馬建蘋，李玉娟，郭濤，李善家，晉玲

(1蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州730050；2甘肅省中藏藥篩選評(píng)價(jià)及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州理工大學(xué)，蘭州 730050；3甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，蘭州730000)

糙蘇化學(xué)成分研究

馬建蘋1,2*，李玉娟1,2，郭濤1,2，李善家1，晉玲3

(1蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州730050；2甘肅省中藏藥篩選評(píng)價(jià)及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州理工大學(xué)，蘭州 730050；3甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，蘭州730000)

目的：研究唇形科糙蘇屬植物糙蘇Phlomis umbrosaTurcz.全草石油醚萃取部位的化學(xué)成分。方法：糙蘇石油醚萃取物采用硅膠、Sephadex LH 20凝膠柱進(jìn)行分離純化，并通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從糙蘇全草醇提物石油醚萃取部位分離得到7個(gè)單體化合物，分別鑒定為132-羥基-脫鎂葉綠素 A (1)、β-谷甾醇 (2)、熊果酸 (3)、β-胡蘿卜苷 (4)、齊墩果酸 (5)、豆甾醇 (6)、對(duì)羥基苯甲酸 (7)。結(jié)論：化合物1為首次從該科植物中分離得到，7為首次從該種植物中分離得到。

唇形科；糙蘇屬；糙蘇；石油醚萃取部位；化學(xué)成分

中藥糙蘇為唇形科糙蘇屬植物糙蘇Phlomis umbrosaTurcz.的干燥全草，多年生直立草本[1]，俗名蜂窩草、白丹參、也叫常山、續(xù)斷、山芝麻[2]，分布于遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山東、山西、陜西、甘肅、四川、貴州及湖北等省區(qū)，將糙蘇作為主要原料已經(jīng)研制出預(yù)防和治療糖尿病的內(nèi)服藥和保健品、頭發(fā)防脫劑、保健藥酒、免疫調(diào)節(jié)劑。雌性激素分泌調(diào)節(jié)劑以及防癌抗癌的保健品[3]。糙蘇的根和全草均可入藥，其性味溫辛、可祛風(fēng)活絡(luò)、強(qiáng)筋壯骨、清熱消腫，糙蘇地上部分具有散風(fēng)、解毒、止咳、祛痰、治療感冒、補(bǔ)肝腎、續(xù)筋骨、止血安胎、生肌等功效，用于治療感冒咳嗽、支氣管炎、肺炎、瘡爛久潰不愈等癥[4]。糙蘇的藥理活性和糙蘇中的化學(xué)成分密切相關(guān)。糙蘇全草含有黃酮類化合物、環(huán)烯醚萜類化合物、苯乙醇苷類化合物、單萜類化合物、二萜類化合物、三萜類化合物、木脂素類化合物、揮發(fā)油、糖類和微量元素等有效成分[5-8]。本文對(duì)糙蘇全草醇提物石油醚萃取物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從石油醚萃取物中分離得到了7個(gè)單體化合物，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定所得單體化合物的結(jié)構(gòu)為：132-羥基-脫鎂葉綠素 A（1）、β-谷甾醇（2）、熊果酸（3）、β-胡蘿卜苷（4）、齊墩果酸（5）、豆甾醇（6）、對(duì)羥基苯甲酸（7）。本研究將為進(jìn)一步綜合開發(fā)利用糙蘇提供理論支撐。

1、儀器與材料

柱層析硅膠、薄層層析硅膠均購自青島海洋化工廠；Sephadex LH-20 購自上海安瑪西亞生物技術(shù)有限公司；Yanaco微量熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度計(jì)未校正）；Varian mercury 400MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀；所用溶劑均為分析純，由上海振興化學(xué)試劑廠和天津化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

本實(shí)驗(yàn)所用糙蘇藥材采集于甘肅省蘭州市榆中縣官灘溝，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院晉玲教授鑒定為糙蘇（Phlomis umbrosaTurcz.） 的全草。

2、提取與分離

將干燥的糙蘇全草粉碎，然后用95%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑，得到乙醇提取物140g。將提取物加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分減壓回收溶劑。乙醇提取物得到石油醚萃取物12g、乙酸乙酯萃取物30g、正丁醇萃取物25g、和水萃取物70g。

選取石油醚萃取物（12g） 為研究對(duì)象，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究。石油醚萃取物進(jìn)行硅膠柱層析，以（1:0，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1） 石油醚:乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，用甲醇沖柱。常壓蒸餾回收溶劑，結(jié)合薄層檢識(shí)進(jìn)行合并餾分，最后得到14個(gè)洗脫組分：Fr. A～N。組分D用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，常壓蒸餾回收溶劑，結(jié)合薄層檢識(shí)進(jìn)行合并，得到8份樣品，選取第1份樣品，經(jīng)反復(fù)硅膠和凝膠Sephadex LH-20柱層析分離純化得到綠色固體化合物1（17.3mg）。組分C用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，常壓蒸餾回收溶劑，結(jié)合薄層檢識(shí)進(jìn)行合并，得到5份樣品。選第二份樣品，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱層析，分離得到白色針狀結(jié)晶化合物2（12.5mg） 和白色固體化合物3（20.5mg）。組分L用二氯甲烷和甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，常壓蒸餾回收溶劑，合并子餾分得到11份樣品，選第二份樣品，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析分離純化得到白色無定形粉末化合物4（54.3mg）。組分N用二氯甲烷和甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，用水沖柱，常壓蒸餾回收溶劑，結(jié)合薄層檢識(shí)進(jìn)行合并，得到10份樣品，選第二份樣品經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析得到白色固體化合物5（17.8mg）。組分M用二氯甲烷和甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，常壓蒸餾回收溶劑，結(jié)合薄層檢識(shí)進(jìn)行合并，得到11份樣品，對(duì)第8份樣品進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱層析分離純化，得到了白色固體化合物6（22.3mg）。再對(duì)第9份樣品進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析分離純化，得到了白色固體化合物7（78.6mg）。

3、結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：綠色固體，易溶于氯仿，二氯甲烷。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 9.58 (1H, s, H-10), 9.43(1H, s, H-5), 8.63 (1H, s, H-20), 8.00 (1H, dd, J =17.4,11.4Hz, H-31)，6.28 (1H, br d, J =17.4Hz, H-32E), 6.17(1H, br d, J =11.4Hz, H-32Z), 5.53 (1H, s, H-132-OH),5.20 (2H, m, H-P2), 4.56 (1H, m, H-P1), 4.48 (1H, m,H-18), 4.17 (1H, m, H-17), 3.73 (3H, s, H-121), 3.69(3H, m, H-81), 3.61 (1H, s, H-134), 3.41 (3H, s, H-21),3.22 (3H, s, H-71), 1.81～2.93 (6H, m, H-P4, H-171,H-172), 1.69 (3H, t, J =6.6Hz, H-82), 1.62 (3H, s,H-P31), 1.60 (2H, d, J =7.8Hz, H-181), 1.50 (1H, m,H-P15), 1.01～1.34 (20H, m, H-P4～H-P14), 0.76～0.88(12H, d, J =7.2Hz, H-P151, H-P16, H-P71, H-P111)。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 192.0 (C-131), 173.6 (C-173), 172.8 (C-133), 172.4 (C-19), 162.4 (C-16), 155.3(C-6), 151.0 (C-9), 149.8 (C-14), 145.1 (C-8), 142.9(C-P3), 142.0 (C-1), 137.7 (C-11), 136.4 (C-7), 136.2(C-3), 136.1 (C-4), 131.7 (C-2), 129.3 (C-12), 129.0(C-31), 126.9 (C-13), 122.8 (C-32), 117.8 (C-P2), 107.7(C-15), 104.2 (C-10), 97.8 (C-5), 93.6 (C-20), 89.0 (C-132), 61.6 (C-P1), 53.4 (C-134), 51.8 (C-17), 50.3 (C-18), 39.8 (C-P4), 39.3 (C-P14), 37.4 (C-P6), 37.3 (C-P8),37.2 (C-P10), 36.6 (C-P12), 32.7 (C-P7), 32.6 (C-P11),31.9 (C-172), 29.4 (C-171), 27.9 (C-P15), 25.0 (C-P5),24.8 (C-P9), 24.4 (C-P13), 22.7×2 (C-P16, C-181), 22.6(C-P17), 19.7 (C-P111), 19.6 (C-P71), 19.4 (C-81), 17.4(C-82), 14.1 (C-P31), 12.3 (C-121), 12.1 (C-21), 11.2(C-71)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物1為132-羥基-脫鎂葉綠素A。

化合物2：白色針狀結(jié)晶，與β-谷甾醇對(duì)照品相比較，Rf值一致，且與對(duì)照品混合熔點(diǎn)不降低，因此鑒定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：白色固體，與熊果酸對(duì)照品相對(duì)比，Rf值一致，因此鑒定化合物3為熊果酸。

化合物4：白色片狀固體，與胡蘿卜苷對(duì)照品相對(duì)比，Rf值一致，因此鑒定化合物4為胡蘿卜苷。

化合物5:白色固體，溶于氯仿，mp 308～310℃。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 5.28 (1H, br s, H-12), 3.22(1H, m, H-3), 2.81 (1H, m, H-18), 0.75～1.13 (21H, s,H-23, H-24, H-25, H-26, H-27)。13C-NMR (150 MHz,CDCl3) δ: 183.5 (C-28), 143.6 (C-13), 122.6 (C-12),79.0 (C-3), 55.2 (C-5), 47.6 (C-9), 46.5 (C-19), 45.9(C-17), 41.6 (C-14), 41.0 (C-18), 39.3 (C-8), 38.7 (C-4), 38.4 (C-1), 37.1 (C-10), 33.8 (C-21), 33.1 (C-30),32.6 (C-22), 32.4 (C-7), 30.7 (C-20), 28.1 (C-23), 27.7(C-15), 27.2 (C-2), 25.9 (C-27), 23.6 (C-29), 23.4 (C-16), 22.9 (C-11), 18.3 (C-6), 17.1 (C-26), 15.5 (C-25),15.3 (C-24)。EI-MSm/z: 456 [M]+。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物5為齊墩果酸。

化合物6: 白色固體，易溶于氯仿。mp160～170℃。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 5.35 (1H, s, H-6), 5.15 (1H,m, H-22), 5.02 (1H, m, H-23), 3.52 (1H, m, H-3), 1.25(3H, s, H-19), 1.01 (3H, d, J =6.6Hz, H-21), 0.84 (3H,d, J =4.8Hz, H-27), 0.81 (6H, m, H-26, H-29), 0.69 (3H,s, H-18)。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 140.7 (C-5),138.3 (C-22), 129.2 (C-23), 121.7 (C-6), 71.8 (C-3),56.8 (C-14), 56.0 (C-17), 51.2 (C-24), 50.1 (C-9), 42.3(C-4), 42.2 (C-13), 40.5 (C-20), 39.7 (C-12), 37.2 (C-1), 36.5 (C-10), 31.9×2 (C-2, C-8), 31.6 (C-25), 29.7(C-7), 28.9 (C-16), 25.4 (C-28), 24.3 (C-15), 21.1×2(C-11, C-26), 21.0 (C-21), 19.4 (C-19), 19.0 (C-27),12.2 (C-29), 12.0 (C-18)。ESI-MSm/z: 274.2694 [MC10H19+H]+。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物6為豆甾醇。

化合物7: 白色固體，溶于丙酮，mp213-214℃。1H-NMR (600Hz, CD3COCD3) δ: 7.99 (2H, d,J=9.0Hz, H-2,H-6), 6.98 (2H, d, J=9.0Hz, H-3, H-5)。13C-NMR (150MHz,CD3COCD3) δ: 167.9 (C-7), 162.6 (C-4), 132.6×2 (C-2, C-6), 122.5 (C-1), 115.6×2 (C-3, C-5)。ESI-MSm/z:137.1 [M-H]-。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，因此鑒定化合物7為對(duì)羥基苯甲酸。

[1]中國植物志編輯委員會(huì)． 中國植物志（第66卷）[M]． 科學(xué)出版社，1977，119-905．

[2]田光輝，劉存芳． 秦巴山區(qū)野生糙蘇化學(xué)成分的研究[J]． 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(12）:5047-5049．

[3]劉存芳，田光輝，賴普輝． 中藥糙蘇的開發(fā)與應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J]． 中國科技信息，2008，04:165-165．

[4]劉相博，張輝，劉存芳． 野生糙蘇中化學(xué)成分研究進(jìn)展[J]． 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009，21:68-68．

[5]Jung K Y，Do J C，Son K H． A study on the iridoid constituents from the roots of Phlomis umbrosa[J]． Korean Journal of Pharmacognosy，1996，27(2）:87．

[6]Guo S J，Gao L M，Cheng D L． Iridoids from Phlomis umbrosa[J]． Pharmazie，2001，56(2）:178-180．

[7]楊永利，郭守軍，孫坤，等． 中藥糙蘇親水性化學(xué)成分的研究[J]． 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2004，40(2）:67-71．

[8]付宏征，劉世旺． 糙蘇的化學(xué)成分[J]． 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999，34(4）:297-300．

[9]Yaacob N S，Yankuzo H M，Devaraj S，et al． Anti-tumor action，clinical biochemistry profile and phytochemical constituents of a pharmacologically active fraction of S．crispus in NMU-induced rat mammary tumour model[J]． Plos One，2014，10(5）:1-20．

[10]Carvalho L M，Seita J． A new oleanolic acid derivative from Securinega tinctoria[J]． Planta Medica，1993，59(4）:369-372．

[11]于建婷，林均明，鄒曉楠，郭海燕，李玉山． 海洋生物鹵蟲卵化學(xué)成分的分離與鑒定[J]． 沈陽藥科大學(xué) 學(xué)報(bào)，2012，29(5）:348-358．

[12]陳永勝，林小燕，鐘林靜，謝捷明，張永紅． 三葉蔓荊的化學(xué)成分研究[J]． 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2011，06:1011-1013，1048．

甘肅省自然科學(xué)基金（No. 1606RJZA207）