,autosomal-recessive deafness[J].Clin Genet,2006,69:371-392.

[4]Wilson BS,Dorman MF.Cochlear implants:current designs and future possibilities[J].J Rehabil Res Dev,2008,45:695-730.

[5]Friedmann T.The evolving concept of gene therapy[J].Hum Gene Ther,1990,1:175-181.

[6]Agrup C,Gleeson M,Rudge P.The inner ear and the neurologist[J].Journal of neurology,neurosurgery,and psychiatry, 2007,78:114-122.

[7]Wise AK,Tu T,Atkinson PJ，et al.The effect of deafness duration on neurotrophin gene therapy for spiral ganglion neuron protection[J].Hearing research,2011,278:69-76.

[8]Bowers WJ,Chen X,Guo H，et al.Neurotrophin-3 transduction attenuates cisplatin spiral ganglion neuron ototoxicity in the cochlea[J].Mol Ther,2002,6:12-18.

[9]Shibata SB,Cortez SR,Beyer LA，et al.Transgenic BDNF induces nerve fiber regrowth into the auditory epithelium in deaf cochleae[J].Exp Neurol, 2010, 223:464-472.

[10]Brignull HR,Raible DW,Stone JS.Feathers and fins: nonmammalian models for hair cell regeneration[J].Brain research,2009,1277:12-23.

[11]Kawamoto K,Sha SH,Minoda R,et al.Antioxidant gene therapy can protect hearing and hair cells from ototoxicity[J].Mol Ther,2004,9:173-181.

[12]Cooper LB,Chan DK,Roediger FC，et al.AAV-mediated delivery of the caspase inhibitor XIAP protects against cisplatin ototoxicity[J].Otology &neurotology:official publication of the American Otological Society,American Neurotology Society[and] European Academy of Otology and Neurotology, 2006,27:484-490.

[13]Mukherjea D,Jajoo S,Kaur T，et al.Transtympanic administration of short interfering (si)RNA for the NOX3 isoform of NADPH oxidase protects against cisplatininduced hearing loss in the rat[J].Antioxid Redox Signal,2010,13:589-598.

[14]Bermingham NA,Hassan BA,Price SD，et al.Math1:an essential gene for the generation of inner ear hair cells[J].Science,1999, 284:1837-1841.

[15]Izumikawa M,Minoda R,Kawamoto K，et al.Auditory hair cell replacement and hearing improvement by Atoh1 gene therapy in deaf mammals[J].Nat Med, 2005,11:271-276.

[16]Schlecker C,Praetorius M,Brough DE，et al.Selective atonal gene delivery improves balance function in a mouse model of vestibular disease[J].Gene Ther,2011,18:884-890.

[17]Staecker H,Praetorius M,Brough DE.Development of gene therapy for inner ear disease:Using bilateral vestibular hypofunction as a vehicle for translational research[J].Hearing research,2011,276:44-51.

[18]Ahmad S,Tang W,Chang Q，et al.Restoration of connexin26 protein level in the cochlea completely rescues hearing in a mouse model of human connexin30-linked deafness[J].Proc Natl Acad Sci USA,2007,104:1337-1341.

[19]Akil O,Seal RP,Burke K，et al.Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy[J]. Neuron,2012,75:283-293.

[20]Askew C,Rochat C,Pan B，et al.Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice[J].Sci Transl Med,2015,7:295ra108.

[21]Chang Q,Wang J,Li Q，et al.Virally mediated Kcnq1 gene replacement therapy in the immature scala media restores hearing in a mouse model of human Jervell and Lange-Nielsen deafness syndrome[J]. EMBO Mol Med, 2015,7:1077-1086.

[22]Husseman J,Raphael Y.Gene therapy in the inner ear using adenovirus vectors[J].Adv Otorhinolaryngol,2009,66:37-51.

[23]Raphael Y,Frisancho JC,Roessler BJ.Adenoviral-mediated gene transfer into guinea pig cochlear cells in vivo[J].Neurosci Lett,1996, 207:137-141.

[24]Kawamoto K,Oh SH,Kanzaki S，et al.The functional and structural outcome of inner ear gene transfer via the vestibular and cochlear fluids in mice[J].Mol Ther,2001,4:575-585.

[25]Luebke AE,Steiger JD,Hodges BL,et al.A modified adenovirus can transfect cochlear hair cells in vivo without compromising cochlear function[J].Gene Ther,2001,8:789-794.

[26]Thaci B,Ulasov IV,Wainwright DA,et al.The challenge for gene therapy:innate immune response to adenoviruses[J].Oncotarget,2011,2:113-121.

[27]Mingozzi F,High KA.Therapeutic in vivo gene transfer for genetic disease using AAV:progress and challenges[J].Nat Rev Genet, 2011,12:341-355.

[28]Jiang H,Couto LB,Patarroyo-White S，et al.Effects of transient immunosuppression on adenoassociated,virusmediated, liver-directed gene transfer in rhesus macaques and implications for human gene therapy[J].Blood,2006,108:3321-3328.

[29]Tan BT,Foong KH,Lee MM,Ruan R.Polyethyleniminemediated cochlear gene transfer in guinea pigs[J].Archives of otolaryngology--head &neck surgery,2008,134:884-891.

[30]Wu N,Li M,Chen ZT，et al.In vivo delivery of Atoh1 gene to rat cochlea using a dendrimer-based nanocarrier[J].J Biomed Nanotechnol,2013,9:1736-1745.

[31]Sun H,Jiang M,Zhu SH.In vitro and in vivo studies on hydroxyapatite nanoparticles as a novel vector for inner ear gene therapy[J].Chinese journal of otorhinolaryngology head and neck surgery, 2008,43:51-57.

[32]Kopke RD,Wassel RA,Mondalek F，et al.Magnetic nanoparticles:inner ear targeted molecule delivery and middle ear implant[J].Audiology &neuro-otology,2006,11:123-133.

[33]Praetorius M,Baker K,Weich CM，et al.Hearing preservation after inner ear gene therapy:the effect of vector and surgical approach[J].journal for oto-rhino-laryngology and its related specialties,2003,65:211-214.

[34]Okada H,Iizuka T,Mochizuki H，et al.Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adenoassociated virus vectors[J].Otology &neurotology:official publication of the American Otological Society,American Neurotology Society[and] European Academy of Otology and Neurotology,2012,33:655-659.

[35]Xia L,Yin S,Wang J.Inner ear gene transfection in neonatal mice using adeno-associated viral vector:a comparison of two approaches[J].PloS one,2012,7:e43218.

[36]Goycoolea MV.Clinical aspects of round window membrane permeability under normal and pathological conditions[J].Acta oto-laryngologica,2001,121:437-447.

[37]Shibata SB,Cortez SR,Wiler JA，et al.Hyaluronic acid enhances gene delivery into the cochlea[J].Hum Gene Ther,2012,23:302-310.

[38]Wang H,Murphy R,Taaffe D，et al.Efficient cochlear gene transfection in guinea-pigs with adeno-associated viral vectors by partial digestion of round window membrane[J].Gene Ther,2012,19: 255-263.

[39]Yoon JY,Yang KJ,Kim da E，et al.Intratympanic delivery of oligoarginine-conjugated nanoparticles as a gene (or drug)carrier to the inner ear[J].Biomaterials, 2015,73:243-253.

[40]Zhang Y,Zhang W,Johnston AH，et al.Targeted delivery of Tet1 peptide functionalized polymersomes to the rat cochlear nerve[J].International journal of nanomedicine,2012,7:1015-1022.