鄧瑞強

（山西農(nóng)業(yè)大學信息學院遠景學院，山西 太谷 030800）

肉雞大腸桿菌病的診斷與治療研究

鄧瑞強

（山西農(nóng)業(yè)大學信息學院遠景學院，山西 太谷 030800）

采取疑似患大腸桿菌病的病死肉雞為病料，患病的雞群為治療對象，利用臨床癥狀、病理剖解變化，結(jié)合細菌分離培養(yǎng)以及生化試驗技術(shù)進行確診，對分離細菌進行藥敏試驗，結(jié)合敏感藥物對大腸桿菌病進行治療研究。分離菌株的藥敏試驗結(jié)果表明該病原菌對新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮、恩諾沙星、氯霉素、阿米卡星高敏；對卡那霉素、慶大霉素中敏；對青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏。采用高敏藥物對該大腸桿菌病治療效果顯著。

肉雞；大腸桿菌；診斷；細菌分離；藥敏試驗

1 肉雞大腸桿菌病的臨床診斷

1.1 雞大腸桿菌病的總體流行特點

各種品種以及不同日齡的雞都可感染發(fā)病，該病給養(yǎng)雞業(yè)造成的損失通常與致病菌的血清型及菌株的致病力、并發(fā)或繼發(fā)感染、發(fā)病后采取的措施等因素有關(guān)，本病的發(fā)病率和死亡率有較大差異。大腸桿菌在自然環(huán)境中，飼料、飲水、雞的體表、孵化場、孵化器等各處普遍存在，該菌在種蛋表面、雞蛋內(nèi)、孵化過程中的死胚及毛液中分離率較高。

本病在雛雞階段、育成期和成年產(chǎn)蛋雞均可發(fā)生，雛雞呈急性敗血癥，多數(shù)情況下因受各種應激因素和其他疾病的影響，本病感染更為嚴重。成年產(chǎn)蛋雞往往在開產(chǎn)階段發(fā)生，死淘率增多，影響產(chǎn)蛋，生產(chǎn)性能不能充分發(fā)揮。種雞場發(fā)生，直接影響到種蛋孵化率、出雛率，造成孵化過程中死胚和毛蛋增多，健雛率低。

1.2 肉雞大腸桿菌病的臨床觀察

整體觀察病雞的外觀、精神狀況。羽毛是否整齊，精神是否正常，沉郁還是興奮，是否離群呆立，進食是否正常。再觀察雞的皮膚是否發(fā)紅、水腫，糞便情況等?？紤]是否伴發(fā)其他疾病。

1.3 肉雞大腸桿菌病的病理變化

打開腹腔聞其是否有特異性氣味，是否有積液。心包膜及氣囊是否增厚變渾濁、肝臟是否覆蓋滲出物、腎臟是否正常，腺胃、肌胃、腸道、盲腸扁桃體及腸黏膜是否出血、壞死。

2 肉雞大腸桿菌病的實驗室診斷

2.1 材料準備

2.1.1 病料來源 小京莊養(yǎng)殖場雞群收集的患典型大腸桿菌病的病死肉雞病料。死亡時間不超過12 h。

2.1.2 儀器 光學顯微鏡、解剖剪、解剖盤、鑷子、載玻片、蓋玻片、染液、一次性手套、消毒液。

2.1.3 培養(yǎng)基及試劑 麥康凱培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、腸桿菌科細菌微量生化鑒定管。

2.1.4 藥敏紙片 先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮、氨芐青霉素、氯霉素、阿米卡星、卡那霉素、慶大霉素、新霉素、恩諾沙星、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素14種抗生素圓形藥敏紙片。

2.2 診斷方法

2.2.1 顯微鏡檢查 將病死雞肝臟做觸片，革蘭氏染色，鏡檢?？词欠駷楦锾m氏陰性，兩端鈍圓并散在的中等大小的桿菌。

2.2.2 分離培養(yǎng) 無菌取典型病雞、死雞的心血、肝、氣囊等病料，劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，再挑取典型菌落劃線接種于普通培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基進行純培養(yǎng)；取純培養(yǎng)菌接種于普通瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)20 h，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3 生化試驗 將分離的單個典型菌落分別接種于乳糖、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、枸櫞酸鹽、吲哚、MR、H2S的生化鑒定管中，置于37℃的環(huán)境條件下培養(yǎng)2～3 d，嚴格遵守試驗要求，按照試驗的章程操作，判定結(jié)果按照生化試驗的方法對所分離的株進行常規(guī)生化指標的測定。

2.2.4 藥敏試驗 將保存的菌株按紙片法用接種棒挑取單個菌落均勻涂布于營養(yǎng)培養(yǎng)基上，間隔一定距離貼上各種抗生素藥敏試紙，于37℃溫度條件培養(yǎng)24 h，觀察各種抗生素抑菌情況。判斷標準為抑菌圈直徑大于15 mm的為高敏；直徑在10～14 mm的為中敏；直徑小于10 mm的為低敏。

2.2.5 藥物治療 根據(jù)藥敏結(jié)果再結(jié)合雞場歷來用藥情況，采用合適的藥物，嚴格按照用藥規(guī)定進行治療。

3 結(jié)果與分析

3.1 臨床診斷結(jié)果

3.1.1 臨床觀察結(jié)果 臨床表現(xiàn)為精神沉郁，離群呆立，羽毛松亂，少吃或不吃，腹部大，嗦囊內(nèi)充滿食物，臍孔及其周圍皮膚發(fā)紅、呼吸困難等。雛雞精神不振，閉眼嗜睡，個別雞扇動翅膀，尖叫不安，有的雞張口呼吸，排稀便或水樣便，呈灰白色、黃色，多數(shù)腿干燥、脫水。若肉仔雞繼發(fā)感染傳染性支氣管炎、霉形體病時，死亡率更高。

圖1 肉雞大腸桿菌病的解剖特征(附肝臟)

3.1.2 病理剖檢結(jié)果 多數(shù)病例其胸肌和腿肌無變化。打開腹腔有一種特異性惡臭味，腹腔有淺黃色積液，肝臟覆蓋一層黃白色的滲出物(見圖1)，腎臟腫大，法氏囊充滿黏液，腸道出血，盲腸扁桃體出血、壞死，氣管環(huán)狀出血，腺胃、肌胃無明顯變化。少數(shù)病例還可見氣囊和心包膜嚴重渾濁，且心包膜上披覆黃白色滲出物，心冠脂肪有針尖大的出血點，腸黏膜出血。根據(jù)大腸桿菌病的臨床病理變化特征，結(jié)合發(fā)病特點初診該病為雞大腸桿菌病。

3.2 實驗室診斷結(jié)果

3.2.1 病原體的形態(tài) 對所采集的病料肝臟組織涂片進行革蘭氏染色，鏡檢可以看到紅色、短小、兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌，多數(shù)為單個散在，有的成對出現(xiàn)，且無芽胞，符合大腸桿菌的典型形態(tài)特征。

圖2 大腸桿菌分離培養(yǎng)結(jié)果

3.2.2 分離菌培養(yǎng)結(jié)果 在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成中等大小、圓形、稍隆起表面光滑、濕潤、邊緣整齊、紅色小菌落（見圖2）。伊紅美藍培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色帶金屬光澤的菌落。將分離菌在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長24 h后，形成圓形凸起、光滑、濕潤、邊緣整齊、半透明、灰白色菌落，直徑約2～3 mm；分離菌的培養(yǎng)結(jié)果符合典型大腸桿菌的培養(yǎng)特性。

3.2.3 生化試驗結(jié)果 將典型菌落分別接種不同的生化鑒定管進行生化試驗，經(jīng)過培養(yǎng)后反應情況如表1。試驗結(jié)果與大腸桿菌相應的生化特性一致，因此將分離的菌判定為大腸桿菌。

表1 生化鑒定結(jié)果

3.2.4 藥敏試驗結(jié)果 將分離的菌株劃線接種于營養(yǎng)培養(yǎng)基，并使藥敏試紙均勻分布于培養(yǎng)基表面。結(jié)果發(fā)現(xiàn)本菌對新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢哌酮、氯霉素、阿米卡星高敏；對卡那霉素、慶大霉素中敏；對青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏（見表2)。

表2 大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果

3.3 藥物治療結(jié)果

雛雞藥物預防，一般可在雛雞出殼后開食時，在飲水中投0.02%～0.03%氯霉素或0.03%～0.04%慶大霉素。早期投藥可控制早期感染的病雞，促使痊愈，同時可防止新發(fā)病例的出現(xiàn)；在大腸桿菌病發(fā)病后期，若出現(xiàn)了氣囊炎、肝周炎、卵黃性腹膜炎等較為嚴重的病理變化時，使用抗生素療效往往不顯著甚至沒有效果。

根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選擇敏感的藥物，并結(jié)合該雞場以前曾經(jīng)長期應用過氨芐青霉素的用藥史，采用了氟苯尼考和黃芪多糖聯(lián)合用藥。氟苯尼考是針對大腸桿菌，而黃芪多糖能提高機體的免疫力。用藥1 d后雞群死亡率下降，采食量逐漸增加，腹瀉逐漸減輕，羽毛恢復光澤，3 d后基本恢復正常。

3.4 分析

臨床診斷方法對于病情嚴重的雞能快速確診，但是對于發(fā)病初期臨床癥狀還不明顯的雞來確診就存在一定困難性，因此只依靠臨床方法是不利于早期的預防和治療。而利用實驗室方法則能準確確診，對治療方案能給予正確指導，但實驗室方法也有其弊端就是診斷所需時間長且費用高。

4 討論

4.1 導致大腸桿菌病發(fā)生的原因

不能全進全出：養(yǎng)雞場剛剛新建，一次可接雛20 000～50 000羽，但孵化場沒有能力一次供足如此大量的雛雞，使綜合防制措施中的全進全出的措施得不到落實，影響了免疫程序的實施，同時不同日齡的雞成了雞病傳播的易感動物，構(gòu)成了多重性的傳播。

種雞質(zhì)量不保證：在防病滅病中，對種雞場的控制是關(guān)鍵，但現(xiàn)在種雞場和孵化場沒有采取嚴格的綜合管理，種雞場一般管理較差，通過種蛋污染大腸桿菌，加上有些孵化場消毒不嚴，使出殼雛雞感染，導致雛雞大量死亡，生長緩慢。

病死雞的環(huán)境污染：部分病死雞由走村串戶的小販來收購，這種形式也是導致細菌性疾病四處傳播的重要途徑。

飼料：飼料原料和成品都不能進行嚴格的消毒處理，動物性飼料成為雞感染大腸桿菌病的重要途徑。

投藥方式：每當雞群發(fā)病后，經(jīng)常習慣使用大量抗生素，并且連續(xù)投服幾個療程。大量投藥易造成雞體內(nèi)正常菌群失調(diào)、免疫機能下降，易導致條件性致病菌如大腸桿菌的感染發(fā)病[1]。另外，長時間使用抗生素，細菌產(chǎn)生耐藥性，使投藥效果不佳。

飼養(yǎng)管理不善:在養(yǎng)雞業(yè)的飼養(yǎng)管理中，由于忽視轉(zhuǎn)舍、擴欄、飼料改變、溫度變化等多種應激后，使雞的機體抵抗力降低，使之成為多種疾病的易感雞。

其他病的影響：由于新城疫、傳支等病毒病的發(fā)生，使雞群的抗病能力減弱，對細菌特別是大腸桿菌的易感性提高。

4.2 對大腸桿菌病的防治

4.2.1 提高雞體免疫力和抗病力 疫苗免疫：由于本病發(fā)生普遍，各種年齡的雞均可發(fā)病，藥物預防和治療效果逐漸降低而且又增加了養(yǎng)雞的成本。近年來已試制成功了大腸桿菌死疫苗（大腸桿菌多價氫氧化鋁苗和多價油佐劑苗），但由于大腸桿菌血清型較多，制苗菌株應該采自本地區(qū)發(fā)病雞群的多個毒株或本場分離菌株聯(lián)合制苗，效果最好。

4.2.2 微生態(tài)學防制 和其他動物一樣，雞腸道中大腸桿菌的數(shù)量是相對穩(wěn)定，與其他需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌處于微生物平衡狀態(tài)。若機體受到外界刺激或濫用抗生素，則這種平衡狀態(tài)被破壞，并有利于致病菌入侵而引起疾病。因此，保護雞腸道的微生態(tài)平衡，對預防大腸桿菌病至關(guān)重要，為了控制大腸桿菌的過度生長，可用促酶生、調(diào)痢生等微生態(tài)制劑以促進擬桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等厭氧菌的生長，間接抑制大腸桿菌的生長。同時可采用在飼料中加入乳糖和有機酸的辦法，抑制致病菌或其他優(yōu)勢菌。

4.2.3 藥物預防 同時期分離到的大腸桿菌菌株，對同一種藥物的耐藥性差異很大。診斷出雞群發(fā)生大腸桿菌弊病后，最好先做藥敏試驗，選出最經(jīng)濟有效的藥物治療預防，憑經(jīng)驗用藥效果是不會理想的。由于大腸桿菌易對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，這給臨床治療帶來了很大的困難，因此必須通過藥敏試驗，篩選敏感藥物進行治療，才能達到較好效果。如果養(yǎng)殖場或養(yǎng)殖專業(yè)戶有時不具備做藥敏試驗的條件，當通過臨床癥狀和剖檢變化懷疑是大腸桿菌病時，可選用過去很少用過的高敏感藥物進行全群治療，并交替用藥，防止產(chǎn)生耐藥性，一般也可有效控制疫情，使雞痊愈。

大腸桿菌對藥物敏感性不盡相同，以致同一藥物同一方法而在不同場合不同時間的使用效果不一樣。不同肉雞場分離的菌株對同一種抗生素的敏感性有較大的差異，甚至在同一肉雞場的分離株對藥物的敏感性也參差不一，因此，在實際應用中，必須經(jīng)常進行細菌分離和藥敏試驗，篩選有效藥物進行防治，方能做到“藥到病除”，以免藥物浪費，造成不必要的損失。藥敏試驗方法簡單易行，特別適宜于大中型集約化雞場應推廣應用。

5 結(jié)論

根據(jù)臨診癥狀和剖檢變化以及生化試驗可以確診該病為大腸桿菌病，藥敏試驗結(jié)果可以看出，肉雞大腸桿菌病對新霉素、先鋒必、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢哌酮、氯霉素、阿米卡星高敏；對卡那霉素、慶大霉素中敏；對青霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素低敏。

肉雞大腸桿菌病的臨床癥狀明顯，利用臨診癥狀和剖檢變化基本可以確診。由于藥物的長期使用，產(chǎn)生嚴重的耐藥性，再加上大腸桿菌的血清型眾多，增加了治療的難度。因此在應用藥物治療時結(jié)合藥敏試驗，并根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選擇敏感性高的藥物進行治療。

[1]孫艷明,趙德明.雞大腸桿菌病的診斷與防治[J].中國畜牧獸醫(yī),2006,(33).

（編輯：晏兵兵）

S858.31

B

1006-799X(2016)21-0096-04

鄧瑞強(1983-)，男，山西榆次人，主要從事獸醫(yī)流行病學相關(guān)研究工作。