史東杰，梁擁軍，許金華，孫硯勝，張升利

（1.北京市水產(chǎn)科學研究所國家淡水漁業(yè)工程技術(shù)研究中心，北京100068；

2.農(nóng)業(yè)部都市農(nóng)業(yè)（北方）重點實驗室，北京100097；3.漁業(yè)生物技術(shù)北京市重點實驗室，北京100097；4.天津農(nóng)學院，天津300384）

微生態(tài)制劑對錦鯉生長性能、肌肉組成、體色及非特異性免疫的影響

史東杰1，2，3，梁擁軍1，2，3，許金華4，孫硯勝1，2，3，張升利1，2，3

（1.北京市水產(chǎn)科學研究所國家淡水漁業(yè)工程技術(shù)研究中心，北京100068；

2.農(nóng)業(yè)部都市農(nóng)業(yè)（北方）重點實驗室，北京100097；3.漁業(yè)生物技術(shù)北京市重點實驗室，北京100097；4.天津農(nóng)學院，天津300384）

為探討微生態(tài)制劑在錦鯉養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應用效果，研究微生態(tài)制劑對錦鯉生長、肌肉組成、體色和血清非特異性免疫指標的影響。將300尾初始體質(zhì)量為（147.22±4.51）g的錦鯉隨機分為5組，每組設3個平行，對照組（Ⅰ組）飼喂基礎飼料，試驗組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組）在基礎飼料中分別添加不同劑量（0.05‰、0.10‰、0.20‰、0.40‰）的微生態(tài)制劑粉劑，養(yǎng)殖周期為45 d。結(jié)果表明，與對照組相比，飼料中添加0.20‰微生態(tài)制劑組，錦鯉的增重率、特定生長率分別顯著提高32.25%、26. 19%，飼料系數(shù)顯著降低25.98%；各試驗組成活率、體表色度值無顯著變化；各試驗組的魚體粗蛋白含量、粗脂肪含量、水分含量均無顯著變化，粗灰分含量隨著微生態(tài)制劑添加劑量的增加顯著升高；各試驗組非特異性免疫指標SOD、AKP、LSZ活性均顯著高于對照組，其中0.20‰的添加組最高，分別為69.84 U/m L、12.72 U/m L、14.21μg/m L，較對照組分別顯著提高24.33%、27.70%、26. 00%。綜上，飼料中添加微生態(tài)制劑可顯著提高錦鯉幼魚的生長性能、改善魚體肌肉成分、提高非特異性免疫機能，適宜添加量為0.20‰。

微生態(tài)制劑；生長性能；肌肉組成；體色；免疫

隨著錦鯉養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，特別是集約化養(yǎng)殖程度的不斷提高，病害增加、漁藥殘留等問題日趨明顯，因此，錦鯉健康養(yǎng)殖技術(shù)已受到廣大科研人員的關注［1-2］。微生態(tài)制劑是經(jīng)過人工分離正常菌群后，采用高溫高壓等特殊工藝制成的生物制劑，是目前科學研究和應用的熱點。微生態(tài)制劑可以補充、調(diào)整或維持動物腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，提高機體免疫力，防治疾病，從而達到促進動物生長，增加體質(zhì)量的效果［3-4］。從目前的使用上來看，微生態(tài)制劑具有無毒、無殘留、無副作用及不產(chǎn)生耐藥性等特點，是一種典型的綠色、環(huán)保型生物制劑。羅輝等［5］對鯉（Cyprinus carpio）、Zhou等［6］對羅非魚（Oreochrom is niloticus）、丁賢等［7］對凡納濱對蝦（Penaeus uannamei）、Nayak等［8］對南亞黑鯪（Labeo rohita）、管越強等［9］對中華鱉（Pelodiscus sinensis）等的研究表明，在日糧中添加微生態(tài)制劑能提高水產(chǎn)動物的生長性能、免疫功能，增強抗病力。目前，有關微生態(tài)制劑對錦鯉生長、肌肉組成、體色和非特異性免疫影響的研究較少，僅見白利丹等［10］關于微生態(tài)制劑對錦鯉生長及水質(zhì)影響的研究，張春蘭等［11］關于微生態(tài)制劑和著色劑對錦鯉體色影響的研究。為此，本研究通過在日糧中添加微生態(tài)制劑，探討其在錦鯉養(yǎng)殖中的應用效果，以期為錦鯉的健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試魚來自北京市水產(chǎn)科學研究所小湯山良種繁育中心自行繁育的紅白錦鯉幼魚。試驗用基礎飼料配方及營養(yǎng)成分見表1。微生態(tài)制劑購自康源綠洲生物科技（北京）有限公司，有效活菌數(shù)≥2 000億cfu/g，按分組配比加入基礎飼料的預混料中。

1.2 試驗設計

選取300尾體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊的紅白錦鯉，初始體質(zhì)量（147.22±4.51）g，隨機分配15個小型循環(huán)水養(yǎng)殖缸（1.5 m×1.5 m×1.5 m）內(nèi)，每缸20尾，實際養(yǎng)殖水容積為2.00～2.25 m3。試驗分為5組，1個對照組（Ⅰ組）和4個試驗組（Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組），每組設3個平行。Ⅰ組飼喂基礎飼料，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組在基礎飼料中分別添加不同劑量（0.05‰、0.10‰、0.20‰、0.40‰）的微生態(tài)制劑粉劑。供試魚試養(yǎng)7 d后開始正式試驗，分別投喂對應的試驗飼料，試驗周期為45 d。試驗期和試養(yǎng)期飼養(yǎng)條件相同，養(yǎng)殖用水為地下井水，水溫為（18±1）℃，pH值為7.4，光照為自然光源。每日投喂2次（9：30、17：00），投喂量為魚體質(zhì)量的3%～4%，根據(jù)魚體的攝食情況進行適當調(diào)整。

1.3 樣品采集與分析

試驗開始時，測量每缸供試魚的初始體質(zhì)量，試驗過程中記錄死魚的數(shù)量和質(zhì)量。

養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，禁食24 h，測量每缸供試魚體質(zhì)量，拍照，并統(tǒng)計成活率。每缸隨機選取10尾供試魚，采用常規(guī)方法尾靜脈取血，離心（4℃、5 000 r/min、10 min），制備血清，測定超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（AKP）、活菌酶（LSZ）的活性，上述指標均采用北京澳聯(lián)雅實驗設備中心的試劑盒進行測定。取背部肌肉，-20℃冰箱中保存，用于供試魚肌肉組成分析。

樣品中水分含量測定采用105℃常壓干燥法（GB/T6435—1986）、粗蛋白含量測定采用凱氏定氮法（GB/T 6432—1994）、粗脂肪含量測定采用乙醚抽提法（GB/T 6432—1994）、粗灰分含量測定采用550℃灼燒法（GB/T 6438—1992）。

供試魚體色變化的記錄參照史東杰等［12］研究增艷物質(zhì)對血鸚鵡增艷效果的影響時采用的方法。使用佳能5D MarkⅢ數(shù)碼相機拍照，采用羅氏比色扇（南京銘奧儀器設備有限公司生產(chǎn)）比色，測得色度值。

1.4 測定指標

測定增重率、特定生長率、飼料系數(shù)、成活率。增重率=（終末體質(zhì)量-初始體質(zhì)量）/初始體質(zhì)量×100%；

特定生長率=（ln終末魚體質(zhì)量-ln初始魚體質(zhì)量）/飼養(yǎng)天數(shù)×100%；

飼料系數(shù)=總投喂量/（終末體質(zhì)量+死魚質(zhì)量-初始體質(zhì)量）；

成活率=試驗末魚尾數(shù)/試驗初魚尾數(shù)×100%。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示。采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析，用多重比較法進行組間差異顯著性分析，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉生長性能的影響

由表2可以看出，不同劑量的微生態(tài)制劑對錦鯉生長均有促進作用。與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組增重率、特定生長率均顯著增加，增重率分別提高12.13%、25.03%、32.25%，特定生長率分別提高10. 71%、21.43%、26.19%；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組飼料系數(shù)均顯著降低，分別降低15.35%、15.75%、25.98%；Ⅴ組增重率提高4.94%，特定生長率提高了5.95%，飼料系數(shù)降低了1.97%，但差異均不顯著；不同劑量的微生態(tài)制劑添加組成活率無顯著變化。上述結(jié)果表明，飼料中添加0.20‰微生態(tài)制劑對錦鯉促生長效果最佳。

2.2 飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉肌肉組成的影響

由表3可以看出，不同劑量的微生態(tài)制劑對魚體肌肉粗蛋白含量、粗脂肪含量和水分含量均無顯著性影響，但可有效提高魚體肌肉粗灰分的含量，并具有劑量效應，與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組分別顯著提高了4.52%、9.67%、11.62%、12.24%。

2.3 飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉非特異性免疫指標的影響

由表4可以看出，不同劑量的微生態(tài)制劑添加組非特異性免疫指標SOD、AKP、LSZ均顯著高于對照組，其中0.20‰的添加組最高，較對照組分別顯著提高24.33%、27.70%、26.00%。各添加組血清SOD水平、AKP水平差異顯著（P＜0.05），但各添加組血清LSZ活性差異均不顯著。

2.4 飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉體色的影響

對表5數(shù)據(jù)進行分析發(fā)現(xiàn)，對照組和各添加組的色度值無明顯差異（P＞0.05），說明微生態(tài)制劑不影響錦鯉的體色。

3 結(jié)論與討論

3.1 微生態(tài)制劑與錦鯉生長性能和羅氏色度的關系

前人研究發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑不僅可以促進水產(chǎn)動物健康生長，還可以提高水產(chǎn)動物免疫力，在水產(chǎn)飼料中被廣泛應用［13-14］。本試驗結(jié)果表明，飼料中添加0.20‰微生態(tài)制劑時，錦鯉的增重率、特定生長率分別顯著提高32.25%、26.19%，飼料系數(shù)顯著降低25.98%，說明本試驗中添加的微生態(tài)制劑對錦鯉的生長具有促進作用。本研究結(jié)果與白利丹等［10］對錦鯉、艾炎軍等［15］對大鱗副泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）、劉曉勇等［16］對雜交鱘（Acipenser baeri♂×Acipenser schrenkii♀）幼魚、伍莉等［17］對大口鯰（Silurusmeridionalis）和鯽（Cyprinus carpio）、Gatesoupe等［18］對大菱鲆（Scophthatmusmaχimus）仔魚、潘康成等［19］對鯉、楊奇慧等［20］對奧尼羅非魚（Oreochromisco aureus♂×Oreochrom is niloticus♀）、Wang等［21］對尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）的研究結(jié)果相似，添加微生態(tài)制劑對水產(chǎn)動物的生長都產(chǎn)生了積極作用。

本試驗所使用的微生態(tài)制劑含有枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）、蛋白酶、玉米蛋白粉、藻類營養(yǎng)素、光合催化劑、活性酶、免疫因子及代謝產(chǎn)物等多種物質(zhì)。微生態(tài)制劑本身含有大量的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，另外，在菌體發(fā)酵或代謝過程中，會產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等多種酶類及其他促生長的化合物。魚類攝食后，可促進腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，提高內(nèi)源酶對營養(yǎng)物質(zhì)的降解作用，從而提高魚類的生產(chǎn)性能。根據(jù)本試驗結(jié)果推測，微生態(tài)制劑添加量高于本試驗的最大添加量（0.40‰）時，將降低錦鯉的生長性能。其原因可能是因為魚類攝入大量外源性酶類后，破壞了腸道原有的微生態(tài)平衡，從而影響了魚生長，其具體機制還有待對供試魚腸道消化酶等做進一步研究。

在本試驗中，添加微生態(tài)制劑組的色度值與對照組無明顯差異。但是，通過肉眼觀察，各添加組試驗魚的體色更自然明亮、鮮艷，可能通過投喂微生態(tài)制劑后，對魚體的代謝具有調(diào)節(jié)作用，從而使魚體表現(xiàn)得更加健康。

3.2 微生態(tài)制劑與錦鯉肌肉組成的關系

羅輝等［5］研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加枯草芽孢桿菌、復合芽孢桿菌、加益益生素Ⅰ等3種微生態(tài)制劑對鯉魚體粗蛋白含量、體脂肪含量和水分含量的影響均不顯著，而對灰分含量具有顯著性影響，并具有劑量效應，0.40‰添加組魚體粗灰分含量顯著高于對照組和其他試驗組，這一結(jié)果與本試驗結(jié)果一致。說明微生態(tài)制劑可以促進錦鯉骨骼及礦物質(zhì)的沉積。但楊奇慧等［20］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.1%、0. 2%和0.3%的微生態(tài)制劑均可有效提高奧尼羅非魚魚體粗蛋白含量，但對魚肌肉粗脂肪、粗灰分、水分含量均無顯著性影響。方程等［22］研究發(fā)現(xiàn)，不同添加劑量的微生態(tài)制劑并未顯著影響匙吻鱘（Polyodon spathula）幼魚的肌肉組成成分。通過以上分析，出現(xiàn)不同的研究結(jié)論，究其原因可能與微生態(tài)制劑的種類、有效活菌數(shù)、菌體活性、添加劑量、供試魚品種、規(guī)格、體質(zhì)等密切相關，同時微生態(tài)制劑是否對鯉科魚類均具有促進骨骼生長和礦物質(zhì)沉積的作用，還有待進一步試驗證明。

3.3 微生態(tài)制劑與錦鯉非特異性免疫的關系

SOD是一種重要的抗氧化酶，是機體清除超氧陰離子自由基的首要物質(zhì)，它可對抗和阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，并可及時修復和保護細胞。AKP是溶菌體標志性酶之一，具有催化磷酸單酯水解的作用。LSZ對革蘭氏陰性菌具有強烈的殺菌作用。因此，SOD、AKP、LSZ 3種酶活性的變化情況可以間接反映動物機體生理生態(tài)變化、免疫機能及健康狀況［23-24］。在本試驗中，不同劑量微生態(tài)制劑添加組SOD、AKP、LSZ均高于對照組。0.20‰添加組最高，較對照組分別提高了24.33%、27.70%、26.00%。試驗雖未闡明微生態(tài)制劑與錦鯉免疫功能的直接關系，但表明微生態(tài)制劑的添加對錦鯉非特異性免疫起到了積極的作用，各添加組SOD、AKP、LSZ活性的增加說明微生態(tài)制劑增強了錦鯉抗氧化能力，避免了環(huán)境脅迫對魚體造成的損傷。艾炎軍等［15］研究發(fā)現(xiàn)，添加微生態(tài)制劑組大鱗副泥鰍的SOD、LSZ活力較對照組顯著升高。劉曉勇等［16］研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌能顯著提高雜交鱘幼魚血清LSZ、AKP、總抗氧化能力（T-AOC）及SOD的活性，說明枯草芽孢桿菌可有效提高魚體非特異性免疫能力。吳志新等［25］研究發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑可顯著提高銀鯽（Carassius auratus）血液白細胞吞噬活性和血清LSZ活性。其作用機制可能是錦鯉免疫功能的增強有賴于微生態(tài)制劑中活菌的刺激，即有益菌作為抗原促進了錦鯉免疫器官的發(fā)育，也可能是微生態(tài)制劑改善了錦鯉腸道菌群生態(tài)環(huán)境，提高了機體健康度，從而間接增強了機體對病害的抵抗能力，其具體原因還有待進一步研究［26-27］。

綜上，利用本試驗的方法采集并分析樣品，以生長性能、肌肉成分、體表色度值和血清非特異性免疫指標為評價指標，確定錦鯉配合飼料的微生態(tài)制劑最佳添加比例為0.20‰。

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Effects of Probiotics on Growth Performance，Muscle Composition，Body Colour and Non-specific Immunity of Cyprinus carpio L.

SHIDongjie1，2，3，LIANG Yongjun1，2，3，XU Jinhua4，SUN Yansheng1，2，3，ZHANG Shengli1，2，3
（1.Beijing Fisheries Research Institute，National Engineering Research Center for Freshwater Fisheries，Beijing 100068，China；2.The Ministry of Agriculture Key Laboratory of Urban Agriculture（North），Beijing 100097，China；3.Beijing Key Laboratory of Fisheries Biotechnology，Beijing 100097，China；4.Tianjin Agricultural College，Tian jin 300384，China）

This experiment aims to exp lore the effects of probiotics on growth performance，body composition，body colour and non-specific immunity of Cyprinus carpio L.A 45-day feeding trial was performed to investigate the growth performance，body composition，body colour and non-specific immunity effects of probiotics in Cyprinus carpio L.juveniles.300 juveniles［initial body weight（147.22±4.51）g］were allotted to five groups（three rep licates/group）：a control group without probiotics（Ⅰ）and four treatment groups supp lemented w ith 0.05‰（Ⅱ），0.10‰（Ⅲ），0.20‰（Ⅳ），0.40‰（Ⅴ）.Compared with the control group，growth performance of groupⅣ（0.20‰）was increased by 32.25%（P＜0.05），26.19%（P＜0.05），respectively.But the feed conversion ratio was 25.98%lower than in the control group（P＜0.05）. There were no significant differences in Cyprinus carpio L.juveniles survival rate and body colour between the control group and the treatment groups.Moreover，there were no significant differences in crude pro-tein，crude fat and water content between the control group and the treatment groups，except for crude ash content.The activities of SOD，AKP and LSZwere higher in all treatmentgroups compared with the control group（P＜0.05）.Non-specific immunity index were improved in Cyprinus carpio L.fed diet containing 0. 20‰probiotics（Ⅳ），which was 69.84 U/m L，12.72 U/m L，14.21μg/m L，increased by 24.33%，27.70% and 26.00%compared with the control group.It can be concluded that the addition of probiotics to the diet promotes growth performance，improves muscle composition and enhances non-specific immunity of Cyprinus carpio L.juveniles.Appropriate additive level of probiotics is 0.20‰in the dietary of Cyprinus carpio L.juveniles.

probiotics；growth performance；muscle composition；body colour；immunity

S816.7

A

1004-3268（2017）01-0144-05

2016-06-26

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市觀賞魚創(chuàng)新團隊建設專項資金項目（GSY20160201）；北京淡水魚種質(zhì)資源保存項目（KJCX20140112）；北京市農(nóng)林科學院觀賞魚與熱水性名優(yōu)魚類創(chuàng)新團隊項目（BJRKYGSYTD2016）

史東杰（1985-），女，北京人，工程師，碩士，主要從事觀賞魚繁育及養(yǎng)殖技術(shù)研究工作。E-mail：sdj19850104@163.com