楊鵬,向鋒,卿志星,曹華亮,曾建國(guó),*
[1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410208;2.國(guó)家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心,湖南 長(zhǎng)沙 410128;3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸用中藥資源與中獸藥創(chuàng)制國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,湖南 長(zhǎng)沙 410128]
·基礎(chǔ)研究·
博落回鮮葉中生物堿類化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定△
楊鵬1,2,向鋒1,2,卿志星1,2,曹華亮3,曾建國(guó)1,2,3*
[1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410208;2.國(guó)家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心,湖南 長(zhǎng)沙 410128;3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸用中藥資源與中獸藥創(chuàng)制國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,湖南 長(zhǎng)沙 410128]
目的研究博落回葉的化學(xué)成分。方法采用硅膠柱色譜以及制備液相色譜法進(jìn)行分離純化,并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果從博落回新鮮葉的乙醇提取物中分離純化得到14個(gè)生物堿,分別鑒定為:原阿片堿(1)、別隱品堿(2)、血根堿(3)、白屈菜紅堿(4)、去甲基白屈菜紅堿(5)、去氫紫堇堿(6)、N-甲基四氫黃連堿(7)、黃柏堿(8)、6-甲氧基去甲基血根堿(9)、6-氰基二氫血根堿(10)、6-氰基二氫白屈菜紅堿(11)、6-丙酮基二氫血根堿(12)、二氫血根堿(13)、二氫白屈菜紅堿(14)。結(jié)論其中化合物5~9為首次在博落回屬植物中分離得到。
博落回;葉;生物堿
博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.系罌粟科博落回屬植物,是多年生草本植物,多以全草入藥。具有殺蟲、解毒、消腫等功效,主要分布在中國(guó)以及東南亞,在我國(guó)主要分布在湖南、安徽、江蘇等省[1]。現(xiàn)代研究表明博落回中主要活性成分是生物堿,具有抗炎、抗菌、抗腫瘤[2]、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)[3]等作用。在本研究團(tuán)隊(duì)對(duì)博落回化學(xué)成分已有的研究基礎(chǔ)上[4-8],選擇博落回不同部位進(jìn)行更全面的化學(xué)成分研究,本實(shí)驗(yàn)利用硅膠柱色譜和制備高效液相色譜法對(duì)博落回葉化學(xué)成分進(jìn)行研究。分離得到14個(gè)化合物,通過(guò)1H-NMR、13C-NMR等波譜技術(shù)確定化合物的結(jié)構(gòu),分別鑒定為:原阿片堿(1)、別隱品堿(2)、血根堿(3)、白屈菜紅堿(4)、去甲基白屈菜紅堿(5)、去氫紫堇堿(6)、N-甲基四氫黃連堿(7)、黃柏堿(8)、6-甲氧基去甲基血根堿(9)、6-氰基二氫血根堿(10)、6-氰基二氫白屈菜紅堿(11)、6-丙酮基二氫血根堿(12)、二氫血根堿(13)、二氫白屈菜紅堿(14)。其中,5~9為首次在博落回屬植物中分離得到。
Bruker AV-400 MHz型核磁共振儀(瑞士Bruker公司);HPLC-Q-TOF-MS(美國(guó)Agilent公司);制備高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);柱色譜硅膠(300~400目)、GF254薄層硅膠高效板(青島海洋化工廠);實(shí)驗(yàn)用乙醇、甲醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮、三乙胺、濃氨水、濃硫酸均為分析純;色譜純甲醇、乙腈、甲酸(德國(guó)Merck公司);實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水和Milli-Q超純水。
博落回新鮮葉于2014年9月采自國(guó)家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心長(zhǎng)沙基地,經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)楊廣民教授鑒定為罌粟科博落回屬植物博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.的葉子,標(biāo)本存放于國(guó)家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心。
取博落回新鮮葉100 kg,委托湖南美可達(dá)生物資源有限公司提取,清水洗凈,95%乙醇水浸泡12 h,多功能提取罐回流提取2次,每次提取時(shí)間為1 h,回收溶劑,濃縮得到博落回流浸膏14 kg,繼續(xù)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,得到浸膏6 kg,浸膏加入10倍量1%硫酸水溶液,攪拌,調(diào)pH至3,靜止24 h,濾去沉淀,濾液加濃氨水調(diào)pH到10,攪拌,靜止24 h,除去上清液,得到沉淀,濃縮干燥后為290.5 g。沉淀部分經(jīng)硅膠柱色譜,依次用石油醚-乙酸乙酯(4∶1~1∶1)和甲醇洗脫,收集流分,共得5個(gè)組分。每個(gè)組分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜和制備高效液相色譜法進(jìn)行分離純化。分離得到化合物1(728.0 mg)、2(1.4 g)、3(316.4 mg)、4(225.3 mg)、5(8.2 mg)、6(7.6 mg)、7(7.0 mg)、8(5.4 mg)、9(9.4 mg)、10(11.6 mg)、11(10.4 mg)、12(21.6 mg)、13(17.9 mg)、14(15.8 mg)。
化合物1:白色粉末。ESI-MSm/z:354.1[M+H]+;分子式為C20H19NO5。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.89(1H,s,H-1),6.67(2H,dd,J=4 Hz,H-11,12),6.63(1H,s,H-4),5.94(2H,s,2-OCH2O-3),5.91(2H,s,9-OCH2O-10),3.78(2H,m H-13),3.57(2H,m,H-8),2.88(2H,m,H-6),2.52(2H,m,H-5),1.91(3H,s,N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:108.2(C-1),148.1(C-2),146.1(C-3),110.6(C-4),132.9(C-4a),31.9(C-5),57.9(C-6),50.9(C-8),118.0(C-8a),146.4(C-9),146.0(C-10),106.8(C-11),125.7(C-12),129.1(C-12a),46.6(C-13),194.9(C-14),136.3(C-14a),101.3(2-OCH2O-3),100.9(9-OCH2O-10),41.7(N-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9],故鑒定化合物1為原阿片堿。
化合物2:無(wú)色晶體(甲醇)。ESI-MSm/z:370.1[M+H]+;分子式為C21H24NO5。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.93(1H,s,H-1),6.87(1H,d,J=4 Hz,H-11),6.79(1H,d,J=4 Hz,H-12),6.61(1H,s,H-4),5.91(2H,s,2-OCH2O-3),3.88(3H,s,9-OCH3),3.79(3H,s,10-OCH3),3.78(2H,m,H-13),3.57(2H,m,H-8),2.88(2H,m,H-6),2.52(2H,m,H-5),1.91(3H,s,N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:109.2(C-1),146.1(C-2),147.4(C-3),110.6(C-4),132.9(C-4a),32.4(C-5),57.6(C-6),50.2(C-8),128.6(C-8a),151.6(C-9),146.1(C-10),110.6(C-11),127.7(C-12),129.6(C-12a),46.3(C-13),193.3(C-14),136.0(C-14a),101.2(2-OCH2O-3),60.1(9-OCH3),55.1(10-OCH3),41.2(N-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9],故鑒定化合物2為別隱品堿。
化合物3:ESI-MSm/z:332.0[M]+,分子式為C20H14NO4+;化合物4:ESI-MSm/z:348.1[M]+;分子式為C21H18NO4+。與實(shí)驗(yàn)室血根堿、白屈菜紅堿對(duì)照品在石油醚-乙酸乙酯(2∶1)、石油醚-丙酮(3∶1)中展開(kāi),結(jié)果Rf值一致,故化合物3和4分別鑒定為血根堿、白屈菜紅堿。
化合物5:粉紅色粉末。ESI-MSm/z:334.1[M+H]+;分子式為C20H15NO4。1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:9.77(1H,s,H-6),8.73(1H,s,H-1),8.38(1H,s,H-4),8.38(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.87(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.62(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.29(1H,d,J=8.4 Hz,H-9),6.16(2H,s,2,3-OCH2O-),4.15(3H,s,7-OCH3),4.08(3H,s,8-OCH3);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:104.4(C-1),148.5(C-2),148.0(C-3),102.1(C-4),121.8(C-4a),128.0(C-4b),145.2(C-6),120.1(C-6a),146.4(C-7),149.4(C-8),127.1(C-9),118.2(C-10),128.8(C-10a),118.7(C-10b),118.3(C-11),129.7(C-12),131.0(C-12a),101.4(2,3-OCH2O-),62.0(7-OCH3),56.8(8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10],故鑒定化合物5為去甲基白屈菜紅堿,為首次在博落回屬植物中分離得到。
化合物6:黃色晶體(甲醇)。ESI-MSm/z:366.1[M]+;分子式為C22H24NO4+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:9.66(1H,s,H-8),8.01(1H,d,J=8.6 Hz,H-11),7.92(1H,d,J=8.6 Hz,H-12),7.25(1H,s,H-1),7.04(1H,s,H-4),4.98(2H,t,J=6.4 Hz,H-6),4.25(3H,s,9-OCH3),4.08(3H,s,10-OCH3),4.04(3H,s,3-OCH3),4.02(3H,s,2-OCH3),3.22(2H,t,J=6.4 Hz,H-5),2.83(3H,s,13-CH3);13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:152.6(C-2),151.4(C-10),149.2(C-3),146.1(C-9),145.0(C-8),135.5(C-12a),132.6(C-13a),132.2(C-4a),128.1(C-11),123.3(C-8a),122.7(C-12),121.0(C-13b),116.4(C-13),115.9(C-1),112.3(C-4),62.6(9-OCH3),58.5(C-6),57.3(10-OCH3),56.9(2-OCH3),56.5(3-OCH3),28.1(C-5),18.5(13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11],故鑒定化合物6為去氫紫堇堿,為首次在博落回屬植物中分離得到。
化合物7:黃色晶體(甲醇)。ESI-MSm/z:338.1[M]+;分子式為C20H20NO4+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.82(1H,s,H-1),6.75(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),6.70(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),6.67(1H,s,H-4),6.01(2H,s,2-OCH2O-3),5.95(2H,s,9-OCH2O-10),4.25(1H,d,J=15.6 Hz,H-8b),3.74(1H,m,H-14),3.56(1H,d,J=15.6 Hz,H-8a),3.24(1H,m,H-13b),3.20(3H,s,N-CH3),3.15(1H,s,H-6b),2.84(1H,m,H-5b),2.68(1H,m,H-6a),2.66(1H,m,H-13a),2.62(1H,m,H-5a);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:150.1(C-9),148.7(C-2),146.2(C-10),145.3(C-3),128.5(C-12a),121.6(C-13b),120.7(C-12),120.1(C-4a),118.4(C-8a),112.5(C-4),110.3(C-11),108.3(C-1),102.0(9-OCH2O-10),101.5(2-OCH2O-3),64.6(C-13a),56.9(C-8),53.5(C-6),52.1(N-CH3),35.6(C-13),27.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12],故鑒定化合物7為N-甲基四氫黃連堿,為首次在博落回屬植物中分離得到。
化合物8:橙紅色晶體(甲醇)。ESI-MSm/z:342.1[M]+;分子式為C20H24NO4+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.86(1H,s,H-1),6.84(1H,s,H-4),6.75(1H,s,H-12),6.72(1H,s,H-9),5.08(1H,m,H-13a),4.68(2H,m,H-8),3.82(6H,s,2×OCH3),3.47(1H,m,H-6),3.38(1H,m,H-6′),3.34(2H,m,H-13),3.11(1H,m,H-5),3.05(1H,m,H-5′);13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:150.1(C-10),149.1(C-3),148.7(C-2),147.3(C-11),126.1(C-12a),122.5(C-8a),120.2(C-4a),116.4(C-13b),115.7(C-12),114.3(C-4),112.8(C-9),110.7(C-1),66.8(C-13a),65.5(C-8),56.2(2×OCH3),52.5(C-6),50.7(N-CH3),35.1(C-13),24.5(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10],故鑒定化合物8為黃柏堿,為首次在博落回屬植物中分離得到。
化合物9:桔黃色粉末。ESI-MSm/z:348.1[M+H]+;分子式為C20H13NO5;1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:9.77(1H,s,H-6),8.73(1H,s,H-1),8.38(1H,s,H-4),8.38(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.87(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.62(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.29(1H,d,J=8.4 Hz,H-9),6.16(2H,s,2,3-OCH2O-),4.15(3H,s,7-OCH3),4.08(3H,s,8-OCH3);13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:104.4(C-1),148.5(C-2),148.0(C-3),102.1(C-4),121.8(C-4a),128.0(C-4b),145.2(C-6),120.1(C-6a),146.4(C-7),149.4(C-8),127.1(C-9),118.2(C-10),128.8(C-10a),118.7(C-10b),118.3(C-11),129.7(C-12),131.0(C-12a),101.4(2,3-OCH2O-),62.0(7-OCH3),56.8(8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11],故鑒定化合物9為6-甲氧基去甲基血根堿,為首次在博落回屬植物中分離得到。
化合物10:白色粉末。ESI-MSm/z:359.1[M+H]+;分子式C21H14N2O4。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.71(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.65(1H,s,H-4),7.56(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.37(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.12(1H,s,H-4),6.97(1H,d,J=8.4 Hz,H-9),6.12(2H,dd,J=1.6 Hz,2-OCH2O-3),6.10(2H,s,7-OCH2O-8),5.32(1H,s,H-6),2.66(3H,s,N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:104.6(C-1),148.1(C-2),147.9(C-3),100.7(C-4),126.8(C-4a),138.6(C-4b),48.8(C-6),117.2(C-6a),148.7(C-7),145.1(C-8),109.5(C-9),125.4(C-10),125.4(C-10a),123.2(C-10b),120.2(C-11),117.4(C-12),131.4(C-12a),101.3(2-OCH2O-3),102.3(7-OCH2O-8),41.6(N-CH3),107.7(6-CN)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[4],故鑒定化合物10為6-氰基二氫血根堿。
化合物11:白色粉末。ESI-MSm/z:375.1[M+H]+;分子式C22H18N2O4。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.72(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.65(1H,s,H-4),7.58(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.56(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.12(1H,s,H-1),7.07(1H,d,J=8.4 Hz,H-9),6.06(2H,s,2-OCH2O-3),5.6(1H,s,H-6),4.0(3H,s,8-OCH3),3.94(3H,s,7-OCH3),2.62(3H,s,N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:104.6(C-1),148.6(C-2),148.1(C-3),100.7(C-4),126.7(C-4a),138.7(C-4b),48.7(C-6),120.8(C-6a),146.2(C-7),152.4(C-8),113.6(C-9),119.4(C-10),125.1(C-10a),123.0(C-10b),119.9(C-11),125.2(C-12),131.4(C-12a),101.3(2-OCH2O-3),41.6(N-CH3),118.4(6-CN),61.3(7-OCH3),56.1(8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[4],故鑒定化合物11為6-氰基二氫白屈菜紅堿。
化合物12:白色粉末。ESI-MSm/z:390.1[M+H]+;分子式C23H19NO5。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.71(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.53(1H,s,H-4),7.48(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.34(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.10(1H,s,H-1),6.87(1H,d,J=8.0 Hz,H-9),6.05(2H,s,2-OCH2O-3),6.03(2H,s,7-OCH2O-8),4.88(1H,dd,J=6,10.4 Hz,H-6),2.65(3H,s,N-CH3),2.32(2H,d,J=14.8 Hz,H-1′),2.06(3H,s,H-3′);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:104.5(C-1),148.4(C-2),147.7(C-3),100.7(C-4),125.8(C-4a),139.3(C-4b),54.6(C-6),123.6(C-6a),144.4(C-7),147.3(C-8),107.7(C-9),116.6(C-10),127.7(C-10a),116.2(C-10b),127.7(C-10a),120.1(C-11),124.1(C-12),131.1(C-12a),101.6(2-OCH2O-3),43.1(N-CH3),101.2(7-OCH2O-8),46.7(C-1′),207.3(C-2′),31.4(C-3′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9],故鑒定化合物12為6-丙酮基二氫血根堿。
化合物13:白色粉末。ESI-MSm/z:334.1[M+H]+;分子式C20H15NO4。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.70(1H,d,J=8.4 Hz,H-11),7.68(1H,s,H-4),7.49(1H,d,J=8.4 Hz,H-12),7.31(1H,d,J=8.4 Hz,H-10),7.11(1H,s,H-1),6.86(1H,d,J=8.0 Hz,H-9),6.05(2H,s,2-OCH2O-3),6.03(2H,s,7-OCH2O-8),4.20(2H,s,H-6),2.62(N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:104.4(C-1),148.2(C-2),147.6(C-3),100.8(C-4),126.6(C-4a),142.6(C-4b),48.5(C-6),113.7(C-6a),144.7(C-7),147.2(C-8),107.3(C-9),116.3(C-10),127.4(C-10a),124.5(C-10b),120.4(C-11),124.0(C-12),130.9(C-12a),101.4(2-OCH2O-3),41.7(N-CH3),101.1(7-OCH2O-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9],故鑒定化合物13為二氫血根堿。
化合物14:白色粉末。ESI-MSm/z:350.1[M+H]+;分子式C21H19NO4。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.71(1H,d,J=8.8 Hz,H-11),7.67(1H,s,H-4),7.51(1H,d,J=8.8 Hz,H-10),7.46(1H,d,J=8.8 Hz,H-12),7.10(1H,s,H-1),6.95(1H,d,J=8.8 Hz,H-9),6.04(2H,s,2-OCH2O-3),3.92(7-OCH3),3.88(8-OCH3),4.29(2H,s,H-6),2.59(N-CH3);13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:104.4(C-1),148.2(C-2),147.6(C-3),100.8(C-4),126.5(C-4a),142.8(C-4b),48.8(C-6),126.4(C-6a),146.0(C-7),152.2(C-8),111.1(C-9),118.8(C-10),126.5(C-10a),124.2(C-10b),120.2(C-11),123.9(C-12),130.9(C-12a),100.8(2-OCH2O-3),41.7(N-CH3),61.1(7-OCH3),55.9(8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9],故鑒定化合物14為二氫白屈菜紅堿。
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IsolationandIdentificationofAlkaloidsfromFreshLeavesofMacleayacordata
YANG Peng1,2,XIANG Feng1,2,QING Zhixing1,2,CAO Hualiang3,ZENG Jianguo1,2,3*
(1.CollegeofPharmacy,HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410208,China;2.HunanCo-innovationCenterforUtilizationofBotanicalsFunctionalIngredients,Changsha410128,China;3.NationalandProvincialUnionEngineeringResearchCenterfortheVeterinaryHerbalMedicineResourcesandInitiative,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China)
Objective:To study the alkaloids from the leaf ofMacleayacordata.MethodsThe alkaloids were isolated and purified by silica gel column chromatography and preparative liquid chromatography,and the structures were elucidated based on the spectral data.Results14 alkaloids were obtained from the fraction of ethanol extract and identified as protopine (1),allocryptopine (2),sangunarine (3),chelerythrine (4),Norcheleryth-rine (5),dehydrocorydaline (6),N-methyltetrahydrocoptisine (7),phellodendrine (8),6-methoxyldemethylsanguin-arine (9),6-cyanodihydrosangunarine (10),6-cyanodihydrochelerythrine (11),6-acetonyldihydrosangunarine (12),dihydrosangunarine (13) and dihydrochelerythrine (14).ConclusionCompounds5-9are isolated fromMacleayacordatafor the first time.
Macleayacordata(Willd) R.Br.;leaf;alkaloids
湖南省科技重點(diǎn)計(jì)劃(2016SK3002)
*
曾建國(guó),教授,研究方向:中藥資源與綜合利用;Tel:(0731)84673824,E-mail:zengjianguo@hunau.edu.cn
10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.004
2017-02-20)