張彩霞

（山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校解剖生理教研室，山東 煙臺(tái) 264199）

前體mRNA剪輯蛋白Tra2基因在神經(jīng)組織中的表達(dá)特征發(fā)育調(diào)控策略研究

張彩霞

（山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校解剖生理教研室，山東 煙臺(tái) 264199）

目的 分析前體mRNA剪輯蛋白Tra2基因在神經(jīng)組織中的表達(dá)特征發(fā)育調(diào)控策略。方法 使用自制Tra2α1抗血清以及Tra2β蛋白的RA301血清，對不同時(shí)期的人類胚胎組織中Tra2蛋白加以檢測。分析相關(guān)結(jié)果。結(jié)果 從11-16周，Tra2β1蛋白在心臟和肺臟內(nèi)表達(dá)量上升。在11周，Tra2α1在脊髓，延髓和小腦內(nèi)有表達(dá)趨勢，腎臟和心臟亦有表達(dá)，其余組織無表達(dá)。16周，在11周，Tra2α1在神經(jīng)組織內(nèi)依然為高水平表達(dá)。心臟少量表達(dá)，其余組織無表達(dá)。結(jié)論 Tra2蛋白可經(jīng)過多方式對某些特異性基因前體mRNA剪輯，對生長發(fā)育起到調(diào)控作用，心臟以及神經(jīng)組織的發(fā)育依賴于Tra2α1蛋白的調(diào)節(jié)功能，在11周內(nèi)，Tra2α1蛋白的剪輯調(diào)節(jié)功能對于腎臟的發(fā)育也存在一定作用。

前體mRNA；Tra2基因；神經(jīng)組織；表達(dá)特征；發(fā)育調(diào)控

0 引言

Tra2基因具備了前體mRNA剪輯調(diào)節(jié)蛋白的特點(diǎn)。該物質(zhì)在水平蛋白上的表達(dá)情況，有可能對發(fā)育中的一些功能造成影響，由此可見，對前體mRNA剪輯蛋白Tra2基因在神經(jīng)組織中的表達(dá)特征發(fā)育調(diào)控策略進(jìn)行研究，有著相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義。有文獻(xiàn)指出，Tra2蛋白在小鼠內(nèi)以及生長過程中，體現(xiàn)出高水平表達(dá)[1]。證實(shí)其在神經(jīng)發(fā)育中發(fā)揮出了一定作用，但發(fā)育情況在人類組織中，尚無系統(tǒng)報(bào)道。該項(xiàng)研究對于全面了解Tra2在人類生長發(fā)育調(diào)控功能有著相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義。

結(jié)合實(shí)際情況，本文使用自制Tra2α1抗血清和可以檢測Tra2β蛋白的RA301血清對于不同發(fā)育期間內(nèi)人類胎各組織內(nèi)Tra2蛋白進(jìn)行檢測，以分析其在神經(jīng)組織內(nèi)表達(dá)特點(diǎn)，研究發(fā)育調(diào)控策略，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

使用自制Tra2α1抗血清以及抗全長型以及截短型Tra2β蛋白抗血清為實(shí)驗(yàn)樣本，樣本收采自我院正常流產(chǎn)的11周以及16周胎兒。實(shí)驗(yàn)通過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查。

1.2 方法

使用Western blot分析法，將0.1g胚胎組織在0.2裂解液內(nèi)勻漿處理，以13,000rpm的速度離心15min，選擇上清液于15%SDS-PAGE電泳處理，每種組織蛋白樣本擇取30μg，實(shí)施SDS一PAGE分離，后將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜內(nèi)，使用劑量為50g的脫脂奶粉L/PBS加以封閉。后以家兔Tra2蛋白抗體視為一抗，羊抗兔IgG一Ap進(jìn)行二抗檢測，利用BCIp/NBT顯色。另使用βaetin抗體、用于檢測各個(gè)組織的β-aetin視為對照。

2 結(jié)果

2.1 Tra2α1蛋白于16周和11周人胚組織內(nèi)表達(dá)詳情

在11周，Tra2α1在脊髓，延髓、達(dá)到和小腦內(nèi)呈現(xiàn)出表達(dá)趨勢，表達(dá)量顯著比其余組織高。除卻神經(jīng)組織外，腎臟和心臟也檢測出該物質(zhì)有所表達(dá)。但較神經(jīng)組織弱，剩余組織內(nèi)未檢出Tra2α1蛋白。在16周，Tra2α1在脊髓，延髓、達(dá)到和小腦內(nèi)呈現(xiàn)出表達(dá)趨勢，與11周時(shí)相比,心臟心臟組織中Tra2α1表達(dá)量下降，在其余組織中未呈現(xiàn)出表達(dá)趨勢。由此可見，在11和16周，Tra2α1蛋白分布特異性顯著。

2.2 Tra2β1蛋白于16周和11周人胚組織內(nèi)表達(dá)詳情

在11周，Tra2β1在神經(jīng)組織內(nèi)表達(dá)數(shù)量顯著比非神經(jīng)組織高。在16周，除卻神經(jīng)組織內(nèi)其呈現(xiàn)出較高表達(dá)之外，心、肺部組織的表達(dá)也顯著比肝臟和腎臟表達(dá)量高。

3 討論

假設(shè)前體mRNA剪輯蛋白Tra2基因?qū)τ谏L發(fā)育有著一定調(diào)節(jié)作用，作為功能調(diào)節(jié)的一個(gè)分支，Tra2基因的各個(gè)亞型的表達(dá)情況收到生長發(fā)育各個(gè)階段以及組織類型差異性調(diào)節(jié)影響。有研究證實(shí)，Tra2蛋白具備前體mRNA調(diào)節(jié)特點(diǎn)，蛋白質(zhì)表達(dá)量的多寡可能會(huì)對生長發(fā)育造成影響[2]。由此可見，探究人胎發(fā)育過程內(nèi)各個(gè)組織內(nèi)Tra2表達(dá)特點(diǎn)，有著一定現(xiàn)實(shí)意義。

在發(fā)育時(shí)間為11周以及16周的不同人胚胎組織內(nèi)，Tra2β1蛋白呈現(xiàn)出了高度表達(dá)趨勢，證實(shí)在組織發(fā)育過程內(nèi)，在一定程度上依賴于Tra2β1蛋白。其在人體神經(jīng)組織內(nèi)高表達(dá)，證實(shí)神經(jīng)組織發(fā)育對Tra2β1功能需求量高。值得說明的是，在16周胚胎內(nèi)，心肺組織內(nèi)的Tra2α1型蛋白表達(dá)量上升[3]。證實(shí)在該階段內(nèi)，上述兩種組織的生長對Tra2α1蛋白功能遠(yuǎn)高于其余階段。該類型蛋白有著較強(qiáng)的組織特異性，其在神經(jīng)組織內(nèi)一直呈現(xiàn)為表達(dá)趨勢，其表達(dá)量顯著比其他組織高。而在非神經(jīng)組織內(nèi)，僅在11周心臟組織內(nèi)檢測出，其余組織不存在該物質(zhì)。由此可見，心臟組織和神經(jīng)質(zhì)的發(fā)育依賴于Tra2α1蛋白的調(diào)節(jié)功能，在11周內(nèi)，Tra2α1蛋白的剪輯調(diào)節(jié)功能對于腎臟的發(fā)育也存在現(xiàn)實(shí)意義[4]。

當(dāng)人體神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育時(shí)，多種基因表達(dá)均會(huì)受到剪輯調(diào)節(jié)。其被選擇性剪輯mRNA轉(zhuǎn)變?yōu)楦黝惡蜕窠?jīng)功能發(fā)育有關(guān)的功能蛋白。在此過程內(nèi)，雖說RNA編輯的多起始翻譯位點(diǎn)以及選擇性多聚磷酸化的使用和翻譯之后的二次加工也提供了幫助，但選擇性前體mRNA剪輯內(nèi)起到?jīng)Q定性作用的物質(zhì)依舊為調(diào)控因子[5]。Tra2蛋白可經(jīng)過多方式對某些特異性基因前體mRNA剪輯，進(jìn)而對神經(jīng)發(fā)育存在影響。在此過程中，Tra2蛋白在不同的組織內(nèi)含量存在差異即為調(diào)節(jié)方式之一。值得說明的是，其還能夠利用其它方法，改變影響生長發(fā)育過程中前體mRNA剪輯。

[1] 陳獻(xiàn)華, 李舒婧, 李靜,等. Tra2的功能區(qū)域在GluR-B基因前體mRNA剪接調(diào)控中的作用[C].中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì). 2005.

[2] 杜俊英, 房軍帆, 陳宜恬,等. 電針抗大鼠骨癌痛的參數(shù)優(yōu)選及其對阿片受體和前體mRNA表達(dá)的干預(yù)[J]. 中國針灸, 2015, 35(2)∶161-168.

[3] 陳獻(xiàn)華,李靜,林萬敏,吳琨,徐平. Tra2β1蛋白在神經(jīng)特異性的基因剪接中的功能[J]. 實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào),2004,02∶109-117.

[4] 陳獻(xiàn)華,李靜,孫凱華,林萬敏,徐平. 前體mRNA剪接蛋白Tra2β1的抗體制備及鑒定[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2003,02∶190-194.

[5] 李靜. 前體mRNA剪接蛋白ZNF265的表達(dá)、調(diào)控及功能研究[D].復(fù)旦大學(xué),2006.

Study on the developmental characteristics of mRNA protein gene Tra2 in neural tissue and its developmental regulation

Zhang Cai-xia
(Department of anatomy and physiology, Shandong College of Traditional Chinese Medicine, Shandong, China; 264199)

Objective to analyze the developmental characteristics of the precursor mRNA clip protein Tra2 gene in neural tissues. Methods using self-made Tra2 alpha 1 antiserum and Tra2 beta protein RA301 to serum, the detection of Tra2 from human embryonic tissues in different periods in protein. Results were analyzed. Results from 11-16 weeks, Tra2 beta 1 expression in the heart and lungs were increased. In 11 weeks, Tra2 alpha 1 in spinal cord, expression trend have the medulla and cerebellum, heart and kidney is also expressed, no expression of.16 weeks of other organizations, in 11 weeks, Tra2 alpha 1 in neural tissue is still high expression level. The heart a little expression in other tissue expression. Conclusion Tra2 protein can be more For some specific gene precursor mRNA editing, regulation on growth and development, and the development of heart regulating function of nerve tissue dependent on Tra2 protein alpha 1, in 11 weeks, and there are a certain role in the development of the kidney Tra2 alpha 1 protein editing regulation.

Precursor mRNA; Tra2 gene; nerve tissue; expression characteristics; developmental regulation

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.03.03

張彩霞，女，碩士研究生，助教，研究方向：神經(jīng)發(fā)育與神經(jīng)退行性病變研究。