馬吉軍

(甘肅省臨澤縣畜牧局，734200)

雞源致病性大腸桿菌的耐藥基因PCR檢測(cè)

馬吉軍

(甘肅省臨澤縣畜牧局，734200)

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏桿菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株所引起的一類疾病的總稱，是危害養(yǎng)雞業(yè)主要細(xì)菌性疾病。大腸桿菌血清型眾多，且易產(chǎn)生耐藥性。雞致病性大腸桿菌的耐藥性與本身攜帶的耐藥基因具有一定的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)臨床分離5株雞致病性大腸桿菌，用PCR方法對(duì)其四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB分布進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌均攜帶檢四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB檢出率均為100%，因此，證實(shí)了說(shuō)明臨床分離5株雞致病性大腸桿菌對(duì)四環(huán)素類藥物存在很強(qiáng)的耐藥性。

雞；致病性大腸桿菌；耐藥基因；PCR

本試驗(yàn)旨在研究雞源性大腸桿菌對(duì)四環(huán)素類藥物的耐藥性和耐藥基因機(jī)制的攜帶情況，討論二者的相關(guān)性，從分子生物學(xué)角度,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增細(xì)菌的保守片段,分析大腸桿菌對(duì)四環(huán)素類藥物產(chǎn)生耐藥的原因，為臨床上的疾病防治提供了理論支持。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源

臨床上分離的5株雞致病性大腸桿菌

1.2 試劑與儀器

革蘭氏染色液購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、DL2000DNA Marker、瓊脂糖、購(gòu)自TIANGEN生物技術(shù)有限公司；Premix Taq（Loading dye mix D334A）購(gòu)自大連寶生物工程有限公司。FGEN02TD型PCR儀由英國(guó)Techne公司生產(chǎn)，DYY-6C型電泳儀由北京六一儀器廠生產(chǎn)，Bio-BEST200E型凝膠成像分析系統(tǒng)由美國(guó)西蒙生產(chǎn)。

1.3 相關(guān)試劑的配制

1.3.1 5×TBE buffer：Tris 54.0 g， 硼酸：27.5 g，20.0 mL 0.5 mol/L EDTA(PH 8.0)定容到 1000 mL，室溫保存。

1.3.2 1.5%瓊脂糖膠：稱取1 g瓊脂糖放入三角燒瓶中，量取 5×TBE buffer 20 mL，加入 80 ml雙蒸水，5倍稀釋成 1×TBE，倒入上述三角燒瓶中，混合均勻，加熱使瓊脂糖熔化，待冷卻至 55℃左右時(shí)加 EB 5 μL，倒入凝膠槽冷凝后備用。

1.4 致病性大腸桿菌DNA模板制備

用水煮法提取5株大腸桿菌的DNA組，將5株臨床分離的雞源致病性大腸桿菌分別接種與普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置37℃恒溫箱震蕩培養(yǎng)12 h，5株臨床分離的雞源致病性大腸桿菌取出500μL，6000rpm離心5min，棄去上清，留沉淀，用100μL無(wú)菌水重新懸起來(lái)，煮沸10min，12000 rpm離心5min，留上清。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2 結(jié)果與分析

2.1 致病性大腸桿菌DNA的提取結(jié)果

用水煮法提取5株大腸桿菌的DNA組 將提取的5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組加入等量的染料進(jìn)行電泳檢測(cè)，電泳檢測(cè)完畢后放入電泳凝膠成像系統(tǒng)觀察，結(jié)果顯示，5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組出現(xiàn)明顯條帶，說(shuō)明5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組成功提取。

2.2 致病性大腸桿菌四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetB檢測(cè)結(jié)果

四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetBPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，5株雞源致病性大腸桿菌耐藥基因tetA基因檢出5株，檢出率100%；5株雞源致病性大腸桿菌耐藥基因tetB基因檢出5株，檢出率100%。其中，臨床上分離的5株雞源致病性大腸桿菌同時(shí)攜帶四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetB。

3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)對(duì)臨床分離5株雞致病性大腸桿菌用PCR方法檢測(cè)四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB分布，結(jié)果顯示，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌均攜帶檢四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB，檢出率均為100%，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌對(duì)四環(huán)素類藥物存在很強(qiáng)的耐藥性，應(yīng)引起重視。

[1]陳薄言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2015.

S855.1

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1003-8655（2017）06-0060-01